2012-2013年北京市密云縣流感病原學分布分析

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2012-2013年北京市密云縣流感病原學分布分析

張巍巍1，高雷1，馮寶立1，鄭蘭紫1，張麗榮2*

(1.北京市密云縣疾病預防控制中心，北京101500；2.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 病理科)

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，對其進行監(jiān)測可以及時掌握流感病毒流行株的活動情況，并及早發(fā)現(xiàn)變異株，為防控政策的制定提供參考依據(jù)。2013年，全球首次發(fā)現(xiàn)新亞型H7N9型禽流感病毒[1-2]，針對人感染H7N9禽流感疫情防控工作，北京市衛(wèi)生局組織制定了《人感染H7N9禽流感疫情防控方案》。密云縣作為北京市流感監(jiān)測網(wǎng)絡成員之一，2012年在北京市流感監(jiān)測方案基礎(chǔ)上，繼續(xù)開展流感監(jiān)測工作，同時從2013年4月11日開始注重人感染H7N9禽流感的檢測，旨在掌握密云縣流感病毒流行規(guī)律及其流行病學特征，以保護人民群眾的身體健康和生命安全?，F(xiàn)將監(jiān)測結(jié)果初步分析如下。

1材料與方法

1.1監(jiān)測病例來源

依據(jù)流感樣病例定義，于密云縣醫(yī)院門診每周采集10-20件流感樣病例患者的咽拭子。于24 h內(nèi)冷藏送至本實驗室，24 h內(nèi)未能檢測的-80℃保存。具體采集方法參照文獻[3]。

1.2試劑

MDCK細胞由北京市疾病預防控制中心提供；抗 A(H1N1)亞型血清,抗 A(H3N2)亞型血清,抗 B型 Yamagata系病毒血清,抗B型Victoria系病毒血清,由國家疾病預防控制中心提供；豚鼠血球由蘭伯瑞公司提供；RNA 提取試劑盒(QIAGEN RNeasy Mini Kit) 由QIAGEN公司提供；Real-Time PCR體系試劑盒(Taqman One step RT-PCR Kit)由美國ABI公司提供。

1.3病毒分離與鑒定

咽拭子標本完全混勻后，接種到生長成片的 MDCK 細胞，34℃ 5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)吸附2 h， 37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每日觀察細胞病變(CPE)。培養(yǎng)3-4 d后,用1%豚鼠血球進行微量血凝試驗 (HA) 檢測病毒的存在及滴度。將 HA≥1∶8的培養(yǎng)液用血凝抑制試驗 (HI) 進行流感病毒滴度和型別鑒定。HA<1∶8的培養(yǎng)物繼續(xù)細胞傳代培養(yǎng),直至HA≥1∶8 時再進行病毒的鑒定，連續(xù)傳代2次以上，HA仍<1∶8的細胞份禮物，可以采用Real-Time PCR 方法進行核酸檢測。具體方法詳見文獻[3]。4月11日開始，若鑒定病毒為甲型流感病毒，要采用Real-Time PCR方法對其進行人感染H7N9禽流感的檢測。

Real-Time PCR方法的反應體系總體積為25 μl：引物(40 μM)0.5 μl；探針(10 μM)0.5 μl；酶 1.0 μl；2×Master Mix 12.5 μl；Rnase Free H2O 5.375 μl；40× MultiScribe and RNAase Inhibitor Mix 0.625 μl；RNA 模板5 μl。反應條件:50℃反轉(zhuǎn)錄30 min；95℃預熱15 min；95℃變性15 sec；55℃擴增45 sec；在45℃進行單點熒光檢測，共45個循環(huán)。實時熒光檢測有標準的S型擴增曲線，并且Ct值<30可以判斷樣本為陽性。

1.4統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0 進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理，比較組間陽性率差異，P<0.05具有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1流感病毒分離陽性率變化趨勢

2012年10月至2013年5月用MDCK細胞分離培養(yǎng)流感病毒，共檢測樣本618件，分離毒株121株，分離陽性率為19.6%。經(jīng)血凝抑制試驗和Real-Time PCR方法鑒定其型別分布為甲型H3N2亞型陽性68件(占56.2%)，甲型H1N1亞型陽性53件(占43.8%)，乙型流感陽性0件(占0%)，人感染H7N9流感陽性0件(占0%)。

本研究為了解病毒變化趨勢，對監(jiān)測樣本不同型別的病毒分離陽性率按照不同月份進行分析，結(jié)果顯示2012年12月份陽性率最高，為37.7%，其次為2013年1月份，陽性率為32.1%，2013年5月份陽性率最低，為0%。進一步分析所分離的流感病毒陽性分布情況，結(jié)果顯示監(jiān)測期間以甲型流感流行為主，同時存在甲型H3N2亞型和甲型H1N1亞型流感病毒，但不同亞型流行時間有所不同。10月至次年3月主要以甲型H3N2亞型流感病毒為主，并于2012年12月達到高峰。而甲型H1N1流感病毒主要集中在2012年12月至次年4月，于2013年1月達到高峰。乙型流感病毒和人感染H7N9流感病毒均未檢出。監(jiān)測期間各種流感病毒亞型在不同月份中的分布趨勢見圖1。

圖1　不同月份流感病毒分離陽性率

2.2流感樣病例的性別分布

在所監(jiān)測的618例病例中，女性患者293例，自其咽拭子樣本中分離病毒67株，分離陽性率為22.9%；男性患者325例，自其咽拭子樣本中分離病毒54株，分離陽性率為16.6%；經(jīng)χ2檢驗，男女性別之間的陽性率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.3流感病毒的年齡分布

不同年齡組的流感病毒陽性率不同：0-5歲年齡組分離陽性率最低，為6.9%(2/29)，6-15歲年齡組分離陽性率為10%(3/30)，16-25歲年齡組病毒分離陽性率為15.0%(41/273)，26-55歲年齡組病毒分離陽性率為27.9%(60/215)，≥56歲年齡組分離陽性率為21.1%(15/71)。各年齡組病毒陽性率無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

3討論

本文針對2012年10月至2013年5月冬春季密云縣醫(yī)院門診流感樣病例的監(jiān)測結(jié)果進行分析，可反映本地區(qū)流感病毒的流行特征。研究表明，在監(jiān)測期間以甲型流感病毒流行為主，主要為甲型

H3N2亞型和甲型H1N1亞型流感病毒，而與去年同期相比，流感病毒的主要毒株為乙型流感病毒，包括B型Victoria系和B型 Yamagata系。兩個年度的5月份均未檢出流感病毒。本研究發(fā)現(xiàn)2009年甲型H1N1病毒已經(jīng)作為季節(jié)性的流感病毒在今年傳播。同時研究發(fā)現(xiàn)，密云縣去年的流感病毒高峰期在次年的2月份，而本次監(jiān)測在12月份，高峰期略有提前[4]。

對流感病毒感染者的性別比例進行分析，男女性別之間的陽性率無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本監(jiān)測結(jié)果同時表明， 26-55年齡組流感病毒感染率最高，占總陽性數(shù)目的49.6%，提示中青年對流感病毒易感，需特別加強防護，這于相關(guān)文獻報導一致[5]。

本監(jiān)測主要采用細胞培養(yǎng)法分離鑒定流感病毒，該方法是流感病毒病原學檢測的金標準，對于連續(xù)傳代2次，血凝滴度仍小于8的細胞培養(yǎng)物，本監(jiān)測采用Real-TimePCR方法對樣本中病毒進行核酸檢測。這樣可以提高病毒含量低樣本的檢測率[6]。

本文對密云縣醫(yī)院2011年10月至2012年5月門診流感患者病毒檢出情況及相關(guān)特征做出簡要分析，3月，我國開始出現(xiàn)人感染H7N9禽流感疫情，經(jīng)過兩個月的主動監(jiān)測和采取一系列的防控措施，我縣沒有人感染H7N9禽流感病例。

參考文獻：

[1]權(quán)菊香，牛楊洋，董奇文，等.2013年我國H7N9型禽病毒流感分析.中國臨床藥理學雜志，2013,29(6):426-428.

[2]郭湖潭.人感染H7N9禽流感的流行、治療及防控.國際流行病學傳染學雜志，2013,40(3):145-146.

[3]中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準 流感性感冒診斷標準.

[4]張巍巍.北京市密云縣2011年10月-2012年5月流感監(jiān)測結(jié)果分析.中國衛(wèi)生檢驗雜志.2013,23(2)：453-454.

[5]黃芳，石偉先，崔淑娟，等．北京地區(qū)2010年10月至2011年4月急性呼吸道感染病毒流行特征分析．國際病毒學雜志，2011，18(4)：97-100．

[6]石偉先，黃芳，崔淑娟，等.實時熒光PCR法、膠體金快速檢測法及病毒分離培養(yǎng)法在甲型流感病毒檢測中的臨床應用分析.中國衛(wèi)生檢驗雜志.2011,21(11).

(收稿日期：2014-12-22)

作者簡介：張巍巍(1983-)，女，碩士，主管檢驗師，工作于北京市密云縣疾病預防控制中心檢驗科

文章編號：1007-4287(2016)01-0126-02 1007-4287(2016)01-0128-03

*通訊作者