光學(xué)顯微鏡下非糜爛性反流病食管遠(yuǎn)端上皮細(xì)胞間隙的變化

陳文科+鄒兵+鄭愛萍+郭海

【摘要】 目的 通過光學(xué)顯微鏡（簡稱光鏡）對非糜爛性反流?。∟ERD）患者食管鱗狀上皮細(xì)胞間隙增寬（DIS）進(jìn)行研究， 探討食管鱗狀上皮細(xì)胞間隙的變化情況及意義。方法 NERD患者（25例， NERD組）和正常對照者（20 例， 正常對照組）作為研究對象行胃鏡檢查， 并在食管遠(yuǎn)端齒狀線上方2 cm處取一塊黏膜組織， 常規(guī)HE染色， 在光鏡下觀察上皮細(xì)胞間隙情況并采集圖像進(jìn)行測量。結(jié)果 NERD組食管鱗狀上皮細(xì)胞的平均細(xì)胞間隙、最小細(xì)胞間隙、最大細(xì)胞間隙均大于正常對照組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 光鏡測量可作為研究NERD食管鱗狀上皮細(xì)胞間隙增寬的一種簡單、實用方法， 對探討細(xì)胞間隙增寬在NERD發(fā)病機制和臨床診斷中的意義具有重要作用。

【關(guān)鍵詞】 非糜爛性反流?。患?xì)胞間隙；光學(xué)顯微鏡

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.07.010

胃食管反流病（gastroesopheal reflux disease， GERD）是消化科門診最常見的疾病之一， 根據(jù)胃鏡下表現(xiàn)分為反流性食管炎、非糜爛性反流?。╪on-erosive reflux disease， NERD）及Barrett食管。NERD是GERD的主要類型， 約占GERD的70%。NERD由于內(nèi)鏡下食管黏膜無破損表現(xiàn)， 臨床診斷相對困難。有研究表明， NERD患者雖然在內(nèi)鏡下無黏膜破損等異常病變， 但顯微鏡下可觀察到細(xì)胞間隙增寬（dilated intercellular space， DIS） 等微小病變[1]。作者前期采用透視電鏡對NERD患者遠(yuǎn)端食管上皮細(xì)胞間隙的變化進(jìn)行了研究， 證實NERD患者食管鱗狀上皮細(xì)胞間隙較正常對照者明顯增寬[2]。本實驗通過光鏡對NERD患者食管遠(yuǎn)端鱗狀上皮細(xì)胞間隙進(jìn)行了研究， 從不同角度了解DIS的變化情況及意義， 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2013年6月～2014年6月到本院消化內(nèi)科就診并診斷為NERD的患者25例（NERD組）， 年齡20～70歲。NERD診斷標(biāo)準(zhǔn)：具有3個月以上反酸、燒心等反流癥狀， 胃鏡檢查食管黏膜無破損， 食管24 h pH值監(jiān)測陽性和（或）質(zhì)子泵抑制劑（PPI）試驗陽性。正常對照組為無反流癥狀、胃鏡檢查食管未見異常病變的健康體檢者20例。排除標(biāo)準(zhǔn)：上消化道手術(shù)史、消化性潰瘍、糖尿病、硬皮病、惡性腫瘤、妊娠及哺乳期婦女， 嚴(yán)重心、肺、肝、腎功能障礙者， 入選前2周內(nèi)服用過抑酸藥物者。正常對照組男8例， 女12例， 平均年齡（30.2±10.1）歲；NERD組男12例， 女13例， 平均年齡（35.0±14.0）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 研究方法 食管遠(yuǎn)端鱗狀上皮細(xì)胞間隙測量：研究對象胃鏡檢查時在食管遠(yuǎn)端齒狀線上方2 cm處活檢一塊黏膜組織， 黏膜組織取出后迅速置于10% 福爾馬林溶液固定， 然后經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋制成蠟塊， 切片后行HE染色。在光鏡下（×1000）觀察食管上皮細(xì)胞間隙情況并采集圖像， 應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)對基底上層細(xì)胞間隙進(jìn)行測量。每例樣本測量10個細(xì)胞， 每個細(xì)胞連續(xù)測量10個細(xì)胞間隙， 計算每例樣本的細(xì)胞間隙均值。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

NERD組食管鱗狀上皮細(xì)胞的平均細(xì)胞間隙、最小細(xì)胞間隙、最大細(xì)胞間隙均大于正常對照組， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。附圖1， 圖2。見表1。

3 討論

GERD是指胃內(nèi)容物反流引起的不適癥狀和（或）并發(fā)癥的一種疾病， 臨床上主要表現(xiàn)為反流、燒心等癥狀。在歐美的發(fā)病率達(dá)到10%～20%[3， 4]。我國1996年上海和北京的GERD患病率調(diào)查結(jié)果為5.77%[5]， 廣東社區(qū)人群調(diào)查每周有燒心癥狀的患病率為6.2%[6]。NERD是GERD的主要類型， 由于內(nèi)鏡下食管黏膜無破損表現(xiàn)， 臨床診斷相對困難。研究表明， NERD患者雖然在胃鏡下無明顯異常表現(xiàn)， 但顯微鏡下觀察存在食管黏膜上皮細(xì)胞間隙的增寬， 但多為定性和半定量研究。近年來， 有學(xué)者對食管鱗狀上皮細(xì)胞間隙的超微結(jié)構(gòu)在透射電鏡下進(jìn)行了定量研究， 發(fā)現(xiàn)GERD患者細(xì)胞間隙較對照者明顯增寬， 經(jīng)PPI治療后細(xì)胞間隙隨著反流癥狀的改善亦減小或恢復(fù)正常， 因此提出DIS可作為NERD診斷的客觀結(jié)構(gòu)指標(biāo)[1， 7-9]。作者既往用透射電鏡也發(fā)現(xiàn)NERD患者食管下段細(xì)胞間隙較正常對照者明顯增寬。針對臨床上廣泛應(yīng)用的光鏡能否對細(xì)胞間隙進(jìn)行定量檢測， 國內(nèi)學(xué)者崔榮麗等[10]將HE染色切片在光鏡下放大1000倍進(jìn)行觀察， 發(fā)現(xiàn)光鏡下測量細(xì)胞間隙是可行的， 測量結(jié)果與電鏡測量數(shù)據(jù)比較具有較好的一致性。本研究結(jié)果顯示， NERD患者光鏡下食管鱗狀上皮細(xì)胞平均細(xì)胞間隙、最小細(xì)胞間隙、最大細(xì)胞間隙均較正常對照組明顯增寬， 與既往電鏡研究結(jié)果一致。細(xì)胞間隙增寬后通透性增加， 胃酸、胃蛋白酶、膽汁等損害因子進(jìn)入上皮細(xì)胞并對其造成進(jìn)一步損傷， 同時刺激神經(jīng)末梢， 產(chǎn)生燒心等反流癥狀。電鏡檢測細(xì)胞間隙精確， 但設(shè)備昂貴， 操作復(fù)雜， 費用較高， 普通醫(yī)療機構(gòu)不易開展， 難以在廣大醫(yī)療單位普及。光鏡在臨床上廣為應(yīng)用， 通過光鏡對細(xì)胞間隙進(jìn)行定量測量可在大多數(shù)醫(yī)療機構(gòu)開展， 可作為研究NERD患者食管鱗狀上皮細(xì)胞間隙增寬的一種簡單、實用方法， 對探討細(xì)胞間隙增寬在NERD發(fā)病機制和臨床診斷中的意義具有重要作用。

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[收稿日期：2015-11-12]