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    異源淋巴細(xì)胞免疫治療后反復(fù)妊娠丟失患者的外周血NK細(xì)胞變化

    2016-03-06 02:10:58范格英林蕓湯小湄趙楊苗竹林
    海南醫(yī)學(xué) 2016年2期
    關(guān)鍵詞:異源免疫治療亞群

    范格英,林蕓,湯小湄,趙楊,苗竹林

    (1.廣東省人民醫(yī)院廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院婦產(chǎn)科,廣東廣州510080;2.暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,廣東廣州510632;3.廣東省計(jì)劃生育專科醫(yī)院廣東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所生殖中心,廣東廣州510600)

    異源淋巴細(xì)胞免疫治療后反復(fù)妊娠丟失患者的外周血NK細(xì)胞變化

    范格英1,林蕓1,湯小湄2,趙楊1,苗竹林3

    (1.廣東省人民醫(yī)院廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院婦產(chǎn)科,廣東廣州510080;2.暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,廣東廣州510632;3.廣東省計(jì)劃生育??漆t(yī)院廣東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所生殖中心,廣東廣州510600)

    目的觀察異源淋巴細(xì)胞免疫治療后反復(fù)妊娠丟失(RPL)患者的外周血自然殺傷(NK)細(xì)胞變化情況。方法選取2012年1月至2013年12月期間在我院門診就診的反復(fù)妊娠丟失并具備免疫治療適應(yīng)證的患者30例(RPL組),采用流式細(xì)胞術(shù)分析異源淋巴細(xì)胞免疫治療后其外周血NK細(xì)胞及亞群的變化,并以26例正常婦女做為健康對(duì)照組進(jìn)行比較。結(jié)果異源淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療前,RPL組患者外周血CD3-CD56+NK細(xì)胞比例明顯高于健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而其余亞群比例CD3+CD56+、CD56dimCD16+、CD56brightCD16-、CD56+CD69+比較則差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);經(jīng)過治療后,患者外周血CD3-CD56+NK細(xì)胞比例從治療前的(17.07±8.19)降為治療后的(10.02±7.32),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而其余亞群比例治療前后比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論異源淋巴細(xì)胞免疫治療可能通過降低CD3-CD56+NK細(xì)胞比例促進(jìn)再次妊娠的成功。

    異源淋巴細(xì)胞免疫治療;NK細(xì)胞;反復(fù)妊娠丟失

    近年來,妊娠丟失成為困擾人們的主要難題,尤其是不明原因的反復(fù)妊娠丟失,嚴(yán)重影響女性身心健康。目前研究認(rèn)為妊娠猶如半同種異體移植,妊娠婦女對(duì)胚胎父系同種抗原呈低識(shí)別或低反應(yīng)性,容易導(dǎo)致妊娠丟失的發(fā)生,通過免疫治療可使患者的妊娠丟失率得到有效的控制,并取得了較好的療效,但其作用機(jī)制尚不明了。筆者采用淋巴細(xì)胞免疫(Lymphocyte immunotherapy,LIT)治療反復(fù)妊娠丟失(Recurrent pregnancy loss,RPL)患者,觀察其治療后的外周血自然殺傷細(xì)胞(Natural killer cell,NK)亞群變化,探討有效的反復(fù)妊娠丟失治療手段,從而避免妊娠丟失的再次發(fā)生,減少患者的痛苦。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料選取2012年1月至2013年12月期間在我院門診就診且自然流產(chǎn)兩次及兩次以上的反復(fù)妊娠丟失患者30例(RPL組)采用異源淋巴細(xì)胞免疫治療,所有入組患者均有生育要求,封閉抗體檢測(cè)陰性,工作及生活環(huán)境無污染[3]。排除導(dǎo)致妊娠丟失有關(guān)的遺傳因素、解剖學(xué)因素、內(nèi)分泌功能紊亂、感染以及其他免疫性疾?。慌懦蟹讲挥蛩?要求配偶精液檢查正常,染色體核型分析無異常)。同時(shí)選取26例無不良妊娠史的正常體檢婦女作為健康對(duì)照組。

    1.2 異源淋巴細(xì)胞免疫治療方法清晨少量進(jìn)食,抽取配偶或第三方供血者抗凝靜脈血20 ml,無菌條件下用淋巴細(xì)胞分離液分離得到淋巴細(xì)胞,用生理鹽水反復(fù)洗滌,制備淋巴細(xì)胞液后在患者前臂內(nèi)側(cè)或上臂外側(cè)處作皮內(nèi)多點(diǎn)接種,2~3周后再次注射,共3~4次,可依據(jù)患者病情進(jìn)行個(gè)體化調(diào)整。

    1.3 流式細(xì)胞檢測(cè)所用實(shí)驗(yàn)試劑及步驟FACS Calibur流式細(xì)胞儀為美國(guó)Becton Dickinson公司生產(chǎn),CD16 FITC、CD56 PE、CD3 PerCP、CD69 APC鼠抗人熒光單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)BD公司,4℃避光保存。將流式專用試管按順序進(jìn)行檢測(cè)項(xiàng)目和檢測(cè)標(biāo)本編號(hào),取抗凝外周血約50μl,依次加入抗體CD16 FITC 8~10μl、CD56 PE 8~10μl、CD3 PerCP 8~10μl、CD69 APC 2~4μl進(jìn)行標(biāo)記,搖勻,避光孵育15 min。裂解后磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌,離心棄上清,制備PBS懸液約350μl,上機(jī)檢測(cè)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組受試者治療前的NK細(xì)胞亞群表型變化比較RPL組患者的外周血CD3-CD56+NK細(xì)胞比例明顯高于健康對(duì)照組(P<0.05),而CD56brightCD16-NK、CD56dimCD16+NK、自然殺傷T細(xì)胞(NKT)及活化NK細(xì)胞比例比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

    表1 兩組受試者治療前的NK細(xì)胞亞群表型變化比較(±s,%)

    表1 兩組受試者治療前的NK細(xì)胞亞群表型變化比較(±s,%)

    組別RPL組(n=30)健康對(duì)照組(n=26) t值P值CD3-CD56+17.07±8.19 10.69±7.21 3.072 0.0033 CD3+CD56+5.57±4.37 5.90±3.88 0.297 0.7678 CD56dimCD16+88.12±9.99 87.06±8.14 0.431 0.6682 CD56brightCD16-3.50±2.90 3.79±2.87 0.375 0.7091 CD56+CD69+4.89±2.26 4.92±2.05 0.0517 0.9590

    2.2 RPL淋巴細(xì)胞免疫治療后NK細(xì)胞亞群表型變化比較經(jīng)過治療后,患者外周血CD3-CD56+NK細(xì)胞比例從治療前的(17.07±8.19)降為治療后的(10.02±7.32),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而其余亞群比例治療前后比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

    表230 例RPL患者淋巴細(xì)胞免疫治療后NK細(xì)胞亞群表型變化(±s,%)

    表230 例RPL患者淋巴細(xì)胞免疫治療后NK細(xì)胞亞群表型變化(±s,%)

    時(shí)間治療前治療后t值P值CD3-CD56+17.07±8.19 10.02±7.32 3.515 0.0009 CD3+CD56+5.57±4.37 4.22±5.73 1.026 0.3091 CD56dimCD16+88.12±9.99 86.12±9.21 0.806 0.4234 CD56brightCD16-3.50±2.90 3.98±2.40 0.698 0.4877 CD56+CD69+4.89±2.26 4.11±2.49 1.270 0.2090

    3 討論

    3.1 妊娠免疫耐受機(jī)制以及反復(fù)妊娠丟失發(fā)生的免疫失衡機(jī)理妊娠丟失多數(shù)被認(rèn)為是一種對(duì)異常染色體受精卵的自然淘汰現(xiàn)象,而反復(fù)妊娠丟失與散發(fā)性妊娠丟失則不同。研究發(fā)現(xiàn)常見妊娠丟失的原因包括遺傳、免疫、感染、解剖、內(nèi)分泌等因素,但也有很多患者發(fā)病原因不明,被稱為原因不明反復(fù)妊娠丟失,研究報(bào)道原因不明反復(fù)妊娠丟失占反復(fù)妊娠丟失患者的40%~60%[1],是目前臨床以及學(xué)術(shù)界關(guān)注的重點(diǎn)。隨著基礎(chǔ)免疫學(xué)及免疫遺傳學(xué)的發(fā)展,越來越多的研究發(fā)現(xiàn)絕大部分不明原因的反復(fù)妊娠丟失病因與母胎免疫調(diào)節(jié)紊亂有關(guān)。正常妊娠是一種半同種異體移植,胎兒與母體間存在免疫平衡關(guān)系,這種平衡有賴于妊娠婦女對(duì)妊娠半同種抗原所表現(xiàn)的一種免疫耐受,而正常的妊娠免疫耐受涉及諸多因素,其中任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常,都有可能導(dǎo)致妊娠失敗。胚胎作為同種半異體移植物,攜帶的父系抗原表達(dá)在母胎交界的滋養(yǎng)細(xì)胞表面,通過探討胚胎獲得“免疫耐受”的機(jī)制,為尋找治療反復(fù)妊娠丟失乃至器官移植的有效方法提供更充分的理論依據(jù)[2]。從生殖免疫角度分析,妊娠的維持極其復(fù)雜,涉及諸多因素。近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究主要從以下幾個(gè)方面解釋反復(fù)妊娠丟失的發(fā)病機(jī)制,即封閉抗體、Thl/Th2平衡、NK細(xì)胞以及CD4+CD25+Treg細(xì)胞功能等方面,其中NK細(xì)胞的變化是目前研究的熱點(diǎn)。

    3.2 反復(fù)妊娠丟失患者NK細(xì)胞的變化NK細(xì)胞屬于淋巴細(xì)胞譜系細(xì)胞群,占外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量的10%~15%,是機(jī)體天然免疫系統(tǒng)重要的組成部分,是一類既不需要抗原刺激、又不需抗體參與即能殺傷某些靶細(xì)胞的非T非B類淋巴細(xì)胞,也就是說無需抗原預(yù)先致敏就自發(fā)殺傷靶細(xì)胞,因此,NK細(xì)胞有細(xì)胞毒性效應(yīng)。針對(duì)反復(fù)妊娠丟失患者外周血免疫細(xì)胞的變化研究目前報(bào)道較多,研究認(rèn)為,妊娠婦女外周血NK細(xì)胞升高可能會(huì)導(dǎo)致妊娠丟失[3]。同時(shí)NK細(xì)胞毒性、數(shù)量及活性增加與妊娠丟失有關(guān),外周血高水平的NK細(xì)胞提示可能發(fā)生生化妊娠或妊娠丟失[4]。有些學(xué)者甚至提出采用外周血CD56+NK細(xì)胞所占比例作為妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)指標(biāo)[5]。研究發(fā)現(xiàn),正常情況下,早期妊娠NK細(xì)胞活性較未孕時(shí)明顯降低,表明減少NK細(xì)胞的比例和抑制其活性也許能阻止母體免疫系統(tǒng)對(duì)胎兒抗原的攻擊,從而維持正常妊娠。

    3.3 異源淋巴細(xì)胞免疫治療對(duì)NK細(xì)胞變化影響反復(fù)妊娠丟失作為一種常見的病理妊娠,約占整個(gè)妊娠的10%~15%[6]。研究發(fā)現(xiàn),父方淋巴細(xì)胞作為滋養(yǎng)層淋巴細(xì)胞交叉反應(yīng)刺激抗原,使之產(chǎn)生抗丈夫異源淋巴細(xì)胞抗體,增大組織相容性抗原(HLA)的組織相容性。有學(xué)者提出,反復(fù)妊娠丟失是由于母體不能識(shí)別父方抗原,從而不能產(chǎn)生封閉抗體,導(dǎo)致胚胎被母體的免疫系統(tǒng)所排斥[7],采用配偶或第三方異源淋巴細(xì)胞免疫治療誘導(dǎo)母體產(chǎn)生保護(hù)性封閉抗體,使胎兒免受母體免疫系統(tǒng)及子宮局部免疫組織的排斥與攻擊,維持正常妊娠。對(duì)同種免疫型反復(fù)妊娠丟失患者采用丈夫或第三方異源淋巴細(xì)胞進(jìn)行同種致敏治療,抑制母胎間的細(xì)胞性免疫排斥反應(yīng)減少妊娠丟失的發(fā)生。采取皮內(nèi)注射丈夫的異源淋巴細(xì)胞治療復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)患者,防止了胚胎被母體免疫系統(tǒng)的殺傷而發(fā)生妊娠丟失,使胎兒易于存活,妊娠成功率提高[8],但其作用機(jī)制是否與降低NK細(xì)胞的數(shù)量以及活性有關(guān),尚不明了。

    近幾年對(duì)NK細(xì)胞亞群CD69+活化NK細(xì)胞,CD3+CD56+NKT細(xì)胞進(jìn)行大量的研究?;罨疦K細(xì)胞直接反映了細(xì)胞的免疫活性,研究發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞升高的患者,免疫功能出現(xiàn)異常,可能導(dǎo)致妊娠丟失,需要積極的干預(yù)治療[9]。本研究結(jié)果顯示,經(jīng)異源淋巴細(xì)胞免疫治療后總的NK細(xì)胞顯著降低,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義??梢?,異源淋巴細(xì)胞免疫治療能明顯降低NK細(xì)胞的比例,有利于妊娠維持。對(duì)NK細(xì)胞亞群進(jìn)行分析則發(fā)現(xiàn),異源淋巴細(xì)胞免疫治療并不能改變其亞群在NK細(xì)胞中的比例,而且治療后CD69+活化NK細(xì)胞及CD3+CD56+NKT細(xì)胞的比例也未發(fā)生明顯變化,是否與本研究病例少有關(guān),值得進(jìn)一步研究。

    綜上所述,檢測(cè)NK細(xì)胞免疫表型變化有助于反復(fù)妊娠丟失患者病因分析,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)有利于觀察異源淋巴細(xì)胞免疫治療的療效,從而避免妊娠丟失的再次發(fā)生,減少患者的痛苦。

    [1]Zhang BY,Wei YS,Niu JM,et al.Risk factors for unexplained recurrent spontaneous abortion in a population from southern China[J]. Int J Gynaecol Obstet,2010,108(2):135-138.

    [2]Fraccaroli L,Alfieri J,Larocca L,et al.A potential tolerogenic immune mechanism in a trophoblast cell line through the activation of chemokine-induced T cell death and regulatory T cell modulation[J].Hum Reprod,2009,24(1):166-175.

    [3]Matsubayashi H,Shida M,Kondo A,et al.Preconception peripheral natural killer cell activity as a predictor of pregnant outcome in Pent with unexplained infertility[J].Am J Repred lmmunol,2005,53(3): 126-131.

    [4]Miko E,Manfai Z,Meggyes M,et al.Possible role of natural killer and natural killer T-like cells in implantation failure after IVF[J]. Reprod Biomed Online,2010,21(6):750-756.

    [5]Yamada H,Morikawa M,Kato EH,et al.Preconceptional natural killercellactivityandpercentagespredictorsofbiochemical pregnancy and spontaneous abortion with normal chromosome karyotype[J].Am J Reprod Immunol,2003,50:351-354.

    [6]Gharesi-Fard B,Zolghadri J,Foroughinia L,et al.Effectiveness of leukocyte immunotherapy in primary recurrent spontaneous abortion (RSA)[J].Iran J Immunol,2007,4(3):173-175.

    [7]Nonaka T,Takakuwa K,Ooki I,et al.Results of immunotherapy for patients with unexplained primary recurrent abortions—prospective non-randomized cohort study[J].Am J Reprod Immunol,2007,58 (6):530-536.

    [8]Liang P,Mo M,Li GG,et al.Comprehensive analysis of peripheral blood lymphocytes in 76 women with recurrent miscarriage before and after lymphocyte immunotherapy[J].Am J Reprod Immunol, 2012,68(2):164-174.

    [9]van den Heuvel MJ,Peralta CG,Hata K,et al.Decline in number of elevated blood CD3+CD56+NKT cells in response to intravenous immunoglobulin treatment correlates with successful pregnancy[J].Am J Reprod Immunol,2007,58(5):447-459.

    R714.2

    B

    1003—6350(2016)02—0282—03

    10.3969/j.issn.1003-6350.2016.02.036

    2015-06-06)

    廣東省社會(huì)發(fā)展科技“臨床醫(yī)學(xué)”重點(diǎn)課題(編號(hào):2011A030400011)

    范格英。E-mail:15019609910@163.com

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