雞傳染性法氏囊病亞單位滅活疫苗免疫SPF雞瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)相關(guān)性試驗(yàn)

王 雷　凌紅麗　曲信芹　張園園?。ㄇ鄭u蔚藍(lán)生物股份有限公司　山東 青島　266114）

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雞傳染性法氏囊病亞單位滅活疫苗免疫SPF雞瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)相關(guān)性試驗(yàn)

王 雷凌紅麗*曲信芹張園園（青島蔚藍(lán)生物股份有限公司山東 青島266114）

摘要為了探討雞傳染性法氏囊病(IBD)亞單位滅活疫苗瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)之間的相關(guān)性，為血清學(xué)效力檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)，用試驗(yàn)室試制的3批雞傳染性法氏囊病基因工程亞單位滅活疫苗以不同劑量分別免疫21日齡SPF雞，免疫后21日采血分離血清并用強(qiáng)毒攻擊，將每只雞的瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)情況一一對(duì)應(yīng)，結(jié)果顯示IBD瓊擴(kuò)抗體效價(jià)不低于1:1的雞均可以抵抗強(qiáng)毒攻擊，表明瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)具有一定的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞雞傳染性法氏囊病瓊擴(kuò)抗體效價(jià)攻毒保護(hù)相關(guān)性

雞傳染性法氏囊病(infectious bursal disease, IBD)是危害雛雞的一種急性、高度接觸性、病毒性傳染病。病原為雞傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease irus, IBDV)[1]。目前該病已遍布全球養(yǎng)禽地區(qū)，在工業(yè)化養(yǎng)禽業(yè)發(fā)達(dá)地區(qū)尤為嚴(yán)重。鄺榮祿于1979年在廣州首先發(fā)現(xiàn)我國(guó)存在該病，此后北京、上海等地發(fā)現(xiàn)了該病[2, 3]。1990年以后，我國(guó)報(bào)道分離到IBD超強(qiáng)毒株和變異毒株，使該病出現(xiàn)了新的流行特點(diǎn)，給我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)造成了很多的經(jīng)濟(jì)損失[4]。

常規(guī)疫苗存在的潛在免疫病理作用是無(wú)法克服的缺陷，對(duì)病毒不斷變異也束手無(wú)策。另一方面，基因工程疫苗或藥物的生產(chǎn)越來(lái)簡(jiǎn)易并趨于產(chǎn)業(yè)化，這些都是傳統(tǒng)疫苗無(wú)法比擬的。VP2蛋白是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白和宿主保護(hù)性抗原，也是病毒衣殼的主要成分，與病毒中和抗體的誘導(dǎo)與識(shí)別、病毒毒力變異、病毒的抗原漂移、細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)等有很大關(guān)系[5, 6]，為此，采用近年流行的超強(qiáng)毒株制備了IBD VP2亞單位滅活疫苗。為了解雞傳染性法氏囊病亞單位滅活疫苗免疫雞只瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)之間是否存在一定的相關(guān)性，將不同批次的疫苗以不同的免疫劑量免疫SPF雞后測(cè)定瓊擴(kuò)抗體效價(jià)并攻毒，現(xiàn)將試驗(yàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1疫苗將表達(dá)IBDV VP2的重組大腸桿菌發(fā)酵菌體破碎后離心取上清，純化后檢測(cè)其瓊擴(kuò)效價(jià)，調(diào)整至不低于1:16用于配苗，水相:油相為1:3。制備3批疫苗，批號(hào)分別為201001、201002、201003，100ml/瓶，經(jīng)各項(xiàng)檢驗(yàn)合格，置2~8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2SPF雞120只SPF雞購(gòu)自北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

1.1.3攻毒用的毒種雞傳染性法氏囊病病毒BC6/85株，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.1.4診斷抗原雞傳染性法氏囊病瓊擴(kuò)診斷抗原購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2方法

將120只21日齡SPF雞隨機(jī)分成12組，每組10只，分別接種3個(gè)批次疫苗，每個(gè)批次的疫苗肌肉注射接種劑量分別為0.05、0.1、0.2、0.3ml，另10只不接種作為對(duì)照，免疫后21日采血，采用瓊擴(kuò)方法檢測(cè)抗體，并點(diǎn)眼攻IBD強(qiáng)毒0.1ml?只(實(shí)含病毒量為100BID)，觀察記錄發(fā)病情況并于攻毒后72~96h剖檢，觀察法氏囊病變。具體試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案見(jiàn)表1。

表1　雞IBD亞單位滅活疫苗在SPF雞瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)試驗(yàn)方案

2　結(jié)果

3批疫苗以不同劑量肌肉注射21日齡SPF雞，21日后測(cè)血清瓊擴(kuò)效價(jià)同時(shí)用100BID的強(qiáng)毒BC6/85攻毒，結(jié)果顯示不同批次、不同劑量IBD亞單位滅活疫苗免疫的SPF雞，當(dāng)免疫劑量為0.05ml/只時(shí)，部分免疫雞瓊擴(kuò)抗體效價(jià)轉(zhuǎn)陽(yáng)，攻毒保護(hù)數(shù)為5/10~7/10；免疫劑量為0.1ml/只時(shí)，少數(shù)免疫雞的瓊擴(kuò)抗體效價(jià)為陰性，攻毒保護(hù)數(shù)為當(dāng)瓊擴(kuò)抗體效價(jià)為8/10~9/10；免疫劑量為0.2ml/只以上時(shí)，免疫雞只瓊擴(kuò)抗體均為陽(yáng)性，攻毒保護(hù)數(shù)均為10/10。將每只雞的瓊擴(kuò)抗效價(jià)與攻毒保護(hù)情況進(jìn)行一一對(duì)照，表明瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)具有相關(guān)性。具體試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2　不同劑量IBD亞單位疫苗免疫SPF雞瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒結(jié)果

3　討論

3.1雞只的個(gè)體差異

不同批次疫苗相同免疫劑量攻毒保護(hù)結(jié)果不同可能由于雞只的個(gè)體差異。不同批次IBD亞單位滅活疫苗免疫的SPF雞，當(dāng)免疫劑量為0.05ml/只時(shí)，攻毒保護(hù)數(shù)為5/10~7/10；免疫劑量為0.1ml/只時(shí)，攻毒保護(hù)數(shù)為當(dāng)瓊擴(kuò)抗體效價(jià)為8/10~ 9/10。不同批次疫苗免疫劑量相同時(shí)，保護(hù)率存在一定差異，推測(cè)可能是由于雞只的個(gè)體差異造成的這一結(jié)果。

3.2抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

采用實(shí)驗(yàn)室制備的3批雞傳染性法氏囊病VP2亞單位疫苗以不同免疫劑量免疫21日齡SPF雞，免疫后21日采血分離血清測(cè)定瓊擴(kuò)抗體效價(jià)并用BC6/85株強(qiáng)毒以100BID/只劑量攻毒，攻毒后72~96h剖殺所有試驗(yàn)雞，觀察法氏囊病變，將每只雞的瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)情況一一對(duì)應(yīng)，結(jié)果顯示，所有瓊擴(kuò)抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)的雞只均能抵抗強(qiáng)毒的攻擊，瓊擴(kuò)抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)具有一定的相關(guān)性，但由于本文所用的疫苗批次及試驗(yàn)雞數(shù)量有限，瓊擴(kuò)抗體效價(jià)轉(zhuǎn)陽(yáng)雞只是否一定能獲得攻毒保護(hù)尚需大規(guī)模的試驗(yàn)驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

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收稿日期：（2015–11–27）

*通訊作者。

基金項(xiàng)目：青島市戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)培育計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：13-4-1-9-nsh-2)

中圖分類號(hào)：S858.31

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-1733(2016)02-0002-02