脫澀青柿子醇提取物體外抗氧化研究*

杜紫陽，李　芳，王春元，何芳芳，駱卓明

(吉首大學(xué)，湖南　吉首　416000)

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脫澀青柿子醇提取物體外抗氧化研究*

杜紫陽，李芳，王春元，何芳芳，駱卓明

(吉首大學(xué)，湖南吉首416000)

柿子在我國已有3000多年的栽培歷史，分布廣泛。柿子含有大量的糖類及多種維生素營養(yǎng)物質(zhì)，而且具有很高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是山區(qū)脫貧致富的重要樹種。研究青柿子(未成熟的柿子)醇提取物體外抗氧化作用。用無水乙醇制備青柿子提取物，測量其多糖含量。以維生素C為陽性對(duì)照，并對(duì)其抗氧化性進(jìn)行測定。結(jié)果表明：脫澀青柿子醇提取物多糖含量為32.54%。醇提取物對(duì)DPPH自由基的IC50為0.8 mg/mL，脫澀青柿子具有較好的抗氧化作用。

脫澀青柿子；抗氧化活性；體外

柿屬于柿科，柿屬，又名朱果，是柿屬植物中作為果樹利用的代表種，也是我國重要的干果樹種之一。成熟的柿子呈朱紅色，色澤鮮艷，果子多汁且甜，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值?！侗静菥V目》中記載：“柿乃脾、肺、血分之果也，其味甘而氣平，性澀而能收，故有健脾澀腸，治嗽止血之功[1-4]”。柿子在我國作為一種常見的果樹，有著廣闊的市場與開發(fā)利用空間[5]，未成熟的柿子因果實(shí)內(nèi)可溶性單寧含量顯著高于甜柿，味澀，不被人喜食。但單寧已被廣泛應(yīng)用于工業(yè)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、化妝等領(lǐng)域，具有很高的經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值[6]，具有很強(qiáng)的抗氧化活性，能有效清除肝臟內(nèi)的過氧化反應(yīng)物和降低卵磷脂的過氧化氫水平。但目前對(duì)柿子及其醇提取物的體外抗氧化活性還沒有系統(tǒng)的研究。

吉首市花垣縣位于湖南西部的湘西土家族苗族自治州，地處偏僻山區(qū)，是個(gè)以苗族為主的少數(shù)民族聚居山區(qū)。由于交通運(yùn)輸不方便，而柿子不易保存，易腐壞，造成資源浪費(fèi)。目前對(duì)青柿子及其醇提取物的體外抗氧化活性還沒有系統(tǒng)的研究，本實(shí)驗(yàn)用特定DPPH法對(duì)其進(jìn)行抗氧化性的測定，為脆柿的加工與發(fā)展提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為湘西以及山區(qū)經(jīng)濟(jì)做出一定貢獻(xiàn)，故該項(xiàng)研究具有十分重要的意義。為此，本實(shí)驗(yàn)以花垣本地家種的青柿子為研究對(duì)象，用無水乙醇對(duì)青柿子進(jìn)行脫澀提取，制備青柿子醇提取物，采用DPPH法對(duì)青柿子醇提取物的抗氧化活性進(jìn)行測定比較，分析其抗氧化活性。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

新鮮水果：湘西花垣本地家種青柿子(用石灰水脫澀)。

試劑：L-抗壞血酸、AB-8大孔樹脂、95%乙醇、無水乙醇、葡萄糖(國產(chǎn)分析純)、DPPH(1,1-二苯-2-苦基肼)、98%濃硫酸。

1.2儀器

SP-723型可見分光光度計(jì)；UX420H電子天平；SHH.W21水浴鍋；HH.GF-1干燥箱；DS-1搗碎機(jī)；移液器；索氏提取器(250 mL)；玻璃棒、燒杯、漏斗、刻度試管、移液管、水果刀、橡膠手套等。

1.3實(shí)驗(yàn)方案

1.3.1青柿子醇提取物的制備

取青柿子若干個(gè)，按農(nóng)村青柿子脫澀工藝進(jìn)行石灰水脫澀[4]。數(shù)天后取出柿子，用蒸餾水沖洗，去蒂、核，削皮(皮厚約1～1.5 mm)。取柿肉于60 ℃烘箱中烘干至恒質(zhì)量，再分別用搗碎機(jī)粉碎。稱取一定量的柿肉粉末，按照料液比1:20加入無水乙醇，1%鹽酸，于90 ℃加熱回流3次，每次40 min，合并提取液，冷凍干燥，于4 ℃冰箱中保存待用[6]。

1.3.2多糖的測定

運(yùn)用苯酚-硫酸法測定糖含量[7]。取部分干燥后的提取物加入蒸餾水溶解，再加入三倍蒸餾水的無水乙醇混勻，靜置3 h，3000 r/min離心15 min。去掉上清液，沉淀物依次經(jīng)過無水乙醇、丙酮、乙醚各洗3次，然后與50 ℃水浴蒸發(fā)，最后于105 ℃烘箱內(nèi)干燥數(shù)小時(shí)，直至得到恒重的多糖。取多糖配成0.2 mg/mL工作液，用于測量多糖含量。

1.4抗氧化活性的測定

DPPH自由基清除活性的測定:參考Atouietal.(2005)的測定方法，分別準(zhǔn)確移取1 mL體積的EP，稀釋若干倍后，取50 uL 加入試管中，DPPH(1,1 苯基-2-苦肼基自由基)溶液(DPPH溶液制作方法：準(zhǔn)確稱取10 mg DPPH 用無水乙醇溶液稀釋定容為 100 mL，即得 0.1 mg/mL DPPH 溶液)2 mL,用蒸餾水定容至8 mL,20 ℃常溫避光暗反應(yīng)30 min后于517 nm波長處測定吸光值。以維生素C為陽性對(duì)照。

DPPH 自由基的清除率=(1-A1/A0)×100%

式中： A1為樣品組的吸光值,A0為對(duì)照組的吸光值(吸光度越低，清除率越高，抗氧化活性越強(qiáng))。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有試驗(yàn)均平行三次，數(shù)據(jù)采用SPSS19.0處理,用X±SD表示。

2　結(jié)果與分析

2.1多糖含量

為了便于多糖的測定，利用醇沉法將多糖與單糖分離，分別測量其含量。根據(jù)線性回歸方程：A=6.68x-0.0422(R2=0.9989，A為吸光度，x為濃度)，得到EP中單糖含量為29.49%，多糖含量為32.54%。

2.2DPPH自由基清除作用

根據(jù)DPPH法所測得結(jié)果如表1所示。

2.3分析與討論

(1)相關(guān)文獻(xiàn)研究表明，柿子的醇提取物比水提取物清除DPPH強(qiáng)[8]，其原因可能與柿子中多酚類等有效成分易溶于醇類溶劑。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果看。脫澀青柿子醇提取物對(duì)DPPH自由基的清除有較好的作用。由表可以看出，EP 對(duì) DPPH 自由基有很好的清除作用，其 IC50為 0.8 mg/mL。

(2) 過量的自由基可以導(dǎo)致生物膜，DNA的氧化性損傷,是很多重大疾病的誘發(fā)因素,如癌癥、衰老、多發(fā)性硬化癥等,其中經(jīng)基自由基和糖尿病、癌癥等疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，隨著近代人們回歸自然,追求健康的理念,開發(fā)天然的低毒性的抗氧化藥物成為當(dāng)今研究的趨勢，有研究表明,青柿子的多糖具有較強(qiáng)的抗氧化活性。

(3) 通過本實(shí)驗(yàn)的研究發(fā)現(xiàn)，青柿子醇提取物對(duì)DPPH的清除能力與多糖濃度呈正相關(guān),多糖濃度越大,清除能力越強(qiáng)。

(4) EP有較強(qiáng)的清除DPPH的能力,能有效清除經(jīng)基自由基,EP是一種很好的天然抗氧化劑,同時(shí)說明青柿子具有很好的體外抗氧化作用。

3　結(jié)　論

本研究采用DPPH法，測定了湘西花垣地區(qū)本地家種青柿子醇提取物的抗氧化活性,結(jié)果表明脫澀青柿子醇提取物有較好的自由基清除能力，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了脫澀青柿子具有很好的抗氧化作用，是一種天然抗氧化劑。通過本次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，體現(xiàn)出脫澀后的青柿子的營養(yǎng)及食用價(jià)值，刺激青柿子的市場需求量，從而提高花垣地區(qū)的本地家種柿子的利用率，將青柿子推向食品保健，最終促進(jìn)湘西武陵山區(qū)經(jīng)濟(jì)“柿業(yè)”市場的發(fā)展，帶動(dòng)湘西武陵山片區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展，提高資源利用率，減少浪費(fèi)。

同時(shí)，青柿子抗氧化活性的有效成分還有待于進(jìn)一步的研究，本研究也為以后的水果抗氧化研究提供有價(jià)值的參考依據(jù)。

[1]蔡健,宋華,徐良,等.柿子開發(fā)利用[J].食品研究與開發(fā)，2005,26(6):115-117.

[2]楊正興,黃伶俐,尹秀春.柿子膳食纖維飲料加工研究[J].廣西農(nóng)學(xué)報(bào)，2002(S1): 183-194.

[3]王書民,張國春.柿子的加工技術(shù)[J].商洛師范?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2004,18(2):43-45.

[4]寇靜靜,趙智慧,王文江.柿功能性成分研究進(jìn)展[A].第八屆第八屆全國干果生產(chǎn)與科研進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C].保定,2013.

[5]陳灝,賀全紅. 柿子脫澀技術(shù)要點(diǎn)[J].現(xiàn)代園藝, 2011(15):33.

[6]張永卓.部分中國原產(chǎn)甜柿種質(zhì)甜澀性狀的鑒定及其超低溫保存的研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[7]徐斌,董英,林琳,等.改良苯酚-硫酸法測定苦瓜多糖含量[J].食品科技，2005(7):79-82.

[8]趙盈,張海生,王立霞,等. 柿子多糖的水提醇沉工藝研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊), 2010(12):26-28.

The Invitro Antixidant Research of Ethanol Extract of Green Non-astringent Persimmons*

DUZi-yang,LIFang,WANGChun-yuan,HEFang-fang,LUOZhuo-ming

(Medical College of Jishou University, Hunan Jishou 416000, China)

Persimmon has a long cultivating history and distribute widely in China. Persimmon not only contains a mass of saccharide and multiplex vitamin, but also has high medicine and economic value, which is one of the most impormant economic tree varieties to help farmers casting off poverty to get rich in mountainous area. To study the antioxidant effect of ethanol extract of green persimmons from the object, the extract of green persimmons with the absolute ethyl alcohol was prepared, the content of polysaccharide was measured, VC for positive comparison was used and their antioxidant was measured. Results showed that the content of ethanol extract of green non-astringent persimmons was 32.54%.The IC50of ethanol extract related to DPPH free radicl was 0.8 mg/mL. The ethanol extract of green non-astringent persimmons has obvious antioxgenation.

the green non-astringent persimmons; antioxidant activity; in vitro

2014年吉首大學(xué)校級(jí)科研項(xiàng)目(14JDX018)。

杜紫陽(1995-)男，臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)。

侯娟(1973-)，女，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)及技術(shù)研究。

Q946

A

1001-9677(2016)02-0063-02