中藥材茯苓炮制提取工藝研究進(jìn)展*

方　毅，許鳳清，金傳山,2，劉夢迪，胡　雨

(1 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽　合肥　230012；2 安徽道地中藥材品質(zhì)協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽　合肥　230012)

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中藥材茯苓炮制提取工藝研究進(jìn)展*

方毅1，許鳳清1，金傳山1,2，劉夢迪1，胡雨1

(1 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽合肥230012；2 安徽道地中藥材品質(zhì)協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽合肥230012)

茯苓有很好的藥用價(jià)值，其應(yīng)用歷史悠久，為中國傳統(tǒng)的常用大宗類中藥材之一。本研究對近年來國內(nèi)外期刊中有關(guān)茯苓研究的文獻(xiàn)進(jìn)行檢索和綜述，總結(jié)了炮制歷史沿革、現(xiàn)代研究及對其化學(xué)成分影響、茯苓多糖提取純化方法等研究進(jìn)展，指出了目前茯苓在炮制、提取純化過程中存在的主要問題，為更好地開發(fā)利用茯苓價(jià)值研究提供參考依據(jù)。

茯苓；炮制；歷史沿革；提取純化工藝；研究進(jìn)展

茯苓為多孔菌科真菌茯苓(poriacocos(schw)Wolf)的干燥菌核，作為我國傳統(tǒng)常用中藥材，其味淡，性平，入心、脾、腎經(jīng)，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究證明，具有利水滲濕、健脾補(bǔ)中、寧心安神，抑菌、抗腫瘤、抗炎、抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力及降低血糖等功效；主要用于治療小便不利、水腫、脾胃氣虛、食少便塘、體倦乏力及心神不寧、心悸、失眠等癥[1-3]。茯苓多糖、三帖類化合物(茯苓酸、茯苓素)等為茯苓的主要有效物質(zhì)，其中茯苓多糖含量約占茯苓干燥菌核的93%[4]。由于質(zhì)量控制指標(biāo)與炮制工藝較為粗陋簡單，且全國范圍內(nèi)尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致不同批次不同規(guī)格之間的質(zhì)量存在較大差異，因此本研究將茯苓早期到近期，特別是近5年來對茯苓炮制及提取純化研究進(jìn)行分類總結(jié)，主要包括炮制歷史沿革、炮制方法對茯苓藥材化學(xué)成分、有效成分溶出率以及藥效的影響、茯苓多糖提取純化工藝等，指出目前茯苓炮制、提取及純化方法存在的主要問題，以期為更好地開發(fā)利用茯苓提供理論基礎(chǔ)。

1　茯苓加工炮制歷史沿革

炮制是中藥材在應(yīng)用或制成劑型前，必須要經(jīng)過的加工處理環(huán)節(jié)[5]。目前各產(chǎn)地茯苓的炮制多為作坊式分散加工，雖根據(jù)市場需求，加工成多種需求、劑型及規(guī)格，但存在不規(guī)范，飲片質(zhì)量不易控制等問題。

1.1古代本早記錄

茯苓炮制歷史久遠(yuǎn)，其炮制方法最早可追溯至《雷公炮制論》，其載有：“茯苓去皮、心，搗細(xì)，于水盆中攪濁，浮者濾去之”[6]。梁代《本草經(jīng)集注》載：“削除黑皮”。唐代的《千金翼方》、《新修本草》分別對茯苓的切制規(guī)格及煮制方法做了初步規(guī)定。宋代，在沿用前人炮制方法基礎(chǔ)上，在炮制工藝、輔料應(yīng)用及劑型規(guī)格等方面做了較為大的改進(jìn)與創(chuàng)新?！镀諠?jì)本事方》中新增：“切，微炒”炒制方法。同時(shí)《太平惠民和濟(jì)局方》、《傳信適用方》及《洪代經(jīng)驗(yàn)集成》分別新增“剉”、“水飛”、“木臼粉粹”等切制方法?！缎ＷD人良方》有記載，輔料制法包括豬苓制和乳制兩種。金元時(shí)期，則出現(xiàn)焙制(《世醫(yī)得效方》)、酒制(《湯液本草》)、煨制(《衛(wèi)生寶鑒》)、蒸制(《儒門事親》)等炮制方法。明清在歷代炮制沿革基礎(chǔ)上，茯苓的炮制工藝及輔料應(yīng)用得到了進(jìn)一步的發(fā)展。創(chuàng)制了天花粉制(明·《普濟(jì)方》)、砂仁制(明·《外科正宗》)、(清·《時(shí)病論》)、姜汁制(清·《幼幼集成》)、土炒制(清·《婦科玉尺》)等方法。同時(shí)乳法和酒制法也得到了豐富[7]。

1.2茯苓加工炮制的現(xiàn)代研究

現(xiàn)行2010版藥典的炮制方法為：取茯苓1個(gè)，浸泡、洗凈、潤后稍蒸、及時(shí)切去皮和塊或切厚片曬干[8]。目前，常用的是經(jīng)“發(fā)汗”后切制，近來有不少關(guān)于“發(fā)汗”過程量化指標(biāo)的報(bào)道。李明顯等先后對茯苓的采收及炮制方法進(jìn)行研究，認(rèn)為茯苓采收以7月至次年3月為好，采收后經(jīng)過“發(fā)汗”處理后才能切制[9]。許臘英等以茯苓多糖為主要考察目標(biāo)，確定了茯苓的最佳炮制工藝：發(fā)汗2次，加12培量水，洗2次，每次洗3 min，蒸20 min，趁熱去皮切成大小約為0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的茯苓丁于60烘8 h，其間翻動(dòng)2次[10]。賀海花等以多糖和總糖為指標(biāo)，確定了茯苓的最佳炮制工藝：取發(fā)汗后的茯苓個(gè)，加水浸泡24 h，取出置適當(dāng)容器內(nèi)，用濕布蓋上，再取其質(zhì)量30%的水撒在布上，待水分完全吸收后，將茯苓個(gè)放置在蒸鍋內(nèi)蒸40 min，趁熱取出切制成不同規(guī)格，最后將茯苓片放置于60 ℃烘箱內(nèi)干燥[11-12]。王海燕等[13]通過正交實(shí)驗(yàn)獲得了茯苓炮制的最佳工藝：趁鮮去皮，切制成厚片或丁，于70 ℃烘干。毛維倫等[14]通過薄層色層析法分析比較茯苓神和茯苓所含成分的差異，認(rèn)為茯神塊炮制規(guī)格不宜過大，每個(gè)重量差異應(yīng)控制在6 g左右。劉秀英等通過浸泡、蒸煮的小實(shí)驗(yàn)認(rèn)為茯苓片的切制規(guī)格應(yīng)為2 mm以下的薄片[15]。

2　不同炮制方法對茯苓化學(xué)成分的影響

通過檢索文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前針對炮制方法對茯苓化學(xué)成分研究的相關(guān)文獻(xiàn)研究較少。雷高明等[16]通過以浸出物、多糖和總糖含量、HPLC色譜圖等手段來考察茯苓趁鮮加工與發(fā)汗后對其自身化學(xué)成分的影響，認(rèn)為趁鮮處理的水溶性浸出物含量較發(fā)汗后處理的飲片含量要高，數(shù)據(jù)顯示：趁鮮與發(fā)汗后處理的茯苓丁(1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm)、片(厚0.2 cm)水溶性浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.46%，2.29%，2.15%，2.28%；對堿溶性浸出物影響不明顯，數(shù)據(jù)表明：趁鮮與發(fā)汗后處理的茯苓丁(1.0 cm×1.0 cmx l.0 cm)、片(厚0.2 cm)的堿溶性浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為92.11%，93.10%，93.83%，92.79%；趁鮮處理的茯苓片總糖和多糖含量較發(fā)汗后的茯苓片均高，然而茯苓丁則剛好相反，數(shù)據(jù)顯示：趁鮮與發(fā)汗后處理的茯苓片(厚0.2 cm)總糖與多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.37%，1.13%，0.89%，0.85%，趁鮮與發(fā)汗后處理的茯苓丁(1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm)總糖與多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.23%，0.12%，0.88%，0.87%；炮制前后茯苓飲片HPLC色譜圖主要峰群的整體圖貌基本一致，但化學(xué)成分含量存在一定范圍的差異。魯戰(zhàn)會(huì)等[17]分別以0.9%NaCl水溶液、120 ℃熱水、0.5 mol/L NaOH水溶液及88%甲酸溶液提取出了6種茯苓多糖，得出結(jié)論：茯苓多糖組分含量的多少受到炮制方法不同的影響，同產(chǎn)地、同菌種、同一栽培條件下，曬制茯苓的多糖含量要低于烤制茯苓的多糖含量。此外，還有研究表明，對茯苓和茯苓皮分別入切，顯示茯苓皮中Zn、Mn的含量均高于茯苓和赤茯苓，且含有后兩者沒有的Ca和Se[18]。

3　不同炮制方法對茯苓飲片有效成分溶出的影響

茯苓飲片規(guī)格類型不同，對其有效成分的溶出及藥用效果的發(fā)揮均有不同程度的影響。石延榜等[19]采用苯酚-硫酸比色法于490 nm處測定茯苓多糖、總糖的含量，提示：不同時(shí)間的水煎液中，茯苓塊和茯苓片的多糖、總糖含量明顯低于茯苓粉，表明茯苓在臨床入藥時(shí)最好粉碎或切制薄片。黃培基等[20]將4 mm茯苓丁，2 mm厚片，10目、20目及50目左右的茯苓顆粒進(jìn)行煎煮，比較溶出率，發(fā)現(xiàn)20目的茯苓顆粒不僅溶出率而且還不易焦糊；李習(xí)平等[21]以茯苓酸為考察指標(biāo)，通過高效液相色譜法測定各種茯苓炮制加工品中茯苓酸的含量，結(jié)果顯示：茯苓皮茯苓酸的含量>茯苓，且經(jīng)蒸制后兩者的含量均明顯降低，其中生切品>傳統(tǒng)法蒸品>高壓蒸品。魏有良等[22]考查了不同規(guī)格的茯苓飲片對水煎液中所含成分的影響，認(rèn)為茯苓顆粒和茯苓粉的各項(xiàng)指標(biāo)都明顯高于茯苓塊和茯苓皮，建議在茯苓使用前應(yīng)先將其研成粉末，這樣利于其有效成分的溶出。陳華等[23]建議茯苓應(yīng)研粉沖服。許臘英等[10]在對茯苓進(jìn)行炮制工藝系統(tǒng)化研究后發(fā)現(xiàn)：長度為0.5 cm的茯苓丁，因其在茯苓多糖的煎出率、外觀形態(tài)等方面均明顯優(yōu)于其他劑型，建議在臨床運(yùn)用中推廣。

4　茯苓多糖提取純化工藝研究

4.1茯苓多糖提取工藝

茯苓多糖是近年來茯苓研究中最為廣泛的一種真菌多糖，主要存在于茯苓細(xì)胞壁中,其化學(xué)結(jié)構(gòu)為(1→ 3)-β-D-葡聚糖[24]。按照溶解度的差異可將其劃分為水溶性與堿溶性茯苓多糖兩種[25]。依據(jù)多糖的溶解性能可采用乙醇-水溶液、冷水或熱水、中性鹽溶液、酸和堿液、超聲波或微波等方法進(jìn)行提取分離純化。各種提取方法各有千秋，在實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)中通常采用交叉或聯(lián)合方法。現(xiàn)簡要介紹幾種方法如下：

(1)普通水提醇沉法[26]：稱取一定重量的茯苓粉末，以熱水為介質(zhì)浸提有效成分，對浸提液進(jìn)行抽濾處理，將濾液按浸提液:濃縮液 =10:1的比例進(jìn)行濃縮，濃縮液用 95%乙醇沉淀(含醇量達(dá)80%)，于冰箱中靜置過夜，對靜置液離心，用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀物，最后真空干燥，即得到茯苓多糖粗品。該工藝簡便易行，但是耗時(shí)較長。

(2)稀堿浸提法[27]：取脫脂后的茯苓皮或粉末，加入堿性溶液(如NaOH)，常溫或微熱均可，并攪拌至粘稠，過夜，抽濾，濾液加酸液中和，再加入等量乙醇，濾去沉淀即可得多糖粗品。因茯苓中含有較多的酸性多糖，該方法提取率可達(dá)茯苓干重的50%左右。

(3)超聲波或微波輔助提取[28]：一般將脫脂后的茯苓粉末置于一定體積的提取液(常為水)中，輔以超聲波或微波，利用微波或者超聲波的能量，破壞細(xì)胞壁，快速提取多糖。該法與傳統(tǒng)方法相比，以速度快、選擇性好、提取率高、溶劑需要量少、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)著稱。

4.2茯苓多糖純化工藝[29]

根據(jù)以上方法提取出來的多糖中常含有游離蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。剔除蛋白質(zhì)的方法主要包括Sevage法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶法、鞣酸沉淀法等，或聯(lián)合運(yùn)用以上方法，現(xiàn)做簡要介紹：

(1) Sevage 法：Sevage法較為常見，采用氯仿和正丁醇的混合液與多糖溶液一起混勻并劇烈震蕩，然后用分液漏斗分離移出含有蛋白質(zhì)的氯仿和正丁醇混合液。該方法較為溫和，可避免多糖的降解，但分離率不高，一般要進(jìn)行多次。

(2)三氯乙酸法：向多糖粗品溶液加入1/5體積10%的三氯乙酸溶液，磁力攪拌30 min，離心去除沉淀，用3倍體積的95%的乙醇沉淀，3000 r/min離心15 min，沉淀加原多糖溶液體積的1/5的水溶解，再加入1/5體積10%三氯乙酸溶液，方法同上，重復(fù)處理3次，所得溶液用95%乙醇沉淀。

(3)木瓜蛋白酶法：木瓜蛋白酶可以在較低溫度下分解蛋白質(zhì)，產(chǎn)生氨基酸或者多肽鏈，這些新產(chǎn)生的小分子可以用醇沉法去除，從而達(dá)到去除蛋白質(zhì)的效果。

(4)鞣酸沉淀法[24]：利用鞣酸與蛋白中和產(chǎn)生沉淀的原理去除蛋白質(zhì)?？紫檩x等在微沸狀態(tài)下，向多糖溶液中滴加1%的鞣酸溶液，直至無沉淀產(chǎn)生為止。離心取上清液，再滴加1%的鞣酸溶液，直至無沉淀產(chǎn)生為止，取上清液，濃縮，醇沉。

5　結(jié)　語

目前，茯苓的現(xiàn)代炮制研究在沿用傳統(tǒng)方法基礎(chǔ)上有所變革和發(fā)展，尚處于初級階段，究竟采用何種炮制方法，飲片規(guī)格選用何種為宜，以何種成為作為質(zhì)控指標(biāo)，飲片質(zhì)量如何控制，均應(yīng)在結(jié)合現(xiàn)代研究的基礎(chǔ)上，加強(qiáng)茯苓炮制方法對其化學(xué)成分、有效成分溶出率及藥效學(xué)的研究；關(guān)于茯苓多糖的提取分離純化及應(yīng)用研究較多，但是關(guān)于其他有效成分(如茯苓酸、三萜類物質(zhì))提取純化研究鮮有報(bào)道，仍有待進(jìn)一步加強(qiáng)該方面研究。

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Research Progress on Processing and Extraction Technology of Poria Pieces*

FANG Yi1, XU Feng-qing1, JIN Chuan-shan1,2, LIU Meng-di1, HU Yu1

(1 School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Traditional Medicine, Anhui Hefei 230012;2SynergeticInnovationCenterofAnhuiAuthenticChineseMedicineQuality,AnhuiHefei230012,China)

Poria has good medicinal value and its application has a long history, it is one of the Chinese traditional herbal medicines commonly used in class. Literatures which relate to the study of poriacocos from dom-estic and foreign journals in recent years were included and summarized. The processing history, modern research and its effects on chemical composition, the method of poriacocos polysaccharides of extraction and utilization were summarized. It was pointed out that the main problems of poria processing, extraction and purification currently provided reference for better development and utilization of the value of poria.

poriacocos(schw)Wolf; processing; processing history; extraction and purification technology; research progress

公益性行業(yè)科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(201507002-18)。

方毅，女，碩士在讀，研究方向：中藥加工工藝與中藥質(zhì)量控制研究。

金傳山，男，教授，研究方向：中藥加工工藝與中藥質(zhì)量控制研究。

R932

A

1001-9677(2016)014-0007-03