微生物管碟法和濁度法測(cè)定硫酸鏈霉素的對(duì)比試驗(yàn)

趙化芳

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆 烏魯木齊 830063）

微生物管碟法和濁度法測(cè)定硫酸鏈霉素的對(duì)比試驗(yàn)

趙化芳

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆 烏魯木齊 830063）

對(duì)比管碟法和濁度法的試驗(yàn)原理、儀器設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基、緩沖液、培養(yǎng)條件、實(shí)驗(yàn)結(jié)果等，找出他們的異同點(diǎn)和優(yōu)缺點(diǎn)，更好地應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

管碟法；濁度法；硫酸鏈霉素；對(duì)比試驗(yàn)

目前在國際上，抗生素效價(jià)測(cè)定以管鐵法和濁度法共行，各國藥典均有采用[1]。《中華人民共和國獸藥典》2010年一部，收載的91個(gè)抗生素品種中，有44個(gè)品種采用了微生物檢定法（其中有18個(gè)采用了濁度法），53個(gè)品種采用了高效液相色譜法。

1 原理不同

管碟法是將高低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液加入到牛津杯中，通過溶液的滲透與攤布在平板中的枯草芽孢桿菌相互作用形成抑菌圈，通過測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)品和樣品形成的抑菌圈直徑來計(jì)算供試品含量。濁度法是在比色皿中按拉丁方排列，加入高低含量的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液1 mL，再加入含葡萄球菌的液體培養(yǎng)基9 mL，通過測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光度，來計(jì)算樣品含量。

2 試劑和材料的選擇不同

管碟法采用生素鑒定Ⅰ號(hào)固體培養(yǎng)基，濁度法采用抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅲ號(hào)液體培養(yǎng)基，磷酸鹽緩沖液均為pH為7.8的磷酸鹽緩沖液，抗生素溶液的配置不同，管碟法配置標(biāo)準(zhǔn)品樣品的最終濃度為1.2 U/mL和0.6 U/mL的溶液，濁度法為含6 U/mL和9 U/mL的溶液。

3 菌種和菌懸液的制備不同

管碟法是取金黃色葡萄球菌的第三代培養(yǎng)菌，接種到營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，36 ℃培養(yǎng)24 h，用7 mL滅菌水將菌苔洗下制成菌懸液，當(dāng)天使用。濁度法是取枯草芽孢桿菌的第三代培養(yǎng)菌，接種到營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，36 ℃培養(yǎng)7 d，用滅菌水7 mL將芽孢洗下，制成芽孢懸液，在65 ℃水浴內(nèi)加熱30 min將繁殖菌體殺死，待冷后放冰箱4 ℃貯藏為濃菌液。

4 試驗(yàn)方法不同

4.1 微生物管碟法

底層加20 mL滅菌的抗生素檢定Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基，上層加入0.5%枯草芽孢桿菌菌懸液的抗生素檢定Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基5 mL，凝固后每個(gè)平板中對(duì)角放入4個(gè)牛津杯，將每個(gè)平板的4個(gè)牛津杯中分別對(duì)角加入高低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品各300 μ L，小心放入37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)16 h，在ZY-300Ⅳ多功能微生物自動(dòng)測(cè)量?jī)x，測(cè)量抑菌圈直徑，出具檢驗(yàn)報(bào)告。

4.2 微生物濁度法

按拉丁方排列從某一標(biāo)記處，沿壁精密加入1.0 mL抗生素溶液，再在標(biāo)記稍上處精密加入9.0 mL帶菌培養(yǎng)基，將沾在試管壁上的抗生素充分沖入培養(yǎng)基內(nèi)。同時(shí)制備含菌陽性對(duì)照管和無菌培養(yǎng)基空白對(duì)照管。將比色皿放入WBS-100微生物比濁法測(cè)定儀中，恒溫振搖培養(yǎng)，增加氧的供應(yīng)，可促進(jìn)生長，縮短培養(yǎng)時(shí)間，實(shí)時(shí)監(jiān)控，智能判斷終點(diǎn)，在線快速讀數(shù)。

5 試驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比與分析

在上述試驗(yàn)條件下，通過兩種不同的試驗(yàn)方法，對(duì)注射用硫酸鏈霉素的測(cè)定效價(jià)、偏離平行、可信限率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表1。兩種方法的效價(jià)測(cè)定結(jié)果相近，偏離平行均大于0.05，可信限率均低于5，精密度等均滿足實(shí)驗(yàn)需要。但濁度法的測(cè)定效價(jià)的精密度較好于管碟法，可信限率低于3。并且管碟法需要較多的平行樣品，才能達(dá)到需要的可信限率，增加了工作量。

管碟法應(yīng)用范圍廣，培養(yǎng)條件要求較寬，但實(shí)驗(yàn)過程長，試驗(yàn)結(jié)果易受瓊脂擴(kuò)散性的影響。比濁法快速，試驗(yàn)過程3～4 h，可當(dāng)天獲得結(jié)果，無擴(kuò)散因素的影響，試驗(yàn)的靈敏度高，結(jié)果的精密度與準(zhǔn)確度均較瓊脂擴(kuò)散法好，但采用手工加樣時(shí)，過程較為繁瑣，對(duì)溫度控制精度和溫度均一性要求較高。

R927

A

1006-799X(2016)18-0106-01

趙化芳（1987-），女，新疆烏魯木齊人，助理獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)和實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢測(cè)工作。