臍血腎上腺髓質(zhì)素及胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡與FGR的相關(guān)性分析

謝暉，劉紅艷，陳軍

(安康市婦幼保健醫(yī)院婦產(chǎn)科1、檢驗(yàn)科2，陜西 安康 725000)

臍血腎上腺髓質(zhì)素及胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡與FGR的相關(guān)性分析

謝暉1，劉紅艷1，陳軍2

(安康市婦幼保健醫(yī)院婦產(chǎn)科1、檢驗(yàn)科2，陜西 安康 725000)

目的研究臍血腎上腺髓質(zhì)素(ADM)、胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡與胎兒生長(zhǎng)受限(FGR)的相關(guān)性。方法選擇2012年1月至2014年12月在我院分娩的生長(zhǎng)受限的胎兒76例，記為觀察組，再選擇同期在我院分娩的適齡兒76例，記為對(duì)照組。對(duì)比兩組胎兒的一般情況，然后進(jìn)行ADM、胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡指數(shù)、Bc1-1蛋白以及Caspase-3蛋白水平的檢測(cè)對(duì)比，最后進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果觀察組胎兒的體重、身長(zhǎng)、坐高以及頭圍均明顯小于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組ADM、凋亡指數(shù)分別為(64.27±17.32)pg/ml、(34.82±9.47)%，均明顯高于對(duì)照組的(48.93±12.11)pg/ml、(8.04±2.46)%，并且觀察組Bc1-1蛋白水平低于對(duì)照組，而Caspase-3蛋白水平高于對(duì)照組，以上各項(xiàng)指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；ADM與Bc1-1表達(dá)水平呈明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.461，P=0.000)，與Caspase-3蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.783，P=0.000)，而凋亡指數(shù)與ADM、Bc1-1蛋白均無顯著相關(guān)性(r=0.283，P=0.827；r=0.362，P=0.103)，與Caspase-3蛋白呈正相關(guān)(r=0.821，P=0.000)。結(jié)論臍血ADM與滋養(yǎng)細(xì)胞相關(guān)凋亡蛋白Bc1-1蛋白以及Caspase-3蛋白的共同作用下形成FGR。ADM與胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡水平與FGR的發(fā)生存在顯著的相關(guān)性。

胎兒生長(zhǎng)受限；臍血；腎上腺髓質(zhì)素；胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞；凋亡；相關(guān)性

初生兒的生長(zhǎng)發(fā)育受多種因素影響，其中胎兒期吸收的營(yíng)養(yǎng)在很大程度上決定了后期的生長(zhǎng)發(fā)育，尤其是相關(guān)激素的調(diào)節(jié)在一定程度上代表了代謝水平，因此影響身體質(zhì)量。而激素等作用的效果受激素量的多少、作用時(shí)間長(zhǎng)短的影響，因此，不同胎齡的初生兒在體格方面顯示出較大的差別，其中胎兒生長(zhǎng)受限(FGR)就是在一定程度上無法達(dá)到適齡兒的生長(zhǎng)情況的新生兒，對(duì)其深入研究顯得尤為重要[1-2]。臍血腎上腺髓質(zhì)素(ADM)能擴(kuò)張臍血管，同時(shí)具有氧氣及物質(zhì)的供給，而胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞提供主要的營(yíng)養(yǎng)，兩者相關(guān)水平的波動(dòng)對(duì)胎兒的生長(zhǎng)影響深遠(yuǎn)[3]。鑒于此，本文通過對(duì)我院FGR與適齡兒的ADM、胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞水平進(jìn)行對(duì)比并探究其中的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月至2014年12月在我院分娩的生長(zhǎng)受限的胎兒76例作為觀察組，其中男嬰41例，女嬰35例；胎齡36.4～40.4周，平均(38.6±2.18)周。選擇同期在我院分娩的適齡兒76例作為對(duì)照組，其中男嬰40例，女嬰36例；胎齡37.1～41.3周，平均(39.3±2.23)周。兩組胎兒的性別、胎齡等基本資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 (1)臍血在胎兒出生后斷臍取靜脈臍血4 ml，在分離后于-70℃的環(huán)境下保存。采用放射免疫法檢測(cè)ADM水平，其中試劑盒來自北京華埠力特生物技術(shù)研究所。(2)胎盤是在分娩后在胎盤母體面取得體積約為8 cm3的正方體組織塊，然后加用10%甲醛溶液固定并通過石蠟包埋后得到4 μm的切片。采用免疫組織化學(xué)法對(duì)胎盤組織中的 Bcl-1和Caspase-3蛋白水平進(jìn)行測(cè)定，然后通過鏡檢得到相關(guān)水平。(3)最后是胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測(cè)：采用原位末端標(biāo)記法檢測(cè)，試劑盒來自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)[3-5](1)經(jīng)染色后呈現(xiàn)為棕黃至棕褐色的滋養(yǎng)細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，以此計(jì)算Bc1-1和Caspase-3蛋白水平；(2)經(jīng)染色為黑色的胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞為凋亡細(xì)胞，然后計(jì)算凋亡指數(shù)。其中凋亡指數(shù)=凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組受檢者的體格發(fā)育情況比較 觀察組患者的體重、身長(zhǎng)、坐高以及頭圍均明顯小于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組受檢者的體格發(fā)育情況比較(±s)

表1 兩組受檢者的體格發(fā)育情況比較(±s)

例數(shù)組別 體重(g)身長(zhǎng)(cm)坐高(cm)頭圍(cm) 76 76觀察組對(duì)照組t值P值3.09±0.17 3.27±0.21 5.809 0.000 50.12±2.12 50.93±2.20 2.311 0.022 33.68±1.29 34.12±1.34 2.062 0.041 33.47±1.17 33.98±1.29 2.553 0.012

2.2 兩組受檢者的ADM及凋亡指數(shù)比較 觀察組患者的ADM及凋亡指數(shù)均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組受檢者的ADM及凋亡指數(shù)比較(±s)

表2 兩組受檢者的ADM及凋亡指數(shù)比較(±s)

組別 例數(shù)ADM（pg/ml） 凋亡指數(shù)(%)觀察組對(duì)照組t值P值76 76 64.27±17.32 48.93±12.11 6.328 0.000 34.82±9.47 8.04±2.46 23.861 0.000

2.3 兩組受檢者的胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比較 觀察組受檢者的Bcl-1蛋白水平低于對(duì)照組，而Caspase-3蛋白水平高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 兩組受檢者的胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比較(±s)

表3 兩組受檢者的胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比較(±s)

組別 例數(shù)Bcl-1蛋白(U/ml)Caspase-3蛋白(U/L)觀察組對(duì)照組t值P值76 76 3.68±1.02 4.73±1.34 5.436 0.000 18.94±3.47 8.34±1.23 25.100 0.000

2.4 ADM、凋亡指數(shù)與滋養(yǎng)細(xì)胞 Bc1-1、Caspase-3蛋白的相關(guān)性 ADM與Bc1-1表達(dá)水平呈明顯的負(fù)相關(guān)，與Caspase-3蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)。而凋亡指數(shù)與ADM、Bc1-1蛋白均無顯著相關(guān)性，與Caspase-3蛋白呈正相關(guān)，見表4。

表4 ADM、凋亡指數(shù)與滋養(yǎng)細(xì)胞Bc1-2、Caspase-3蛋白相關(guān)性

3 討 論

臨床上，F(xiàn)GR是指胎兒生長(zhǎng)情況弱于適齡兒的新生兒，可能會(huì)受到遺傳因素以及胎盤情況影響[6-7]。FGR是一種嚴(yán)重危害胎兒健康的主要并發(fā)癥之一，對(duì)圍產(chǎn)兒死亡率的影響也較大，在胎兒逐漸成長(zhǎng)的過程中還會(huì)對(duì)其心智及體能造成不同程度的影響，并且使成年人具有較高的合并冠心病、糖尿病的概率。本研究通過對(duì)FGR與適齡兒出生情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，觀察組體重、身長(zhǎng)、坐高以及頭圍均顯著小于對(duì)照組，在ilhan等[8]和劉亞軍等[9]的報(bào)道中也有類似結(jié)論。說明一般情況下FGR生長(zhǎng)發(fā)育小于適齡兒，在體格上存在明顯的表現(xiàn)差異。原因可能是因?yàn)镕GR的發(fā)病機(jī)制相對(duì)復(fù)雜，但也可能與ADM、胎盤細(xì)胞的凋亡存在較大的關(guān)系。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組ADM、凋亡指數(shù)以及Caspase-3蛋白水平均顯著高于對(duì)照組，而Bc1-1蛋白水平低于對(duì)照組。通過相關(guān)性分析得到ADM與Bc1-1表達(dá)水平呈明顯的負(fù)相關(guān)，與Caspase-3蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)，而凋亡指數(shù)與Caspase-3蛋白也呈正相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10-12]。ADM是主要在相關(guān)生殖系統(tǒng)中表達(dá)的多肽，尤其在卵巢、胎盤以及臍靜脈等有高水平表達(dá)。處于妊娠期時(shí)母體及胎盤均會(huì)合成ADM，并在妊娠的較早期開始分泌參與受精卵著床直到分娩的整個(gè)過程。ADM通過相關(guān)酶的作用使得血管舒張，從而對(duì)胎兒中相關(guān)激素起到一定的調(diào)節(jié)作用。而FGR出現(xiàn)ADM水平上升主要可能因?yàn)樘旱恼麄€(gè)循環(huán)過程出現(xiàn)了損傷，進(jìn)而需要更多的氧氣及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需要供應(yīng)。ADM出現(xiàn)代償反應(yīng)，盡可能使得臍血管出現(xiàn)擴(kuò)張以保證最大程度的氧氣及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)。而胎兒的正常發(fā)育在一定程度上主要取決于胎盤，尤其是為胎兒提供充足氧氣及營(yíng)養(yǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞。出現(xiàn)特殊情況時(shí)，如孕婦吸煙、貧血等導(dǎo)致其處于缺氧狀態(tài)，進(jìn)而對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞造成一定的損傷。在此種情況下可能引起胎盤功能異常，從而引發(fā)FGR。

正常情況下細(xì)胞的凋亡是僅僅是一種生理現(xiàn)象，對(duì)機(jī)體的維持作用很明顯，其中Bc1-1蛋白是最主要的抗凋亡因子，通過激活Caspase-3蛋白來共同作用于細(xì)胞凋亡的控制過程，在FGR中Bc1-1蛋白開始低水平表達(dá)，這就直接抑制了Caspase-3蛋白的轉(zhuǎn)化[13]。兩者之間的表達(dá)存在顯著的負(fù)相關(guān)，這就導(dǎo)致正常的凋亡過程無法實(shí)現(xiàn)，從而出現(xiàn)不正常凋亡或者過度凋亡，在極大程度上抑制胎兒的正常發(fā)育。當(dāng)胎盤出現(xiàn)供應(yīng)不足的時(shí)候?qū)е氯毖?、營(yíng)養(yǎng)缺乏等主要現(xiàn)象，這就對(duì)ADM mRNA相關(guān)轉(zhuǎn)錄的水平及蛋白水平有明顯增加的趨勢(shì)，進(jìn)而加大了ADM水平，從而提示兩者可能共同作用參與了FGR的發(fā)生。

綜上所述，F(xiàn)GR的發(fā)生與ADM水平升高、胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡以及相關(guān)凋亡蛋白的水平波動(dòng)存在明顯的相關(guān)性，這為臨床對(duì)FGR的診斷及治療提供更多的指導(dǎo)依據(jù)，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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Correlation analysis of the relationship between adrenomedullin,apoptosis of placental trophoblast cells and fetal growth restriction.

XIE Hui1,LIU Hong-yan1,CHEN Jun2.Department of Gynaecology and Obstetrics1,Department of Clinical Laboratory2,Maternal and Child Health Hospital of Ankang City,Ankang 725000,Shaanxi,CHINA

Objective To explore the relationship between adrenomedullin(ADM)of umbilical cord blood,the apoptosis of placental trophoblast cells and fetal growth restriction(FGR).MethodsSeventy-six fetuses of fetal growth restriction in our hospital from January 2012 to December 2014 were selected as the observation group,and 76 fetuses delivered in our hospital in the same period were enrolled as the control group.The general conditions,ADM, apoptosis index of placental trophoblast cells,Bc1-1 protein and Caspase-3 protein levels were compared between the two groups.Finally,correlation analysis was performed.ResultsThe weight,height,sitting height and head circumference of the fetuses in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).The ADM and apoptosis index of the observation group were(64.27±17.32)pg/ml,(34.82±9.47)%,respectively,which were significantly higher than those in the control group of(48.93±12.11)pg/ml,(8.04±2.46)%.The level of Bc1-1 protein in the observation group was significantly lower than that in the control group,while the level of Caspase-3 protein was significantly higher than that in the control group.The differences were all statistically significant(P＜0.05).Correlation analysis showed that the expression level of ADM was negatively correlated with the expression level of Bc1-1(r=-0.461,P= 0.000),and positively correlated with the expression level of Caspase-3 protein(r=0.783,P=0.000).The apoptotic index and ADM,Bc1-1 protein expression showed no significant correlation(r=0.283,P=0.827;r=0.362,P=0.103),whileapoptotic index showed positive correlation with Caspase-3 protein(r=0.821,P=0.000).ConclusionADM of umbilical cord blood and apoptosis proteins of placental trophoblast cells(Bcl-1 and Caspase-3)jointly result in the formation of FGR,andADM,apoptosis of placental trophoblastic cells are significantly correlated with FGR.

Fetal growth restriction(FGR);Umbilical cord blood;Adrenomedullin(ADM);Placental trophoblast cells;Apoptosis;Correlation

R714.51

A

1003—6350（2016）05—0703—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.05.005

2015-07-21)

謝暉。E-mail：1093853804@qq.com