VEGF、CD44v6、MMP-2在食管癌中的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

洪英財(cái)，陳懷生，林少霖

(暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院/深圳市人民醫(yī)院胸外科，廣東 深圳 518000)

VEGF、CD44v6、MMP-2在食管癌中的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

洪英財(cái)，陳懷生，林少霖

(暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院/深圳市人民醫(yī)院胸外科，廣東 深圳 518000)

目的 研究食管癌患者的癌組織發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與病變組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、細(xì)胞的粘附因子C4D4的變異體v6(CD44v6)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)水平的關(guān)系。方法選取2011年3月至2014年9月到我院腫瘤科進(jìn)行治療的83例食管癌患者作為食管癌組，所有患者均經(jīng)術(shù)后HE切片病理檢查證實(shí)，另選取21例術(shù)前診斷為食管癌但術(shù)后經(jīng)組織學(xué)檢查結(jié)果為良性者的食管黏膜標(biāo)本作為良性組，比較兩組患者中VEGF、CD44v6和MMP-2的陽(yáng)性水平，并對(duì)不同表達(dá)食管癌患者的淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移進(jìn)行分析，探討他們的相關(guān)性。結(jié)果VEGF、CD44v6和MMP-2在食管癌組患者病變組織標(biāo)本中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為77.11%(64/83)、73.49% (61/83)和59.04%(49/83)，而在良性組患者食管組織標(biāo)本中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為14.29%(3/21)、23.81%(5/21)和14.29%(3/21)，三者在食管癌組患者病變組織標(biāo)本中的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于良性組，經(jīng)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；VEGF、CD44v6和MMP-2在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者中的陽(yáng)性率依次為85.48%(53/62)、82.26% (51/62)和66.13%(41/62)，而在沒(méi)有發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中的陽(yáng)性率依次為52.38%(11/21)、47.62%(10/21)和38.10%(8/21)，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者病變組織標(biāo)本中三者的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于沒(méi)有發(fā)生轉(zhuǎn)移者，經(jīng)比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論VEGF、CD44v6和MMP-2在食管癌患者癌變組織中的表達(dá)水平與其淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)系，其對(duì)食管癌患者的早期正確診斷、治療以及預(yù)后效果評(píng)估具有重要的意義。

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；食管癌；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；細(xì)胞的粘附因子C4D4的變異體v6；基質(zhì)金屬蛋白酶-2

食管癌是一種在全球范圍內(nèi)發(fā)生率均較高的惡性腫瘤疾病，而且我國(guó)在食管癌高發(fā)以及高死亡率國(guó)家中都排在了前幾位[1]。食管癌患者在早期并沒(méi)有明顯癥狀，因此通常食管癌患者被確診后已經(jīng)屬于晚期，對(duì)其預(yù)后極為不利。眾所周知，影響惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的因素多種多樣，但對(duì)其具體的影響機(jī)制卻沒(méi)有明確的認(rèn)識(shí)[2]。腫瘤出現(xiàn)浸潤(rùn)以及淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移是與惡性腫瘤治療以及預(yù)后效果有直接關(guān)系的兩個(gè)主要生物行為特征，惡性腫瘤細(xì)胞在繁殖與擴(kuò)散轉(zhuǎn)移的過(guò)程中與體內(nèi)的粘附因子水平、基質(zhì)降解酶含量以及血管的通透能力等都有緊密的聯(lián)系，并且已有研究表明惡性腫瘤病變組織中的各項(xiàng)因子，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、細(xì)胞的粘附因子C4D4的變異體v6(CD44v6)以及基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的陽(yáng)性表達(dá)情況與癌組織中淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移有一定的相關(guān)性[3]。筆者對(duì)我院治療的83例食管癌患者病變組織中的VEGF、CD44v6以及MMP-2的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系進(jìn)行研究，以期為食管癌患者的早期診斷、治療以及對(duì)預(yù)后效果評(píng)估提供相應(yīng)的指導(dǎo)和臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年3月到2014年9月共有83例食管癌患者到我院腫瘤科治療，所有患者均手術(shù)后經(jīng)HE切片病理檢查證實(shí)，將其作為本研究的食管癌組。83例患者中男性53例，女性30例；年齡41～71歲，平均(52.4.3±6.9)歲；淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移者62例，未發(fā)生轉(zhuǎn)移者21例。所有患者在手術(shù)切除治療前均未采取任何化療和放療治療措施。選取21例術(shù)前診斷為食管癌但術(shù)后經(jīng)組織學(xué)檢查結(jié)果為良性的患者的食管黏膜標(biāo)本作為良性組。

1.2 試劑和方法 研究中所用的兔抗人VEGF抗體的生產(chǎn)廠(chǎng)家為美國(guó)Antibody Diagnosis公司，所使用的鼠抗人CD44v6以及MMP-2抗體的生產(chǎn)廠(chǎng)家均為美國(guó)的Chemicon公司。根據(jù)說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行免疫組織的化學(xué)染色，首先將制作的切片標(biāo)本進(jìn)行脫蠟以及水化處理，然后使用濃度為3%的雙氧水進(jìn)行處理，利用微波對(duì)抗原進(jìn)行修復(fù)，并滴加一定量的抗體后、利用DAB顯色液進(jìn)行顯色。實(shí)驗(yàn)中所使用的陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本為VEGF、CD44v6以及MMP-2表達(dá)顯示結(jié)果為陽(yáng)性的食管癌組織，陰性對(duì)照標(biāo)本為使用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗染色的標(biāo)本[4]。

1.3 評(píng)價(jià)方法 根據(jù)細(xì)胞染色的程度以及陽(yáng)性細(xì)胞的總數(shù)量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判定，首先根據(jù)細(xì)胞的著色程度進(jìn)行評(píng)分，如果細(xì)胞未出現(xiàn)顯色情況則記錄為0分，細(xì)胞染色顯示為黃色時(shí)計(jì)1分，細(xì)胞染色后顯示為棕黃色時(shí)計(jì)2分，如果細(xì)胞染色后出現(xiàn)了明顯的綜褐色時(shí)計(jì)3分。根據(jù)觀(guān)察到VEGF、CD44v6以及MMP-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目在同一類(lèi)細(xì)胞總數(shù)目中所占比例的多少對(duì)其進(jìn)行評(píng)分：其中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例未超過(guò)5%時(shí)計(jì)0分，未超過(guò)25%時(shí)計(jì)1分，尚未超過(guò)50%時(shí)計(jì)3分，超過(guò)75%后計(jì)4分。將兩種評(píng)分的分?jǐn)?shù)進(jìn)行相加，結(jié)果在3分以上判定為陽(yáng)性，結(jié)果為3分或以下時(shí)為陰性[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)，VEGF與CD44v6、MMP-2的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF、CD44v6和MMP-2在不同食管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率比較 圖1中顯示的A、B、C分別表示VEGF、CD44v6以及MMP-2在食管癌的病變組織標(biāo)本中的染色圖片，VEGF以及MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)均發(fā)生于病變細(xì)胞的胞漿中，而CD44v6的陽(yáng)性表達(dá)則均發(fā)生于病變細(xì)胞的胞膜中。VEGF、CD44v6和MMP-2在食管癌患者病變組織標(biāo)本中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性組，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

圖1 VEGF、CD44v6以及MMP-2在食管癌患者的病變組織標(biāo)本中染色顯示圖(×400)

表1 不同食管組織標(biāo)本中VEGF、CD44v6和MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率比較[例（%）]

2.2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否與VEGF、CD44v6、MMP-2水平的關(guān)系 VEGF、CD44v6和MMP-2在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者中的陽(yáng)性率均顯著高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移組織，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 VEGF與CD44v6、MMP-2的相關(guān)性 將VEGF與CD44v6進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，r值為0.258，P值為0.004，食管癌病變組織標(biāo)本中VEGF的水平與CD44v6的水平呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系，將VEGF與MMP-2的表達(dá)進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，其中r值為0.598，P值為0.002，食管癌病變組織標(biāo)本中VEGF水平與MMP-2水平也呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。

表2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與VEGF、CD44v6、MMP-2水平的相關(guān)性[例(%)]

3 討 論

惡性腫瘤病變的出現(xiàn)是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程，其包括了腫瘤的形成、繁殖、擴(kuò)散以及轉(zhuǎn)移等，這些過(guò)程大都會(huì)伴隨著基因的突變、血管的產(chǎn)生、細(xì)胞的凋亡以及病灶的轉(zhuǎn)移等[6]。因此，在腫瘤的出現(xiàn)過(guò)程中必定大量的蛋白類(lèi)物質(zhì)以及細(xì)胞因子等參與到該過(guò)程中。其中VEGF、CD44v6以及MMP-2的表達(dá)水平是目前在研究腫瘤的發(fā)生以及是否轉(zhuǎn)移時(shí)關(guān)注的焦點(diǎn)。

本研究結(jié)果表明，VEGF、CD44v6以及MMP-2在食管癌患者黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為77.11%、73.49%和59.04%，而在良性食管組織標(biāo)本中的陽(yáng)性表達(dá)率依次為14.29%、23.81%、14.29%，三者在食管癌病變組織標(biāo)本中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著的高于在良性標(biāo)本的表達(dá)率。其中VEGF是最常見(jiàn)的并且具有較高特異性的一種血管通透性因子，它通常是在血管的通透能力提高后導(dǎo)致新血管的快速生長(zhǎng)并產(chǎn)生腹水時(shí)產(chǎn)生的，VEGF在大腸癌、乳腺癌以及其他惡性腫瘤中都具有很高的表達(dá)情況，而且它的表達(dá)與腫瘤是否發(fā)生侵襲性轉(zhuǎn)移以及患者手術(shù)治療后的預(yù)后效果都有著緊密的聯(lián)系[7]。目前，已經(jīng)有研究證實(shí)，VEGF的表達(dá)情況不僅可以評(píng)價(jià)病變處血管上皮細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移以及生長(zhǎng)情況，還可以對(duì)病灶的生長(zhǎng)速度以及轉(zhuǎn)移的方向進(jìn)行評(píng)估[8]。本研究結(jié)果表明，VEGF在淋巴結(jié)發(fā)生和沒(méi)有發(fā)生轉(zhuǎn)移的食管癌病變組織標(biāo)本中的陽(yáng)性率依次為85.48%以及52.38%，因此可以認(rèn)為食管癌患者病變黏膜組織VEGF的水平與淋巴結(jié)是否發(fā)生了轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系[9]。

CD44v6是一種在腫瘤組織中大量存在的跨膜糖蛋白類(lèi)物質(zhì)，它具有良好的分子粘附的作用，能夠是腫瘤細(xì)胞與周?chē)幕|(zhì)中存在的各類(lèi)結(jié)構(gòu)性蛋白進(jìn)行反應(yīng)，當(dāng)CD44v6在體內(nèi)的表達(dá)水平過(guò)量后會(huì)導(dǎo)致周?chē)|(zhì)發(fā)生構(gòu)型上的改變，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的位置發(fā)生轉(zhuǎn)移，進(jìn)一步增加了腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)以及遷移，因此目前大部分的研究都認(rèn)為CD44v6作為一種反應(yīng)蛋白參與了病灶處細(xì)胞的生長(zhǎng)以及遷移[10]。并且研究已經(jīng)證實(shí)，CD44v6蛋白在大腸癌以及胃癌患者的病變組織中都有較高的表達(dá)，并且與惡性腫瘤的浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移都有密不可分的關(guān)系[11]。本研究中CD44v6在淋巴結(jié)發(fā)生和沒(méi)有發(fā)生轉(zhuǎn)移的食管癌病變組織中的陽(yáng)性表達(dá)率依次為82.26%以及47.62%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，食管癌患者病變黏膜組織中CD44v6表達(dá)與淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系，這一結(jié)果與目前已有的研究結(jié)果是一致的。

MMP-2是一種沒(méi)有被糖化的明膠酶，它作為一種關(guān)鍵酶參與了腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜中存在的Ⅳ型膠原的降解過(guò)程，從而能對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)造成損傷，在一定程度上加快了惡性腫瘤細(xì)胞向其他組織的侵潤(rùn)以及擴(kuò)散情況[12]。由于其在Ⅳ型膠原的降解過(guò)程中的特異性，MMP-2已經(jīng)成為了評(píng)價(jià)腫瘤侵襲程度以及是否轉(zhuǎn)移的主要的一種基質(zhì)金屬蛋白酶指標(biāo)。研究也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，MMP-2在消化道腫瘤、泌尿系統(tǒng)中流以及乳腺癌中具有較高的表達(dá)，并且與病灶的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)有密切的關(guān)系[13]。本研究中，MMP-2在淋巴結(jié)發(fā)生和沒(méi)有發(fā)生轉(zhuǎn)移的食管癌病變組織標(biāo)本中的陽(yáng)性表達(dá)率依次為66.13%以及38.10%，結(jié)果具有明顯的差異。因此，食管癌患者病變組織中MMP-2的表達(dá)也與淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系，可以認(rèn)為，如果食管癌組織中的MMP-2的分泌量越多，那么腫瘤細(xì)胞以及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移發(fā)生的概率就會(huì)越高。

通過(guò)上述分析，筆者認(rèn)為VEGF、CD44v6以及MMP-2三者對(duì)血管的血管的形成和生長(zhǎng)、病灶的生長(zhǎng)、遷移等不良的生物學(xué)行為起到了一定的促進(jìn)作用[14]，并且都與腫瘤中的淋巴結(jié)是否發(fā)生了轉(zhuǎn)移有著一定關(guān)系。本文進(jìn)一步對(duì)三者之間關(guān)系進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，食管癌病變組織標(biāo)本中VEGF的水平與CD44v6以及MMP-2的水平呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，這也更加說(shuō)明了三者同時(shí)與淋巴結(jié)是否發(fā)生了轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。

綜上所述，VEGF、CD44v6以及MMP-2在食管癌患者癌變組織中的水平與其淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)系，其對(duì)食管癌患者的早期正確診斷、治療以及預(yù)后效果評(píng)估具有重要的意義。

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Expression of VEGF,CD44v6,MMP-2 in esophageal cancer and the relationship with lymph node metastasis.

HONG Ying-cai,CHEN Huai-sheng,LIN Shao-lin.Department of Thoracic Surgery,the Second Clinical Medical College of Jinan University,People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518000,Guangdong,CHINA

Objective To study the correlation between vascular endothelial growth factor(VEGF),CD44 variant 6(CD44v6),matrix metalloproteinase-2(MMP-2)level and lymph node metastasis in patients with esophagus cancer.MethodsFrom March 2011 to September 2014,83 patients of esophageal cancer treated in our hospital and confirmed by postoperative pathological examination were selected as esophageal cancer group,and 21 patients diagnosed as esophageal cancer preoperatively but confirmed as benign by postoperative pathological examination were enrolled as the benign group.The positive expression levels of VEGF,CD44v6 and MMP-2 were compared between the two groups,and the lymph node metastasis in patients with different expression levels was analyzed to explore their correlation.ResultsThe positive expression rate of VEGF,CD44v6 and MMP-2 in esophageal cancer group were 77.11% (64/83),73.49%(61/83)and 59.04%(49/83),respectively,which were significantly higher than those in the benign group of 14.29%(3/21),23.81%(5/21)and 14.29%(3/21)(P＜0.05).The positive expression rate of VEGF,CD44v6 and MMP-2 in patients with lymph node metastasis were 85.48%(53/62),82.26%(51/62)and 66.13%(41/62),which were significantly higher than those in the patients without lymph node metastasis of 52.38%(11/21),47.62%(10/21)and 38.10%(8/21)(P＜0.05).ConclusionThe expression levels of VEGF,CD44v6 and MMP-2 in esophageal cancer are correlated to lymph node or metastasis,which has important significance in the early diagnosis,treatment,and prognosis assessment of esophageal cancer.

Lymph node metastasis;Esophageal cancer;Vascular endothelial growth factor(VEGF);CD44 variant 6(CD44v6);Matrix metalloproteinase-2(MMP-2)

R735.1

A

1003—6350（2016）06—0888—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.06.010

2015-06-29)

洪英財(cái)。E-mail：hyc55@126.com