細(xì)菌培養(yǎng)法與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法對(duì)細(xì)菌性陰道炎輔助診斷的價(jià)值

鄧波，邱振華，葉小媚

（1.廣東省高州市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 高州 525200；2.廣東省高州市第二人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 高州 525200）

細(xì)菌性陰道炎是婦科臨床上十分常見(jiàn)的病癥類型，陰道菌群失調(diào)導(dǎo)致其他致病菌大量繁殖是該病癥的主要治病原因。曾有相關(guān)研究顯示該病癥臨床發(fā)病率較高，若未能得到有效控制則極有可能導(dǎo)致炎癥入侵子宮或盆腔，甚至?xí)?dǎo)致患者不孕[1]。盡早確診并予以積極治療是提高該病癥治療效果的關(guān)鍵。本次研究將以隨機(jī)選取本院2013年12 月-2015 年5月接受治療的120例細(xì)菌性陰道炎患者為研究對(duì)象，探究細(xì)菌培養(yǎng)法與PCR法對(duì)細(xì)菌性陰道炎的輔助診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取本院2012年12月-2015年5月接受治療的120例細(xì)菌性陰道炎患者為研究對(duì)象，所有患者經(jīng)臨床確診為細(xì)菌性陰道炎，均進(jìn)行陰道分泌物采集，對(duì)120例患者分別采用細(xì)菌培養(yǎng)檢驗(yàn)法和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction, PCR）檢驗(yàn)法。患者年齡22～43歲，年齡中位數(shù)32.5歲。所有患者均存在白帶增多、異味以及外陰瘙癢等臨床癥狀。排除標(biāo)準(zhǔn)：處于妊娠期或哺乳期的患者；存在嚴(yán)重其他臟器疾病的患者；半個(gè)月內(nèi)曾進(jìn)行過(guò)抗感染治療的患者；半個(gè)月內(nèi)有過(guò)性生活的患者以及不能配合醫(yī)護(hù)人員完成本次研究的患者。

1.2 方法

細(xì)菌培養(yǎng)法：將待檢標(biāo)本取出，放置到專用培養(yǎng)基內(nèi)，在37℃二氧化碳（CO2）孵箱內(nèi)培養(yǎng)48 h。待菌落長(zhǎng)成后，將其中呈半透明、滴露狀及灰色并光滑的菌群取出。并依據(jù)相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生化鑒定。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢驗(yàn)法：采集1 000 μl含有無(wú)菌鹽水的陰道分泌物，將其放置在離心管內(nèi)進(jìn)行離心處理，離心時(shí)間為10 min，采用12 000 r/ min。離心處理完成后則可將上清液去除，之后把堿性裂解液加入到沉淀當(dāng)中，震蕩混勻，放置在干式金屬恒溫儀內(nèi)進(jìn)行孵育，干式金屬恒溫儀穩(wěn)定設(shè)定為60℃，孵育時(shí)間控制在10～15 min，之后采用12 000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，離心時(shí)間為10 min。將上清液取出制作脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid, DNA）模板，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在進(jìn)行擴(kuò)增過(guò)程匯總要進(jìn)行陰性對(duì)照。向其中加入雙蒸餾水、反應(yīng)緩沖劑、引物及DNA模板等，反應(yīng)條件設(shè)定為94℃ 60 s，37℃ 60 s，72℃ 120 s。之后采用PCR儀進(jìn)行循環(huán)。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

①細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：培養(yǎng)基上有典型菌落，生化鑒定為目的菌落則為陽(yáng)性；②PCR法陽(yáng)性評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：條帶寬度＜1 mm，邊緣整齊，在預(yù)期堿基大小范圍內(nèi)，背景上無(wú)藥斑及引物二聚體，若出現(xiàn)超出預(yù)期堿基大小范圍的其他條帶均為假陽(yáng)性[2]。陽(yáng)性率=有病例數(shù)/總病例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究中所涉及數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，兩兩比較采用Nemenyi法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者檢查結(jié)果陽(yáng)性率比較

PCR法檢出陽(yáng)性率明顯優(yōu)于細(xì)菌培養(yǎng)法，兩種方法檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組患者檢查結(jié)果陽(yáng)性率比較 例

2.2 兩種檢驗(yàn)方法所得陽(yáng)性菌分布情況比較

兩種檢測(cè)方法所得陽(yáng)性菌中尤以陰道加德納菌的檢出率最高，見(jiàn)表2。

表2 兩種檢驗(yàn)方法所得陽(yáng)性菌分布情況比較 例（%）

3 討論

健康女性陰道內(nèi)存在多種正常菌群，若陰道內(nèi)pH值出現(xiàn)異常（低于3.8或超過(guò)4.4）則可能致使菌群失調(diào)，從而導(dǎo)致正常菌群成為致病菌。相關(guān)臨床研究顯示導(dǎo)致女性出現(xiàn)陰道感染最為常見(jiàn)的致病菌通常為腸球菌、陰道加德納菌、葡萄球菌以及鏈球菌等[3]。本次研究結(jié)果也顯示陽(yáng)性菌中尤以陰道加德納菌的檢出率最高。早期進(jìn)行檢測(cè)確定病菌群對(duì)提高細(xì)菌性陰道炎的臨床治療效果、改善患者預(yù)后質(zhì)量均具有積極意義。目前臨床用于細(xì)菌性陰道炎輔助診斷的方法多以細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR法為主。

細(xì)菌培養(yǎng)法曾是臨床診斷細(xì)菌性陰道炎的金標(biāo)準(zhǔn)，但該種檢測(cè)方法操作復(fù)雜且對(duì)檢驗(yàn)環(huán)境的要求較高，檢驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，故近年來(lái)逐漸被PCR法所取代。大量臨床研究結(jié)果證明PCR法的檢驗(yàn)靈敏度及特異性更高，且操作簡(jiǎn)單，檢驗(yàn)時(shí)間短，更具臨床推廣應(yīng)用價(jià)值[4-5]。上述研究結(jié)果在本次研究中也有明顯體現(xiàn)，本次研究結(jié)果顯示PCR法的臨床檢出陽(yáng)性率為81.67%明顯高于細(xì)菌培養(yǎng)法。上述研究結(jié)果證明細(xì)菌培養(yǎng)法與PCR法中后者的檢驗(yàn)準(zhǔn)確率更高，其對(duì)于細(xì)菌性陰道炎病的輔助診斷價(jià)值更為理想，且該種檢測(cè)方法更為方便快捷，值得在細(xì)菌性陰道炎的臨床診斷工作中加以推廣應(yīng)用。

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