200例乙型肝炎感染者的HBV耐藥分析

趙軻

200例乙型肝炎感染者的HBV耐藥分析

趙軻

目的研究分析醫(yī)院內(nèi)使用核苷(酸)類藥物抗病毒治療乙型肝炎患者體內(nèi)乙型肝炎病毒(HBV)基因耐藥位點(diǎn)變異情況。方法采用焦磷酸測(cè)序法分別對(duì)100例經(jīng)核苷(酸)類藥物治療1年以上的患者和100例未使用過(guò)核苷(酸)類藥物治療的HBV攜帶者進(jìn)行HBV-DNA P基因區(qū)9個(gè)NAS相關(guān)耐藥突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),分析其耐藥變異檢出率并回顧性分析不同核苷(酸)類藥物的耐藥突變形式,分析HBV逆轉(zhuǎn)錄酶基因變異的發(fā)生率。結(jié)果100例HBV攜帶患者中檢出5例出現(xiàn)耐藥變異,占5%；100例乙型肝炎患者中檢出52例耐藥變異,占52%,檢測(cè)結(jié)果顯示乙型肝炎患者的耐藥檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于HBV攜帶患者(P<0.05)。所檢測(cè)出的耐藥圖表位點(diǎn)有rtM250V/L、rtN236T、rtA181V/T、rtM/V207I、rtS202G、rtM204I/V、rtT184A/L、rtL180M。所檢出的57例耐藥變異當(dāng)中,其中有8個(gè)位點(diǎn)上的耐藥變異檢出率各不相同,重要的原發(fā)性耐藥位點(diǎn)的rtM204的檢出率最高,高達(dá)60%,剩下位點(diǎn)的檢出率分別為rtL180(23/57),rtA181(18/57),rtN236(2/57),rtT184(1/57),rtS202(1/57),rtM250(1/57),rtM/V207(11/57)。結(jié)論隨著乙型肝炎患者治療時(shí)間的延長(zhǎng),HBV耐藥又越來(lái)越高的情況,52例HBV基因耐藥變異的檢出率與患者的性別、年齡、病毒基因型均無(wú)明顯相關(guān)。臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果合理應(yīng)用核苷(酸)類藥物。

乙型肝炎；核苷(酸)類藥物；耐藥變異

在為慢性乙型肝炎患者開(kāi)展治療的過(guò)程中,國(guó)際防治指南建議使用閬中抗病毒治療方法,其中一種是應(yīng)用聚乙二醇干擾素α-2a、α-2b或普通干擾素開(kāi)展治療；另外一種是應(yīng)用核苷酸類與核苷類藥物開(kāi)展治療,拉米夫定在為患者開(kāi)展治療的過(guò)程中出現(xiàn)了耐藥變異,之后關(guān)于病毒基因型與耐藥位點(diǎn)的研究越來(lái)越多,并且還有研究調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒(méi)有應(yīng)用過(guò)核苷類藥物治療的HBV感染患者體內(nèi)存在著一定的耐藥位點(diǎn)［1］。本文通過(guò)開(kāi)展相關(guān)研究主要是為了對(duì)經(jīng)過(guò)核苷類藥物治療的慢性乙型肝炎患者及HBV攜帶者的耐藥位點(diǎn)檢出情況開(kāi)展分析,以便于對(duì)檢出率與患者年齡、性別等因素之間的關(guān)系開(kāi)展分析,為臨床用藥提供參考。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年10月～2016年5月來(lái)本院治療的已確診為慢性乙型肝炎的100例患者(均口服拉米夫定、阿德福韋酯、替比夫定、恩替卡韋單藥、聯(lián)合或者序貫治療1年以上)和門(mén)診100例HBV攜帶者(未展開(kāi)藥物治療)。100例慢性乙型肝炎患者診斷符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)排除其他病因所致肝損害。其中男120例,女80例,年齡15～60歲。

1.2 儀器與試劑 儀器使用美國(guó)ABI7500熒光定量PCR分析儀,應(yīng)用PCR熒光檢測(cè)法開(kāi)展HNV-DNA的提取與檢測(cè),檢測(cè)過(guò)程中所應(yīng)用的試劑由深圳匹基生物工程有限公司提供,在實(shí)際的開(kāi)展操作的過(guò)程中,應(yīng)該嚴(yán)格依據(jù)說(shuō)明書(shū)上的相關(guān)說(shuō)明開(kāi)展操作,應(yīng)用Hot Start PCR法擴(kuò)增DNA開(kāi)展HBV多位點(diǎn)耐藥基因檢測(cè)。

1.3 方法 采用焦磷酸測(cè)序法分別對(duì)100例經(jīng)核苷(酸)類藥物治療1年以上的乙型肝炎患者和100例未使用過(guò)核苷(酸)類藥物治療的HBV攜帶者進(jìn)行HBV-DNA P基因區(qū)9個(gè)NAS相關(guān)耐藥突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),分析其耐藥變異檢出率并回顧性分析不同核苷(酸)類藥物的耐藥突變形式,分析HBV逆轉(zhuǎn)錄酶基因變異的發(fā)生率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

100例HBV攜帶患者中檢出5例出現(xiàn)耐藥變異,占5%；100例乙型肝炎患者中檢出52例耐藥變異,占52%,檢測(cè)結(jié)果顯示乙型肝炎患者的耐藥檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于HBV攜帶患者(P<0.05)。見(jiàn)表1。所檢測(cè)出的耐藥圖表位點(diǎn)有 rtM250V/L、rtN236T、rtA181V/T、rtM/V207I、rtS202G、rtM204I/V、rtT184A/L、rtL180M。所檢出的57例耐藥變異當(dāng)中,其中有8個(gè)位點(diǎn)上的耐藥變異檢出率各不相同,重要的原發(fā)性耐藥位點(diǎn)的rtM204的檢出率最高,高達(dá)60%,剩下位點(diǎn)的檢出率分別為rtL180(23/57),rtA181(18/57),rtN236(2/57),rtT184(1/57),rtS202(1/57),rtM250(1/57),rtM/V207(11/57)。

表1 100例HBV攜帶者和100例乙型肝炎患者耐藥檢測(cè)結(jié)果比較(n,%)

3 討論

HBV病毒變異的幾率非常高,即使患者沒(méi)有開(kāi)展相應(yīng)的治療,與耐藥變異相關(guān)的幾個(gè)突變位點(diǎn)的病毒品種或者是變異病毒都已經(jīng)存在,若患者還沒(méi)有開(kāi)展核苷類藥物的治療,在受到核苷治療患者體內(nèi)變異病毒的傳播之后,也有可能會(huì)出現(xiàn)耐藥變異,在當(dāng)前已有的文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng)中,沒(méi)有經(jīng)過(guò)核苷酸類及核苷類藥物治療的人群的耐藥變異的檢出率在3%～27%［2］。

本次研究中,已經(jīng)能夠確認(rèn)從未應(yīng)用核苷酸類及核苷類藥物開(kāi)展治療的患者也存在HBV變異,有研究調(diào)查項(xiàng)目在為患者開(kāi)展基線耐藥變異檢測(cè)之后再為患者應(yīng)用相關(guān)治療方案開(kāi)展治療,發(fā)現(xiàn)能夠有效提升其臨床治療效果,并且能夠降低其耐藥的發(fā)生率。已有文獻(xiàn)報(bào)道V173L、L80V、L180M是對(duì)HBV復(fù)制具有促進(jìn)作用的單個(gè)突變位點(diǎn),其中最為常見(jiàn)的是應(yīng)用拉米夫定開(kāi)展治療之后所產(chǎn)生的突變形式［3］。沒(méi)有應(yīng)用藥物治療的患者各種耐藥位點(diǎn)的檢出率為5%,這與有關(guān)文獻(xiàn)中所報(bào)道的自然發(fā)生率一致［4］。

在實(shí)際的開(kāi)展治療過(guò)程中,導(dǎo)致患者出現(xiàn)耐藥性的因素多種多樣,其中比較常見(jiàn)的有：耐藥后序貫治療、長(zhǎng)期應(yīng)用NAs、初始藥物選擇不當(dāng)?shù)?。因?在實(shí)際的為患者開(kāi)展治療的過(guò)程中,建議長(zhǎng)期應(yīng)用NAs類藥物、更換藥物或者是初始治療的患者,都應(yīng)該開(kāi)展基因耐藥檢測(cè),依據(jù)患者的臨床特點(diǎn)及用藥史,為其合理選擇相應(yīng)的抗病毒藥物。

［1］林菲,姚貝,胥婕,等.153例慢性HBV感染者核苷和核苷酸類藥物的耐藥變異位點(diǎn)分析.臨床肝膽病雜志,2014,30(3): 269-271.

［2］薛彩花,吳瑋,安俊麗,等.987例乙型肝炎患者HBV-DNA P區(qū)多位點(diǎn)耐藥突變分析及臨床意義.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志2014,23(10):1187-1190.

［3］劉淑榮,趙文靜,劉薇,等.313例經(jīng)核苷酸類似物治療的慢性乙型肝炎患者HBV 基因型及耐藥變異分析.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2015,15(11):3-4.

［4］劉妍,王春梅,紀(jì)冬,等.1121例慢性乙型肝炎患者HBV反轉(zhuǎn)錄酶區(qū)的耐藥突變分析(英文).解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2009,34(6): 659-662.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.20.098

2016-09-19］

454000 焦作市第三人民醫(yī)院