不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中TGF-β1 SRF及波形蛋白表達(dá)水平及意義

田　力

遼寧調(diào)兵山市鐵法煤集團(tuán)總院神經(jīng)外科　調(diào)兵山　112700

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不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中TGF-β1 SRF及波形蛋白表達(dá)水平及意義

田力

遼寧調(diào)兵山市鐵法煤集團(tuán)總院神經(jīng)外科調(diào)兵山112700

【摘要】目的探討不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、血清應(yīng)答因子(SRF)及波形蛋白表達(dá)水平及意義。方法分析40例腦膠質(zhì)瘤患者的臨床資料。結(jié)果研究組TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為65.0%(26/40)、45.0%(18/40)、77.5%(31/40)，均顯著高于對(duì)照組的26.7%(8/30)、13.3%(4/30)、7.1%(2/30)(P<0.05)，腫瘤級(jí)別Ⅲ+Ⅳ級(jí)患者的TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性率分別為77.3%(17/22)、63.6%(14/22)、86.4%(19/22)，均顯著高于Ⅰ+Ⅱ級(jí)患者的50.0%(9/18)、22.2%(4/18)、66.7%(12/18)(P<0.05)，TGF-β1與SRF、SRF與波形蛋白均呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論腦膠質(zhì)瘤中TGF-β1、SRF及波形蛋白表達(dá)水平顯著提升，與其惡性程度顯著相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤；TGF-β1；SRF；波形蛋白

SRF屬于MADS轉(zhuǎn)錄因子家族成員，從進(jìn)化上來(lái)說(shuō)具有高度保守性。相關(guān)研究表明，SRF能夠?qū)α⒃缁?、?xì)胞骨架、黏附相關(guān)基因等的表達(dá)進(jìn)行有效調(diào)控。最新研究表明，胃癌、肝癌等多種惡性腫瘤中均具有較高的SRF表達(dá)水平，同時(shí)還具有較高的間質(zhì)標(biāo)記物波形蛋白表達(dá)水平及較低的上皮標(biāo)記物E-鈣黏蛋白表達(dá)水平，而通常情況下該過(guò)程發(fā)生的前提條件為生長(zhǎng)因子信號(hào)活化和調(diào)控，如TGF-β1。相關(guān)研究表明[1]，SRF能夠?yàn)槟[瘤細(xì)胞對(duì)間質(zhì)細(xì)胞表型的獲取提供良好的前提條件，直接而深刻地影響著腫瘤的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)。本研究對(duì)40例腦膠質(zhì)瘤患者的臨床資料進(jìn)行分析，探討不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中TGF-β1、SRF及波形蛋白表達(dá)水平及意義，報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料運(yùn)用隨機(jī)抽樣方法選取我院2011-01—2014-09收治的40例腦膠質(zhì)瘤患者為研究組，均接受手術(shù)切除治療，均經(jīng)病理確診為腦膠質(zhì)瘤，均知情同意；男23例，女17例，年齡14～77歲，平均(47.5±10.2)歲；病程1～3 a，平均(1.1±0.4)a。Ⅰ級(jí)2例，Ⅱ級(jí)16例，Ⅲ級(jí)13例，Ⅳ級(jí)9例。另選取我院同期收治的30例腦膠質(zhì)瘤患者的膠質(zhì)瘤旁正常腦組織標(biāo)本為對(duì)照組，男18例，女12例，年齡14～77歲，平均(43.6±10.7)歲；病程1～3 a，平均(1.0±0.3)a。2組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法依次常規(guī)石蠟切片、HE染色、組織學(xué)觀察。以厚度為5 μm連續(xù)切片，分別將Santa Cruz 公司生產(chǎn)的抗TGF-β1(sc-146)、SRF(sc-335)及EPITOMICS 公司生產(chǎn)的波形蛋白抗體(2707-1)加入其中，采用SP法試劑盒(SP-9001，SP-9002)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，抗體濃度均為1%，對(duì)其進(jìn)行熱修復(fù)，修復(fù)過(guò)程中運(yùn)用枸鹽酸。購(gòu)買北京中山金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒ZLI-9031進(jìn)行DAB顯色。TGF-β1陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)為有棕黃色顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，SRF和波形蛋白表達(dá)分別在細(xì)胞核定位、主要為胞漿，通常情況下絲狀、索狀條紋為其主要表達(dá)[2]。400倍視野下認(rèn)真細(xì)致地觀察10個(gè)視野，細(xì)胞個(gè)數(shù)為100個(gè)/視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比。依據(jù)4級(jí)計(jì)分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在10%以下，計(jì)0分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%～25%，計(jì)1分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)26%～50%，計(jì)2分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%～75%，計(jì)3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)75%以上，計(jì)4分[3]。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)色、淡黃色、棕黃色、棕色或棕褐色分別為0分、1分、2分、3分。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為兩者乘積至少為4分[4]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用Excel將數(shù)據(jù)庫(kù)，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用率(%)表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.12組TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)水平比較研究組TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　2組TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.2研究組TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)的影響因素研究組腫瘤級(jí)別Ⅲ+Ⅳ級(jí)患者的TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性率均顯著高于Ⅰ+Ⅱ級(jí)(P<0.05)，但不同性別、年齡、腦腫瘤部位、腫瘤大小患者的TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　研究組TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)

注：與Ⅰ+Ⅱ級(jí)比較，*P<0.05

2.3研究組TGF-β1、SRF及波形蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析研究組TGF-β1與SRF、SRF與波形蛋白均呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3　研究組TGF-β1、SRF及波形蛋白表達(dá)的

3討論

膠質(zhì)瘤屬于一種顱內(nèi)腫瘤，臨床極為常見(jiàn)，主要特點(diǎn)為侵襲性生長(zhǎng)，手術(shù)很難完全切除，同時(shí)，放化療會(huì)受到膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抵抗，一定程度上造成患者術(shù)后具有較高的復(fù)發(fā)率及病死率。相關(guān)研究表明[5]，含有血清應(yīng)答元件的人類基因有300個(gè)，占全部基因組的1%左右?？梢钥闯?，SRF的作用之一是多種轉(zhuǎn)錄調(diào)控。SRF在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合DNA的CArG-box的形式為同源二聚體。近年來(lái)，相關(guān)研究表明[6]，SRF在多種腫瘤組織中表達(dá)較高?？梢钥闯?，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中，SRF的主要作用為調(diào)控；TGF-β1會(huì)為腫瘤進(jìn)展及侵襲提供良好的前提條件，這一事實(shí)已得到臨床普遍認(rèn)可，其在多種腫瘤細(xì)胞及組織中的表達(dá)均較高，直接而深刻地影響腫瘤血管的生成、增值及侵襲。Zhang等[7]研究表明，在高級(jí)別和低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中，TGF-β1分別達(dá)到93.8%和43.10%的陽(yáng)性表達(dá)率，高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的TGF-β1陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤，同時(shí)其表達(dá)隨著微血管密度的提升而提升，降低而降低。體外研究也表明[8]，TGF-β1刺激膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞及U251細(xì)胞能夠?qū)?xì)胞遷移進(jìn)行明顯誘導(dǎo)；波形蛋白直接而深刻地影響腦膠質(zhì)瘤的增值、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后等，因此，臨床普遍認(rèn)為其可作為一種腫瘤標(biāo)志物?，F(xiàn)階段，其作為一種間質(zhì)標(biāo)記物得到臨床普遍認(rèn)可，在腫瘤細(xì)胞獲取遷移及侵襲能力過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[9-10]。在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中，神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白表達(dá)不同于兩種中間絲結(jié)構(gòu)蛋白波形蛋白，通常情況下，波形蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的診斷中可能能夠作為一項(xiàng)重要的參考指標(biāo)[11-12]。本研究表明，研究組TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，腫瘤級(jí)別Ⅲ+Ⅳ級(jí)患者TGF-β1、SRF及波形蛋白陽(yáng)性率均顯著高于Ⅰ+Ⅱ級(jí)(P<0.05)，TGF-β1與SRF、SRF與波形蛋白均呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，充分說(shuō)明了腦膠質(zhì)瘤中TGF-β1、SRF及波形蛋白表達(dá)水平顯著提升，與其惡性程度顯著相關(guān)。

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(收稿2015-01-15)

【中圖分類號(hào)】R739.41

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1673-5110(2016)03-0065-02