余德豹，周國忠，吳云路，盧　韜

(紹興市人民醫(yī)院/浙江大學(xué)紹興醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，浙江紹興 312000)

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黃芪顆粒對哮喘患兒Treg和Th17細(xì)胞的影響作用*

余德豹，周國忠△，吳云路，盧韜

(紹興市人民醫(yī)院/浙江大學(xué)紹興醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，浙江紹興 312000)

摘要:目的探討黃芪顆粒對哮喘患兒CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)和輔助性T細(xì)胞17(Th17細(xì)胞)的影響作用，為臨床診療提供參考。方法選取2013年7月至2014年5月該院收治的典型初發(fā)哮喘患兒60例，隨機(jī)分為黃芪組(30例)和對照組(30例)，對照組采用普米克都保治療，黃芪組在普米克都保治療的基礎(chǔ)上加用黃芪顆粒。觀察兩組治療療效和外周血Treg細(xì)胞及Th17細(xì)胞的變化。結(jié)果治療前兩組Treg細(xì)胞及Th17細(xì)胞百分比比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與治療前比較，治療后兩組Treg細(xì)胞百分比均明顯升高，Th17細(xì)胞百分比均明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且治療后黃芪組與對照組Treg細(xì)胞及Th17細(xì)胞百分比比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。黃芪組治療總有效率高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論黃芪顆粒有著調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞平衡的作用，對哮喘的治療有一定的效果，并且黃芪顆粒和西藥聯(lián)合使用效果更顯著。

關(guān)鍵詞:支氣管哮喘；黃芪顆粒；CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；輔助性T細(xì)胞17

支氣管哮喘是兒童時期常見的反復(fù)發(fā)作的慢性疾病，是以嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤及細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎性疾病，近年來其發(fā)病率呈上升趨勢，且發(fā)病年齡日趨小齡化，嚴(yán)重影響小兒的生長發(fā)育和身心健康[1]。CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)和輔助性T細(xì)胞17(Th17細(xì)胞)屬于新發(fā)現(xiàn)的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群，Treg細(xì)胞具有免疫抑制作用，而Th17細(xì)胞具有強(qiáng)致炎活性，兩者在功能上相互拮抗，兩者平衡可維持免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞在哮喘的發(fā)病機(jī)制中扮演著重要角色，彌補(bǔ)了由輔助性T細(xì)胞2(Th2細(xì)胞)所介導(dǎo)的哮喘機(jī)制的不足，從而為哮喘發(fā)病機(jī)制的研究提供了新方向[2]。黃芪顆粒是補(bǔ)中益氣中藥，含有黃芪皂苷、黃芪多糖和多種微量元素等，是一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的中成藥，可降低患者氣道高反應(yīng)性，調(diào)節(jié)患者免疫功能，從而對支氣管哮喘有一定的治療作用。但有關(guān)黃芪顆粒是否對哮喘患兒Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞產(chǎn)生影響的文獻(xiàn)報道不多。筆者采用黃芪治療哮喘未控制患兒，療效滿意。現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料2013年7月至2014年5月于本院小兒科哮喘專病門診就診及住院的典型初發(fā)哮喘患兒60例，男28例，女32例；年齡5～14歲，平均(8.80±2.56)歲；診斷均符合中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會呼吸學(xué)組制訂的《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。所有患兒就診時檢測肺功能，進(jìn)行兒童哮喘控制測試(C-ACT)，并根據(jù)臨床癥狀、肺功能情況給予嚴(yán)重程度和控制水平分級。按《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》分級治療原則[3]，將納入的所有受試者按隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組：A治療組(對照組)30例，其中男16例，女14例；B治療組(黃芪組)30例，其中男12例，女18例?；純旱谋O(jiān)護(hù)人均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1治療方法對照組單純用普米克都保行規(guī)范化的治療；黃芪組在對照組的基礎(chǔ)上，每日加服黃芪顆粒，飯后開水沖服，每次4 g，每日2次。

1.2.2檢測方法Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞均采用FC500流式細(xì)胞儀(美國Beckman Coulter公司)進(jìn)行分析，在治療前后各采乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血2 mL進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按試劑盒說明書進(jìn)行檢測。

1.2.3療效判定標(biāo)準(zhǔn)與觀察指標(biāo)顯效：用藥1周內(nèi)咳嗽消失；有效：用藥1～2周咳嗽消失；無效：用藥2周以上，仍有咳嗽。總有效率=(顯效例數(shù)+有效例數(shù))/總例數(shù)，并統(tǒng)計(jì)兩組患兒氣喘、咳嗽及哮鳴音消失時間。

2結(jié)果

2.1兩組臨床癥狀消失時間比較兩組哮喘患兒氣喘、咳嗽和哮鳴音消失時間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2兩組臨床療效比較治療后兩組顯效率和總有效率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.3兩組外周血T淋巴細(xì)胞水平比較Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞檢測結(jié)果，見圖1(見《國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。治療前，兩組Treg細(xì)胞及Th17細(xì)胞百分比比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與治療前比較，治療后黃芪組與對照組哮喘患兒Treg細(xì)胞百分比均明顯上升，Th17細(xì)胞百分比均明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后，兩組患兒外周血Treg細(xì)胞及Th17細(xì)胞百分比比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖2。

3討論

哮喘的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，Th2細(xì)胞占優(yōu)勢的Th1/Th2型免疫應(yīng)答失衡，是哮喘發(fā)病的一個重要免疫學(xué)機(jī)制。哮喘患者Th1型免疫反應(yīng)減弱而Th2型免疫反應(yīng)異常增強(qiáng)，出現(xiàn)以產(chǎn)生干擾素(IFN)為標(biāo)志的Th1細(xì)胞反應(yīng)低下，而Th2細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素(IL)等細(xì)胞因子則促進(jìn)變應(yīng)原特異的免疫球蛋白E(IgE)增加和氣道嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致氣道慢性炎癥和氣道高反應(yīng)性[4]。但這一理論不能完全闡明哮喘的發(fā)病機(jī)制，新近研究顯示Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞也參與了哮喘的病理過程，Treg細(xì)胞具有免疫抑制作用，其通過分泌白細(xì)胞介素-10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)發(fā)揮作用，抑制T淋巴細(xì)胞增殖及Th1、Th2的細(xì)胞因子反應(yīng)，從而阻止哮喘的發(fā)生。Th17細(xì)胞屬于CD4+T淋巴細(xì)胞新亞群，其產(chǎn)生的白細(xì)胞介素-17(IL-17)能有效地介導(dǎo)中性粒細(xì)胞動員的興奮過程，從而有效地介導(dǎo)支氣管組織的炎性反應(yīng)，加重哮喘癥狀[5-6]。此外，有研究顯示哮喘機(jī)體Treg/Th17細(xì)胞功能發(fā)生失衡，表現(xiàn)為Treg細(xì)胞功能減弱、Thl7細(xì)胞功能增強(qiáng)[7-8]。因此，提出Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞的免疫失衡也是哮喘發(fā)病的重要機(jī)制之一。

黃芪顆粒是中醫(yī)名方之一，對機(jī)體免疫系統(tǒng)具有顯著的調(diào)節(jié)作用。黃芪顆粒具有益氣固表、止汗功效，常用于表虛自汗，易感風(fēng)邪所致病癥，能補(bǔ)肺健脾,增強(qiáng)抵御外邪的能力。臨床上已經(jīng)將其應(yīng)用于多種疾病的輔助治療，并取得了一定療效。既往研究顯示，黃芪顆?？赏ㄟ^影響Thl/Th2細(xì)胞因子而發(fā)揮治療哮喘的作用[9]。此外，Treg/Th17在哮喘發(fā)病中也起到重要作用，因此關(guān)于黃芪顆粒是否可調(diào)節(jié)哮喘機(jī)體Treg/Th17細(xì)胞水平的問題值得研究。

在筆者的研究中，將哮喘患兒隨機(jī)分為兩組，對照組采用普米克都保治療，黃芪組采用普米克都保聯(lián)合黃芪顆粒治療。普米克都保的主要成分為布地奈德干粉劑，具有良好的耐受性，吸入后10%的藥物進(jìn)入肺內(nèi)，約80%在肝臟內(nèi)被首次代謝。它有明顯的抗過敏、抗炎作用，可抑制支氣管痙攣，同時可降低組胺及乙酰膽堿引起的氣道高反應(yīng)性，抑制運(yùn)動誘發(fā)哮喘，其引起的全身不良反應(yīng)要明顯低于相同有效劑量下的其他吸入激素。有研究表明，布地奈德可以通過下調(diào)Th17及其細(xì)胞因子，上調(diào)Treg及其細(xì)胞因子，從而糾正Th17/Treg失衡,使之向Treg傾斜，有效抑制Th17的過度免疫反應(yīng)，從而發(fā)揮抗炎、解痙、平喘作用[10-11]。本研究結(jié)果顯示，對照組患兒臨床治療總有效率為80.00%，臨床癥狀有所緩解，且治療后Treg細(xì)胞百分比明顯升高、Th17細(xì)胞百分比明顯降低(P<0.05)，說明與上述研究結(jié)果相符。當(dāng)在普米克都保的基礎(chǔ)上加用黃芪顆粒治療哮喘時，結(jié)果顯示黃芪組患兒臨床治療總有效率為86.67%，略高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可能是由于采用黃芪顆粒治療的時間太短，使效果不夠明顯。但從細(xì)胞分子水平上觀察，治療后黃芪組Treg細(xì)胞百分比明顯升高，Th17細(xì)胞百分比明顯降低(P<0.05)，且治療后黃芪組與對照組Treg細(xì)胞及Th17細(xì)胞百分比比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明黃芪顆粒能在短時間內(nèi)有效地調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞水平，更重要的是可以看出黃芪顆粒聯(lián)合普米克都保治療能更好地調(diào)節(jié)Treg/Th17免疫失衡,治療哮喘的效果更為顯著。其分子機(jī)制可能是黃芪顆粒通過某種因子一方面抑制Th17細(xì)胞的表達(dá)，使哮喘患兒Th17細(xì)胞減少，另一方面促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖和分化，使兩者達(dá)到平衡，從而維持機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，減少哮喘的發(fā)作。

綜上所述，黃芪顆粒對哮喘患兒Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞具有重要的影響作用，可以通過升高Treg細(xì)胞水平，下調(diào)Th17細(xì)胞水平，使Treg/Th17細(xì)胞達(dá)到平衡。其與普米克都保聯(lián)合應(yīng)用的療效更佳，可減少激素的用量，從而大大減少激素引起的不良反應(yīng)的發(fā)生，這為臨床治療哮喘提供了一條更為有效的途徑。

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基金項(xiàng)目：浙江省衛(wèi)計(jì)委科技項(xiàng)目(JSW2013-B031)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.029

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)05-0649-02

(收稿日期：2015-09-24)

△通訊作者,E-mail：zhougzhong@sohu.com。

△通訊作者,E-mail：zhougzhong@sohu.com。

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