白細(xì)胞介素17在多發(fā)性硬化中的作用

解麗麗 李福榮 隋曉雯 王梓晗 王翠 呂洪濤

白細(xì)胞介素17在多發(fā)性硬化中的作用

解麗麗 李福榮 隋曉雯 王梓晗 王翠 呂洪濤

目的 通過檢測(cè)多發(fā)性硬化（MS）患者與健康人的血清白細(xì)胞介素17（IL-17）水平，研究IL-17水平與MS之間的關(guān)系。方法 收集27例MS患者和27例健康人的血清，采用酶聯(lián)免疫吸附劑法（ELISA）檢測(cè)樣品吸光度，計(jì)算出IL-17水平。結(jié)果 MS組的血清IL-17水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 MS患者組的血清IL-17水平高于對(duì)照組。

多發(fā)性硬化；白細(xì)胞介素17；酶聯(lián)免疫吸附劑法

多發(fā)性硬化（MS）是一種病因尚未明確的，易發(fā)于中青年患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)炎性脫髓鞘性自身免疫性疾病，主要以CNS多發(fā)性白質(zhì)和皮質(zhì)下病灶所導(dǎo)致的復(fù)發(fā)和進(jìn)展性神經(jīng)癥狀為特征[1]。病理特點(diǎn)為CNS內(nèi)血管周圍的淋巴/單核細(xì)胞浸潤(rùn)，脫髓鞘斑塊形成，反應(yīng)性膠質(zhì)疤痕形成和軸突損傷[2]。MS是受環(huán)境因素的觸發(fā)由CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性疾病[3]。自身抗體能夠反映自身免疫反應(yīng)的表型、本質(zhì)和強(qiáng)度[4]。已有研究提示白細(xì)胞介素17（IL-17）在自身免疫性疾病的產(chǎn)生和發(fā)展中發(fā)揮重要的作用[5]。因此，本研究以MS為研究對(duì)象，探討IL-17在MS患者外周血清中的表達(dá)情況，研究IL-17與MS發(fā)病機(jī)制的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院神經(jīng)內(nèi)科2012年12月～2014年12月收治的MS急性期患者27例作為MS組，其中男14例，女13例，年齡22～65歲，平均（41.5±9.5）歲。其中6例是首次發(fā)作，其余均為2次以上發(fā)作。所有臨床病例均符合McDonald多發(fā)性硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]:臨床表現(xiàn)≥2次發(fā)作；具有≥1個(gè)以上客觀臨床證據(jù)的病變或存在1個(gè)客觀臨床證據(jù)的病變，同時(shí)伴有既往發(fā)作，合理的病史證據(jù)，無需臨床資料。臨床表現(xiàn)≥2次發(fā)作；具有1個(gè)病變的客觀臨床證據(jù)，在CNS的4個(gè)MS典型區(qū)域（腦室周圍，近皮質(zhì)，幕下和脊髓）中至少有2個(gè)區(qū)域≥1個(gè)T2病變；或者CNS不同部位病變的臨床發(fā)作。1次發(fā)作；具有≥2個(gè)病變的客觀臨床證據(jù)，同時(shí)存在無癥狀的增強(qiáng)與非增強(qiáng)的病變。有1次發(fā)作；存在1個(gè)病變的客觀臨床證據(jù)，且具有證據(jù)病變空間和時(shí)間多發(fā)的證據(jù)。提示MS的隱匿的神經(jīng)功能障礙進(jìn)展（原發(fā)進(jìn)展型MS），疾病進(jìn)展1年同時(shí)有下列3項(xiàng)中的2項(xiàng)：（1）腦病變的空間多發(fā)證據(jù)；（2）脊髓病變的空間多發(fā)證據(jù)；（3）腦脊液陽(yáng)性，等電聚焦電泳的寡克隆帶證據(jù)。無其他免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病，不合并腫瘤、急性炎性疾病引起的自身免疫反應(yīng)性疾病，沒有近期內(nèi)感染和組織損傷，無3個(gè)月內(nèi)接受免疫抑制劑治療的患者，無孕婦。選取同期健康志愿者27例作為對(duì)照組，其中男14例，女13例，年齡21～57歲，平均（36.5±14.6）歲。MS組與對(duì)照組的性別和年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器 人IL-17酶聯(lián)免疫試劑盒（上海信裕生物技術(shù)有限公司）。常溫離心機(jī)（Eppendorf公司，美國(guó)），微量移液器（Eppendorf公司，美國(guó)），METERTECM∑960酶標(biāo)儀（上海醫(yī)療器械七廠），BD-132冰箱（海爾公司，青島），37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱（Shel Lab，美國(guó)）。

1.2.2 樣本采集 空腹采集肘部靜脈血5mL，存放于EDTA促凝試管中，之后放在4℃冰箱2h，等待血液凝固上下分層后，放到高速離心機(jī)中，3000r/min，離心5min，吸取上層血清，使用移液器將血清移到2mL試管中，-20℃冰箱內(nèi)儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 ELISA檢測(cè)步驟 從冰箱取出IL-17抗體ELISA試劑盒，放于室溫30min。準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品：在標(biāo)準(zhǔn)品中加入150μL的稀釋液，調(diào)整到20ng/L濃度，然后倍比稀釋，分別稀釋為5個(gè)濃度：20、10、5、2.5、1.25ng/L。將標(biāo)準(zhǔn)品和血清樣品各稀釋5倍，每孔加40μL的稀釋液，然后加入10μL樣品，均勻振蕩。用封板膜密封后，37℃孵育30min。揭開封板膜，去掉液體，甩干，每孔加入洗滌液，放置30s后棄掉，反復(fù)洗滌5次，干燥。每孔（空白孔除外）加入酶標(biāo)試劑50μL。再次進(jìn)行之前步驟。每孔依次加入顯色劑A、B各50μL，搖勻后避光顯色20min。每孔加入終止液50μL，終止反應(yīng)。設(shè)置空白孔為0、450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔吸光度（OD值）。

1.2.4 結(jié)果分析 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)各個(gè)樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，測(cè)得各個(gè)樣品的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以“x±s”表示，組間比較采用單因素方差分析,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MS患者血清IL-17水平為（16.35±4.25）ng/L，正常人血清中IL-17水平為（6.15±0.52）ng/L；MS組與對(duì)照組IL-17水平相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.923，P=0.019）。

3 討論

IL-17是Rouvier在1993年從激活的T細(xì)胞雜交瘤中克隆出來的CTLA8的cDNA序列，其相關(guān)蛋白質(zhì)被命名為IL-17[7]。IL-17是有輔助T細(xì)胞Th17分泌的特征性細(xì)胞因子，在抵抗胞外細(xì)菌、真菌感染的宿主防御和其他各種自身免疫性疾病發(fā)展中起到重要作用。在人類的疾病研究中發(fā)現(xiàn)，IL-17在MS的外周血和病變局部組織表達(dá)上調(diào)，并且在疾病的慢性、復(fù)發(fā)過程中發(fā)揮關(guān)鍵的作用[8]。

MS是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的慢性炎癥性脫髓鞘性疾病。越來越多的證據(jù)表明,IFN-β和IL-17等細(xì)胞因子在MS發(fā)病的過程中發(fā)揮重要作用[9-11]。本研究結(jié)果顯示，MS組患者血清IL-17水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明IL-17存在于MS的發(fā)病過程，但是其變化是MS發(fā)病的原因，還是MS發(fā)病后導(dǎo)致的結(jié)果，具體的機(jī)制研究尚不清楚。但是MS患者血清中IL-17表達(dá)明顯升高，可以作為臨床早期篩查MS患者的生物標(biāo)志物，對(duì)于盡早發(fā)現(xiàn)MS患者的病情起到積極的作用，可以作為MS的診斷、分類、疾病活動(dòng)性和預(yù)測(cè)臨床進(jìn)程的潛在的生物標(biāo)志物。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.4.024

遼寧116033 大連市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 （解麗麗 李福榮 隋曉雯 王梓晗 王翠） 116011 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科 （呂洪濤）

呂洪濤 E-mail：lht_725@163.com