宮血停顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的探究

傅英昳

哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠 150000

宮血停顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的探究

傅英昳

哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠 150000

目的：明確宮血停顆粒的質(zhì)量控制方法。方法：以TLC法對(duì)整機(jī)中的墨旱蓮和益母草進(jìn)行鑒別，并以HPLC-ELSD法對(duì)制劑中的黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：通過(guò)含量測(cè)定，黃芪甲苷在0.20-2.50μg之間保持良好的線性關(guān)系，宮血停顆粒中黃芪甲苷的平均回收率為101.0%，RSD值為1.7%。結(jié)論：此種鑒別方式在實(shí)際應(yīng)用中能夠?qū)崿F(xiàn)準(zhǔn)確高效分離，具有簡(jiǎn)便性和有效性，在宮血停顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)中具有良好的應(yīng)用價(jià)值。

宮血停顆粒；薄層色譜法；HPLC-ELSD

宮血停顆粒是一種中藥復(fù)方制劑，主要由黃芪、升麻、黨參、益母草以及當(dāng)歸等組成，在臨床上具有補(bǔ)益脾腎、活血化瘀的功效，在氣虛血瘀所導(dǎo)致的月經(jīng)過(guò)多以及崩漏等方面具有較好的臨床治療效果。為了對(duì)宮血停顆粒進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，本文就此展開(kāi)實(shí)驗(yàn)亞久，建立薄層色譜鑒別方法，并采用HPLC-ELSD法對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，以明確宮血停顆粒的質(zhì)量控制方法，從而保證藥品質(zhì)量，提高臨床用藥安全性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

本次實(shí)驗(yàn)研究中，以HP1100高效液相色譜儀、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器作為主要實(shí)驗(yàn)儀器，并進(jìn)行空氣泵、電子天平等配合開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究。

1.2 樣品

以選自哈藥集團(tuán)世一堂制藥有限公司的宮血停顆粒作為實(shí)驗(yàn)樣品，樣品共10個(gè)批次。

1.3 試劑與試藥

在本次實(shí)驗(yàn)研究中，流動(dòng)相試劑為色譜純，其余試劑與試藥均為分析純。旱蓮苷A對(duì)照品、（批號(hào)111886-201001）墨旱蓮對(duì)照藥材（批號(hào)958-200203）鹽酸水蘇堿對(duì)照品（批號(hào)110712—2000508）益母草對(duì)照藥材（批號(hào)120912-200306）黃芪甲苷對(duì)照品（批號(hào)0781—200311）來(lái)源：均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

為保證墨旱蓮鑒別準(zhǔn)確性，在實(shí)際操作過(guò)程中取含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液5批作為供試品溶液，將適量甲醇加入旱蓮苷A對(duì)照品中，制成標(biāo)準(zhǔn)含量的對(duì)照品溶液，其規(guī)格為每1ml含有0.5mg旱蓮苷。之后，取墨旱蓮對(duì)照材料2g，加入標(biāo)準(zhǔn)比例乙醇進(jìn)行超聲處理，待45min后濾過(guò)，取續(xù)濾液作為對(duì)照藥材溶液。取含量按A對(duì)照品2.5mg以及宮血停顆粒2.5g，加以處理后制成加樣回收溶液。取墨旱蓮對(duì)照藥材2g制成供試品后，依照含量測(cè)定方法制成陽(yáng)性供試品溶液。在此基礎(chǔ)上，依照處方量比例制成宮血停顆粒，其中不含墨旱蓮，依照供試品溶液制備方式制成陰性供試品溶液。

按照《中國(guó)藥典》2010年版中的薄層色譜發(fā)開(kāi)展試驗(yàn)，取所制備10種溶液各5μl，滴于同一硅膠G薄層板上，選用二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水作為展開(kāi)劑，將溶液展開(kāi)后取出晾干，并噴以標(biāo)準(zhǔn)比例的硫酸乙醇溶液，在105℃條件下加熱處理，5分鐘后取出，于日光下對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行檢查。通過(guò)觀察對(duì)比可知，供試品溶液、陽(yáng)性供試品溶液、加樣回收溶液色譜中，其與墨旱蓮對(duì)照藥材、旱蓮苷A對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上所顯斑點(diǎn)顏色相同，陰性供試品溶液對(duì)墨旱蓮藥材的鑒別不存在干擾情況。

在益母草鑒別過(guò)程中，取本品2.5g（無(wú)糖型），加70%乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，通過(guò)732鈉型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱（內(nèi)徑為2cm，柱高為15cm），用水洗脫至洗脫液無(wú)色，棄去洗脫液，再用氨溶液（2→13）250ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%乙醇5ml使溶解，作為供試品溶液。取鹽酸水蘇堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取益母草對(duì)照藥材2g，按供試品處理方法，制成對(duì)照藥材溶液。同時(shí)，按處方量比例制成不含益母草的宮血停顆粒，然后按供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以丙酮—無(wú)水乙醇—鹽酸（10：6：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，在105℃加熱15分鐘，放冷，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘干，噴以稀碘化鉍鉀試液-1%三氯化鐵乙醇溶液（10：1）混合溶液至斑點(diǎn)顯色清晰，晾干。供試品色譜中，在與益母草對(duì)照藥材，鹽酸水蘇堿對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，處方中其他成分對(duì)益母草藥材的鑒別無(wú)干擾。

2.2 含量測(cè)定

在本次實(shí)驗(yàn)研究中開(kāi)展含量測(cè)定相關(guān)操作時(shí)，應(yīng)當(dāng)明確色譜條件，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，選用乙腈-水（32:68）作為流動(dòng)相，以蒸發(fā)光散射器作為主要檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。依照實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)以黃芪甲苷對(duì)照品作為主要材料，加入適量甲醇后制備出標(biāo)準(zhǔn)含量的對(duì)照品溶液。在此基礎(chǔ)上，取宮血停顆粒5g，加入甲醇溶液，并進(jìn)行回流、放冷、濾過(guò)等凡是進(jìn)行處理，將濾液蒸干殘?jiān)铀芙?，飽和后進(jìn)行振搖提取，合并正丁醇液，以氨試液洗滌后，將正丁醇液蒸干，加甲醇加入殘?jiān)鼉?nèi)進(jìn)行溶液轉(zhuǎn)移，再加甲醇進(jìn)行搖勻、濾過(guò)，取出濾液，即可得到供試品溶液。密吸取對(duì)照品溶液 2μl，5μl，供試品溶液 10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算。

按處方量比例制成不含黃芪的宮血停顆粒，然后按照供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液，按上述色譜法測(cè)定，結(jié)果表明宮血停顆粒中其他成分對(duì)黃芪甲苷的測(cè)定無(wú)干擾。精密量取對(duì)照品溶液5μl，重復(fù)進(jìn)樣5次測(cè)定峰面積，RSD值為1.1%（n=5）。在穩(wěn)定性試驗(yàn)方面，取供試品溶液，隔2h進(jìn)樣1次，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，RSD值為 1.3%，顯示黃芪甲苷在至少14h內(nèi)穩(wěn)定。

之后開(kāi)展重復(fù)性試驗(yàn)，取同一批號(hào)樣品（1107507）6份，分別按樣品含量測(cè)定法測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果RSD值為2.4%（n=6）。在回收率試驗(yàn)過(guò)程中，精密稱定已知含量樣品的宮血停顆粒6份（批號(hào)1107507），精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液1.00ml，按含量測(cè)定法測(cè)定得峰面積，并計(jì)算含量，平均回收率為101.0%，RSD值為1.7%。

通過(guò)線性分析可知，黃芪甲苷在 0.20～2.50μg之間，其對(duì)數(shù)值與峰面積的對(duì)數(shù)值呈良好的線性關(guān)系。就其范圍來(lái)看，取宮血停顆粒9份，取樣量分別為含量限度計(jì)算樣品取樣量的0.5、1、1.5倍（批號(hào)1107507），按含量測(cè)定法對(duì)9份樣品分別進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的RSD值為1.8%。在此基礎(chǔ)上開(kāi)展樣品含量測(cè)定，按含量測(cè)定法對(duì)10批樣品分別進(jìn)行黃芪甲苷含量測(cè)定，測(cè)定結(jié)果為每袋1.73～2.24mg之間。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇

通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究可知，在C18柱色譜條件下，溶劑系統(tǒng)所使用乙腈-水（36：65）作為流動(dòng)相，并未獲得理想的分離效果，而采用乙腈-水（32:68）黃芪甲苷與并存雜質(zhì)的分離效果明顯，對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的進(jìn)一步開(kāi)展具有重要意義。

3.2 耐用性

在本次實(shí)驗(yàn)研究中，通過(guò)對(duì)三種型號(hào)不同的色譜柱進(jìn)行對(duì)比分析，可知三種色譜柱的分離效果較好，三種色譜柱型號(hào)分別如下：Waters Symmetry C18 5μm4.6*250mm；DikmaC18 5μ m4.6*250mm；AgilentExtendC18 5μm4.6*150mm。

3.3 供試品處理方法的研究

在本次實(shí)驗(yàn)研究中，取相同批次宮血停顆粒作為對(duì)象，依照含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)處理方法和時(shí)間進(jìn)行調(diào)整，依據(jù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行觀察和分析可知，在標(biāo)準(zhǔn)的供試品處理方法下，能夠獲得較好的回流超聲效果，并且在不同的回流時(shí)間下，實(shí)際超聲效果存在的差異較小，因此在宮血停顆粒質(zhì)量控制過(guò)程中，在供試品的處理上，可以以1小時(shí)為最佳回流時(shí)間。

[1]王憲平，張勝波，筆雪艷，張清波 宮血停顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].《黑龍江醫(yī)藥》,2013, 26(3):382-385

[2]謝守蘭，李煒，馮敏，王海亮 HPLC-ELSD法測(cè)定宮血停顆粒中黃芪甲苷的含量[J].《西北藥學(xué)雜志》, 2008, 23(3): 148-149

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A

1672-5018（2016）09-313-01