DPC4和Smurf2在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)及臨床意義

張　新，何　濤，蔡陽陽，梁麗丹，袁紅瑛

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·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

DPC4和Smurf2在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)及臨床意義

張新1，何濤1，蔡陽陽1，梁麗丹1，袁紅瑛2

摘要：目的檢測胰腺癌缺失基因(DPC4)及Smad泛素化調(diào)節(jié)因子2(Smurf2)在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生及子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)，探討兩者與子宮內(nèi)膜腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法采用免疫組化SP法檢測DPC4和Smurf2在上述3種組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合年齡、病理分期、組織學(xué)分級、肌層浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果與增殖期子宮內(nèi)膜表達(dá)相比在子宮內(nèi)膜腺癌中，DPC4呈低表達(dá)，而Smurf2呈高表達(dá)(均P<0.05)，兩者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.525，P<0.05)，兩因子在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)均與其病理分級和臨床分期相關(guān)(均P<0.05)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌腫浸潤肌層深度及年齡無關(guān)(均P>0.05)。結(jié)論DPC4和Smurf2均與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，兩者均與其病理分級和臨床分期有關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及癌腫浸潤肌層深度無關(guān)，可作為腫瘤惡性程度及預(yù)后指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜腺癌；DPC4；Smurf2；免疫組化

作者單位：1.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南洛陽 471003

2.河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河南洛陽 471003

子宮內(nèi)膜腺癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，占女性生殖道惡性腫瘤的 20%～30%[1]，在美國位居女性惡性腫瘤第4位，而在我國發(fā)病率居婦科惡性腫瘤第2位，并且發(fā)病人群也越來越年輕[2]。雖然有外科手術(shù)、放療、化療等、治療手段，但針對腫瘤復(fù)發(fā)，對放療和化療抵抗的患者，仍然迫切需要替代療法[3]。因而，針對腫瘤標(biāo)志物或信號通路的靶向分子治療策略逐漸成為研究熱點[4]。本研究收集河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院手術(shù)切除子宮內(nèi)膜石蠟標(biāo)本91例，應(yīng)用免疫組化技術(shù)比較胰腺癌缺失基因(deleted in pancreatic cancer locus 4,DPC4)和Smad泛素化調(diào)節(jié)因子2(smad ubiquitin regulatory factor 2,Smurf2)在子宮內(nèi)膜腺癌表達(dá)情況，探討兩者與子宮內(nèi)膜腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料收集河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院2006年1月至2009年1月手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜標(biāo)本91例。其中，子宮內(nèi)膜腺癌石蠟標(biāo)本53例，術(shù)前均未行放、化療以及激素治療，所有診斷均經(jīng)手術(shù)后病理組織學(xué)確定。參照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(federation international of gynecology and obstetrics，F(xiàn)IGO) 2009年手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期18例，其中高分化(G1)10例，中分化(G2)31例。低分化(G3)12例；肌層浸潤深度<1/2肌層29例，≥1/2肌層24例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例；年齡<50歲24例，≥50歲29例。選取手術(shù)切除的增殖期子宮內(nèi)膜組18例，子宮內(nèi)膜不典型增生組20例作為對照組。

1.2方法每塊石蠟標(biāo)本持續(xù)切片5 μm，并通過免疫組化SP法(streptavidin-peroxidase，SP)檢測，分別檢測子宮內(nèi)膜腺癌、子宮內(nèi)膜不典型增生及增殖期子宮內(nèi)膜組織中DPC4和Smurf2的表達(dá)。操作嚴(yán)格按照DPC4和Smurf2免疫組化試劑盒(北京博奧森公司)說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：兩因子陽性表達(dá)均位于胞質(zhì)，根據(jù)染色程度和陽性細(xì)胞數(shù)綜合計算評分。染色程度：未染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞數(shù)：10個隨機高倍鏡視野下無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞平均百分?jǐn)?shù)<25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。最后計算a+b之和0～3分為陰性，>4分為陽性。

1.3統(tǒng)計方法采用SPSS16. 0統(tǒng)計軟件分析，計數(shù)資料采用百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗及Spearman等級相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1DPC4在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)DPC4在53例子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)率為33.96%，低于在18例增殖期子宮內(nèi)膜組的88.89%(χ2=16.244，P<0.001)和20例不典型增生組的55.00%(χ2=2.684，P>0.05)；3組比較χ2=16.533，P<0.001，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。DPC4在增殖期子宮內(nèi)膜組表達(dá)，見圖1。DPC4在子宮內(nèi)膜不典型增生組表達(dá)，見圖2。

圖1　DPC4在增殖期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(SP，×200)

圖2　DPC4在不典型增生子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(SP，×200)

2.2Smurf2在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)Smurf2在53例子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)率為83.02%，高于在18例增殖期子宮內(nèi)膜組的44.44%(χ2=10.201，P<0.05)和20例不典型增生組的60.00%(χ2=4.307,P>0.05)；三組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.892，P<0.005)。Smurf2在子宮內(nèi)膜不典型增生組表達(dá)，見圖3。

圖3　Smurf2在不典型增生子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(SP，×200)

2.3DPC4和Smurf2在子宮內(nèi)膜腺癌的表達(dá)DPC4在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)率與病理分級和臨床分期呈負(fù)相關(guān)，在病理分級中的表達(dá)逐漸降低(χ2=6.489，P<0.05)，隨著臨床分期的增高而降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.346，P<0.05)；而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌腫浸潤肌層深度及年齡無關(guān)(均P>0.05)。Smurf2在子宮內(nèi)膜腺癌的表達(dá)與病理分級和臨床分期呈正相關(guān)，在高分化、中分化和低分化分級中的表達(dá)逐漸增高(χ2=11.701，P<0.05)；隨著臨床分期的增高而增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.900，P<0.05)；而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌腫浸潤肌層深度及年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。DPC4與Smurf2在子宮內(nèi)膜腺癌表達(dá)情況分別見圖4、圖5。

圖4　DPC4在中分化子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)(SP，×400)

圖5　Smurf2在中分化子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)(SP，×400)

例(%)

2.4DPC4與Smurf2表達(dá)的關(guān)系在53例子宮內(nèi)膜腺癌組織中，DPC4陽性表達(dá)18例，陰性表達(dá)35例；Smurf2陽性表達(dá)44例，陰性表達(dá)9例；DPC4和Smurf2共同陽性表達(dá)為10例，共同陰性表達(dá)為1例。采用Spearman等級相關(guān)分析，DPC4和Smurf2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.525,P<0.001)。

3討論

子宮內(nèi)膜腺癌是常見的惡性腫瘤，且發(fā)病年齡也越來越低，對女性的健康產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。對子宮內(nèi)膜腺癌復(fù)發(fā)、放療和化療抵抗的患者，腫瘤標(biāo)志物或信號通路的靶向分子治療策略逐漸成為研究熱點。DPC4位于染色體18q21.1上，與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展過程有極其密切的關(guān)系[5]。DPC4是胰腺癌發(fā)生發(fā)展中比較特異的腫瘤抑制基因[7]，首先由Hahn等于1996年報道[6]。它編碼的DPC4蛋白與果蠅的MAD(mather against pp-de-capentaplgic)和線蟲的Smad2、Smad3、Smad4蛋白同源[8]，所以DPC4亦稱Smad4。Smad4是轉(zhuǎn)移生長因子β(TGF-β)信號傳導(dǎo)通路的中心分子[9]，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖分化與凋亡。經(jīng)典的TGF-β，Smad依賴性信號通路，主要通過TGF-β結(jié)合于的TGF-βⅠ類受體(ALK-5)/Ⅱ類受體復(fù)合體，使Ⅰ類受體激活并產(chǎn)生磷酸化，促使Smad2、Smad3蛋白激活并磷酸化，后者與Smad4結(jié)合形成三聚體復(fù)合體。這種復(fù)合體進(jìn)入并聚集于細(xì)胞核，調(diào)控靶基因的表達(dá)[10]，抑制腫瘤細(xì)胞增殖。本研究中DPC4在子宮內(nèi)膜腺癌組中的表達(dá)低于在增殖期子宮內(nèi)膜組及不典型增生子宮內(nèi)膜組，并與子宮內(nèi)膜腺癌病理分級和臨床分期相關(guān)，但DPC4的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及癌腫浸潤肌層深度無關(guān)，提示其可能在子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

Smurf2屬于泛素蛋白水解酶途徑中的E3泛素連接酶，TGF-β信號通路中Smad7又稱為抑制性Smad蛋白[11]，主要與激活后的TGF-β1類受體結(jié)合，并阻止信號在ALK-5至Psmad2/3與Smad4之間傳遞，而Smurf2主要存在于TGF-β信號通路中與Smad7結(jié)合，增強Smad7在TGF-β信號系統(tǒng)中的抑制效應(yīng)，另一方面Smurf2介導(dǎo)Smad2、Smad3和Smad4三聚體復(fù)合體的降解，抑制TGF-β信號通路的活性[12]，從而促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究中Smurf2在子宮內(nèi)膜腺癌組中的表達(dá)高于增殖期子宮內(nèi)膜組及不典型增生子宮內(nèi)膜組，與病理分級和臨床分期相關(guān)，也與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及癌腫浸潤肌層深度無關(guān)，提示其也可能在子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。

DPC4和Smurf2共同通過TGF-β信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，共同參與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生發(fā)展，而且兩者在子宮內(nèi)膜腺癌的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，聯(lián)合檢測兩個因子可能對子宮內(nèi)膜腺癌的復(fù)發(fā)和預(yù)后提供檢測指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：

[1]謝幸,茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M]. 8版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:313-317.

[2]Dowdy SC,Borah BJ,Bakkum-Gamez JN,et a1.Factors predictive of postoperative morbidity and cost in patients with endometrial cancer[J].Obstet Gynecol,2012,120(6):1419-1427.

[3]Kyo S, Maida Y, Inoue M. Stem cells in endometrium and endometrial cancer: accumulating evidence and unresolved questions[J].Cancer Lett ,2011,308 (2):123-133.

[4]Millis SZ,Ejadi S,Demeure MJ.Molecular profiling of refractory adrenocortical cancers and predictive biomarkers to therapy[J].Biomark Cancer,2015,7:69-76.

[5]李贊濱,孫大偉,邱法波,等.胰腺癌組織中MUC1和hTERT 及DPC4的表達(dá)及意義[J].中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展,2013,16(11):850-854.

[6]Hahn SA,Schutte M,Hoque AT,et al.DPC4,a candidate tumor suppressor gene at human chromosome 18q21[J].Science,1996,271(5247):350-353.

[7]Perren A,Saremaslani P,Schmid S,et al.DPC4/Smad4: no mutations,rare allelic imbalances,and retained protein expression in pancreatic endocrine tumors[J],Diagn Mol Pathol,2003,12(4):181.

[8]Yingling JM,Datto MB,Wong C,et al.Tumor suppressor SMAD4 is transforming growth factor β-inducible DNA binding protein[J].Mol Cell Biol,1997,17(12) :19-28.

[9]王大東.DPC4基因與腫瘤[J].國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊),2000,20(3):169-172.

[10]潘大彬.探討PDGF-BB對VSMCs內(nèi)TGF-β-1及其信號系統(tǒng)的影響以及其調(diào)節(jié)VSMCs內(nèi)PCNA表達(dá)的機制[D].南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院,2007.

[11]Abd EI-Fattah AA,Sadik NA,Shaker OG,et al.Are Smad7 rs4939827 and CHI3L1 rs4950928 polymorphisms associate with colorectal cancer in Egyptian patients[J].Tumour Biol,2016,16:1-11.

[12]Li X,Diao Z,Ding J,et al.The downregulation of SnoN expression in human renal proximal tubule epithelial cells under high glucose conditions is mediated by an increase in Smurf2 expression through TGF-β1 signaling[J].Int J Mol Med,2015,31(10):415-422.

Expression and Clinical Significance of DPC4 and Smurf2 in Endometrial Carcinoma

ZHANG Xin1, HE Tao1, CAI Yang-yang1, LIANG Li-dan1, YUAN Hong-ying2

(1.First Affiliated Hospital,Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003,China；2.Medical College,Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003,China)

Abstract:ObjectiveTo detect the expression of deleted in pancreatic cancer locus (DPC4) and Smad ubiquitin regulatory factor 2 (Smurf2) in the normal endometrium, atypical hyperplasia and endometrial adenocarcinoma, and explore the relationship between the expression and the development of endometrial adenocarcinoma.MethodsThe immunohistochemistry of streptavidin-peroxidase method was used to detect the expression of DPC4 and Smurf2 in the endometrial tissue. The relationship were analyzed between the expression and clinical characteristics of age, pathological stage, differentiation degree, tumor invasive depth and lymph node metastasis. ResultsDPC4 was lowly expressed in endometrial adenocarcinoma, however Smurf2 was showed high expression (P<0.05). The expression of the two facters were a negative correlation in endometrial adenocarcinoma (r=-0.525, P<0.05). They were correlation with the pathological grade and clinical stage of endometrial adenocarcinoma (P<0.05), but not a relationship between the expression and lymph node metastasis, tumor invasive depth and age (P>0.05). ConclusionDPC4 and Smurf2 were correlation with the development of endometrial adenocarcinoma. The expression of two factors were correlation with the pathological grade and clinical stage, but not with lymph node metastasis,tumor invasive depth. It can be used as an indicator malignant degree and prognosis of endometrial adenocarcinoma.

Key words:endometrial adenocarcinoma；deleted in pancreatic cancer locus 4；smad ubiquitin regulatory factor 2；immunohistochemistry

通信作者：袁紅瑛，女，教授，E-mail:125492984@qq.com

作者簡介：張新(1987-)，女，河南安陽人，醫(yī)師，從事婦科腫瘤研究工作。

收稿日期：2016-01-02

中圖分類號：R737.33

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.01.001

文章編號：1672-688X(2016)01-0001-04