垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)及其與膽管癌臨床病理特征的關(guān)系

王華杰，蘇醒，孫樂瑾

(1.海南省人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，海南?？?70311；2.?？谑腥嗣襻t(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，海南?？?70208)

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)及其與膽管癌臨床病理特征的關(guān)系

王華杰1，蘇醒1，孫樂瑾2

(1.海南省人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，海南?？?70311；2.?？谑腥嗣襻t(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，海南?？?70208)

目的分析垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因(PTTG)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)的表達(dá)及其與膽管癌臨床病理特征的關(guān)系，探討其臨床適用性。方法選取2010年3月至2015年6月于我院就診的46例膽管癌患者的病理標(biāo)本作為試驗(yàn)組，另選擇同時期的40例正常肝外膽管組織作為對照組。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法，觀察PTTG和bFGF在兩種組織中的表達(dá)差異，同時分析PTTG和bFGF表達(dá)與膽管癌臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性，運(yùn)用Spearman等級相關(guān)分析PTTG和bFGF表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果試驗(yàn)組中PTTG基因蛋白表達(dá)陽性38例，陽性表達(dá)率為82.61%，對照組中PTTG基因蛋白表達(dá)陽性19例，陽性表達(dá)率為47.50%，兩組陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；試驗(yàn)組中bFGF表達(dá)陽性34例，陽性表達(dá)率為73.91%，對照組中bFGF表達(dá)陽性10例，陽性表達(dá)率為25.00%，兩組陽性率比較，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；試驗(yàn)組組織中PTTG和bFGF表達(dá)陽性率與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關(guān)(P＜0.05)，而與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置均無關(guān)(P＞0.05)；Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示膽管癌表達(dá)水平中PTTG與bFGF表達(dá)情況呈等級正相關(guān)(r=0.29，P＜0.05)。結(jié)論垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因和堿性成纖維細(xì)胞生長因子在膽管癌中的表達(dá)顯著，與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關(guān)，兩種指標(biāo)聯(lián)合監(jiān)測臨床價值較高。

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因；堿性成纖維細(xì)胞生長因子；膽管癌；臨床病理特征

膽管癌是一種發(fā)生于膽管的惡性腫瘤，也是消化系統(tǒng)比較常見的惡性腫瘤之一[1]。膽管癌患者通常起病隱匿，病情發(fā)展迅速，對周圍組織侵襲性也比較強(qiáng)，普通的手術(shù)治療難以起效，臨床預(yù)后較差。目前臨床上發(fā)現(xiàn)多數(shù)膽管癌患者除出現(xiàn)臨床癥狀外，還合并一些生物因子的變化，這對疾病的早期診斷非常重要[2]。因此，有早期癥狀的患者聯(lián)合監(jiān)測相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)有助于疾病的早期診斷。堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)是目前膽管癌研究較多的相關(guān)因子，參與血管新生的調(diào)控[3]。目前臨床上發(fā)現(xiàn)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因(PTTG)也是一種相關(guān)因子，其對腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有非常重要的作用[4]。故此，我院結(jié)合自身病例分析了PTTG和bFGF這兩種指標(biāo)的表達(dá)及其與膽管癌臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2010年3月至2015年6月于我院就診的46例膽管癌患者的病理標(biāo)本作為試驗(yàn)組，另選擇同時期的40例正常肝外膽管組織(其他良性疾病行膽管切除患者)作為對照組。試驗(yàn)組患者男性27例，女性19例，年齡55～75歲，平均(69.9±6.1)歲，對照組患者男性26例，女性14例，年齡55～75歲，平均(70.0±6.0)歲。兩組患者的性別、年齡等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)法，實(shí)驗(yàn)材料采用博士德公司生產(chǎn)的特異性抗兔抗人PTTG多克隆抗體，福州邁新生物技術(shù)公司生產(chǎn)的鼠抗人bFGF單克隆抗體、SP試劑盒、DAB顯色系統(tǒng)。其中PTTG多抗及bFGF單抗的工作濃度均為1:100。操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行：常規(guī)切片脫蠟和水化后，用高溫高壓檸檬酸緩沖液修復(fù)抗原，用過氧化氫溶液反應(yīng)10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶，后通過稀釋的羊血清封閉10 min，加入一抗在濕盒中4℃放置24 h，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后加二抗，后用第二代辣根酶標(biāo)記鏈酶菌素工作液各孵育10 min，再沖洗3次，最后在DAB中顯色5 min，用自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，乙醇梯度脫水，封片觀察。觀察PTTG和bFGF在兩種組織中的表達(dá)差異。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，等級資料比較采用兩樣本比較的Wilcoxon法，臨床病例指標(biāo)資料檢驗(yàn)比較采用χ2檢驗(yàn)，運(yùn)用Spearman等級相關(guān)分析PTTG和bFGF表達(dá)的相關(guān)關(guān)系，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTTG和bFGF在兩種組織中的表達(dá)差異比較免疫組化結(jié)果顯示，PTTG基因蛋白表達(dá)產(chǎn)物主要分布于細(xì)胞漿，細(xì)胞核無染色，其中陽性染色為均勻一致的棕褐色細(xì)顆粒；而bFGF同樣遍布于細(xì)胞漿，可見部分胞核和血管內(nèi)皮細(xì)胞著色，見圖1、圖2。試驗(yàn)組中PTTG基因蛋白陽性表達(dá)率為82.61%(38/46)，對照組中PTTG基因蛋白陽性表達(dá)率為47.50%(19/40)，兩組陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.21，P=0.00)，試驗(yàn)組中bFGF陽性表達(dá)率為73.91%(34/46)，對照組中bFGF表達(dá)陽性表達(dá)率為25.00%(10/40)，兩組陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.51，P=0.00)，見表1。

表1 PTTG和bFGF在兩種組織中的表達(dá)差異(例)

圖1 PTTG基因蛋白表達(dá)免疫組化圖

圖2 bFGF表達(dá)免疫組化圖

2.2 PTTG和bFGF表達(dá)與膽管癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系試驗(yàn)組組織中PTTG和bFGF表達(dá)陽性率與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關(guān)(P＜0.05)，而與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置均無關(guān)(P＞0.05)，見表2。

表2 PTTG和bFGF表達(dá)與膽管癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系[例(%)]

2.3 PTTG和bFGF在膽管癌中表達(dá)的等級相關(guān)關(guān)系Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，膽管癌表達(dá)水平中PTTG與bFGF表達(dá)情況呈等級正相關(guān)(r= 0.29，P＜0.05)，見表3。

表3 PTTG和bFGF在膽管癌中表達(dá)的等級相關(guān)性[例（%）]

3 討論

膽管癌的具體發(fā)病機(jī)制不明，早期確診病例可以通過手術(shù)切除治療，同時輔以術(shù)后放療及化療來鞏固和提高手術(shù)治療效果。但是現(xiàn)在臨床上面臨的通常是錯過最佳手術(shù)時間[5]。主要原因是由于膽管癌的起病不典型，臨床癥狀無特異性，加之患者耐受，一般在就診時多已處于中晚期[6]。且膽管癌的病情進(jìn)展通常比較快，也較易發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移，給臨床治療帶來挑戰(zhàn)[7]。而對于膽管癌的早期診斷仍然是一項(xiàng)研究重點(diǎn)?；颊叱霈F(xiàn)臨床癥狀后，再結(jié)合較為特異性的檢查對于疾病的早期診斷有幫助。

bFGF是堿性成纖維細(xì)胞生長因子，多數(shù)臨床研究發(fā)現(xiàn)它是一個傳遞發(fā)育信號，能刺激細(xì)胞增殖、遷移，具有強(qiáng)烈的血管生成作用，是促進(jìn)血管新生的一個重要參與因子[8]。而血管新生則是腫瘤轉(zhuǎn)移和生長必不可少的步驟[9]。因此對于bFGF的早期監(jiān)測是對于膽管癌的早期診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo)。而現(xiàn)在進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)一種新的轉(zhuǎn)化基因，即PTTG，為垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因，能對bFGF mRNA及其的蛋白質(zhì)進(jìn)行調(diào)控，使其表達(dá)水平顯著上升，進(jìn)一步又刺激bFGF蛋白分泌、合成，因此是bFGF的上一級調(diào)控[10-11]。而PTTG在膽管癌中的診斷價值的報(bào)道尚比較少，缺乏可靠依據(jù)。故此我院分析了PTTG和bFGF這兩種指標(biāo)在膽管癌的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①免疫組化結(jié)果顯示，PTTG基因蛋白表達(dá)產(chǎn)物主要分布于細(xì)胞漿，細(xì)胞核無染色，其中陽性染色為均勻一致的棕褐色細(xì)顆粒。而bFGF同樣遍布于細(xì)胞漿，可見部分胞核和血管內(nèi)皮細(xì)胞著色，提示臨床實(shí)驗(yàn)研究主要在細(xì)胞漿內(nèi)觀察兩種蛋白因子。試驗(yàn)組中PTTG基因蛋白陽性表達(dá)率為82.61%，而選擇的對照組中PTTG基因蛋白陽性表達(dá)率為47.50%，試驗(yàn)組中bFGF陽性表達(dá)率為73.91%，對照組中bFGF陽性表達(dá)率為25.00%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明PTTG和bFGF在膽管癌中也均有特異性的表達(dá)情況，且監(jiān)測的陽性率均比較高。這項(xiàng)研究結(jié)果于醫(yī)師的研究結(jié)果類似[12]；②膽管癌患者病理組織中PTTG和bFGF表達(dá)陽性率與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關(guān)，而與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置無關(guān)，提示PTTG和bFGF對膽管癌的發(fā)病，病情進(jìn)展有診斷意義。在病情的不同時期，表達(dá)有差異，且從數(shù)據(jù)中可看出，腫瘤分化程度越低、TNM分期級別越高、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及周圍組織腫瘤浸潤的病理組織中PTTG和bFGF均強(qiáng)表達(dá)，說明膽管癌的發(fā)生發(fā)展與PTTG和bFGF的特異性表達(dá)有關(guān)；③Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示膽管癌表達(dá)水平中PTTG與bFGF表達(dá)情況呈等級正相關(guān)，不難解釋，PTTG是對bFGF的上一級調(diào)控，直接影響bFGF的表達(dá)情況。

綜上所述，垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因和堿性成纖維細(xì)胞生長因子在膽管癌中的表達(dá)顯著，與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關(guān)，兩種指標(biāo)聯(lián)合監(jiān)測臨床價值較高。

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Expression of pituitary tumor transforming gene and basic fibroblast growth factor and its relationship withclinicopathological features of cholangiocarcinoma.

WANG Hua-jie1,SU Xing1,SUN Le-jin2.1.Department of Critical Care Medicine,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311,Hainan,CHINA;2.Department of Critical Care Medicine,Haikou People's Hospital,Haikou 570208,Hainan,CHINA

ObjectiveTo analyze the expression of pituitary tumor transforming gene(PTTG)and basic fibroblast growth factor(bFGF)and its relationship with clinicopathological features of cholangiocarcinoma.MethodsThe pathological specimens of 46 patients with cholangiocarcinoma were selected from March 2010 to June 2015 in our hospital as the test group,and 40 specimens of normal extrahepatic bile duct tissue were selected at the same period as the control group.Immunohistochemical method was used to observe the expression of PTTG and bFGF in the two groups. The correlation between PTTG and bFGF expression and clinicopathological features of cholangiocarcinoma were analyzed.ResultsPTTG gene was positively expressed in 38 patients(with the positive expression rate of 82.61%)in the test group and in 19 patients(47.50%)in the control group,showing statistically significant difference in positive expression rate between the two groups(P＜0.05).bFGF was positively expressed in 34 patients(with the positive expression rate of 73.91%)in the test group and in 10 patients(25.00%)in the control group,with statistically significant difference in positive expression rate between the two groups(P＜0.05).In the test group,the positive expression rates of PTTG and bFGF were correlated with tumor differentiation degree,TNM stage,lymph node metastasis and tumor depth of invasion (P＜0.05),but not with gender,age,tumor size,tumor location(P＞0.05).Spearman rank correlation analysis showed that expression of PTTG and bFGF in cholangiocarcinoma were positively correlated(r=0.29,P＜0.05).ConclusionPituitary tumor transforming gene and basic fibroblast growth factor are significantly expressed in cholangiocarcinoma, which are related to tumor differentiation,TNM stage,lymph node metastasis and depth of invasion.Monitoring of the two indexes has high clinical value.

Pituitary tumor transforming gene(PTTG);Basic fibroblast growth factor(bFGF);Cholangiocarcinoma;Clinicopathological features

R735.8

A

1003—6350（2016）02—0189—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.02.006

2015-09-02)

海南省自然科學(xué)基金(編號：814321)

王華杰。E-mail：wanghuajie1981@sina.com