黑果花楸與2種小漿果中黃酮類物質(zhì)及多糖含量比較

姚利陽(yáng)，張 宇，張立宇，李 巖，劉俊希

(佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江省生物藥制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江佳木斯 154007)

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黑果花楸與2種小漿果中黃酮類物質(zhì)及多糖含量比較

姚利陽(yáng)，張 宇*，張立宇，李 巖，劉俊希

(佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江省生物藥制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江佳木斯 154007)

小漿果泛指體積較小、多汁的一類果樹的果實(shí)，主要包括藍(lán)莓、藍(lán)靛果、黑果花楸、樹莓、黑加侖、蔓越橘等[1-5]，它們具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和獨(dú)特的口感，深受人們的喜愛。小漿果富含維生素和多種生物活性物質(zhì)[6-7]，在預(yù)防慢性疾病和維持人體健康方面有較好的作用。

藍(lán)莓(Blueberry)，又稱越橘、藍(lán)漿果，杜鵑花科(Ericaceae)越橘屬(Vaccinium)。藍(lán)莓果實(shí)中天然色素含量最高[8]，如原花青素、花色苷；除此之外，還含有糖類、有機(jī)酸、維生素C、多種微量元素和食用纖維等。由于其含有多種生物活性物質(zhì)，因此具有抗腫瘤、清除體內(nèi)自由基、提高免疫力等多種生理活性功能[9-10]。藍(lán)靛果(Loniceraedulis)，又稱黑瞎子果、山茄子，忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬屬(Lonicera)。藍(lán)靛果果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，富含糖類、有機(jī)酸、維生素和黃酮類等化合物[11-12]，其制成的果汁含有大量的花色苷物質(zhì)，具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，藍(lán)靛果具有清熱解毒、降血脂、降血壓、改善肝臟的解毒功能，還能緩解放療和化療后的不良癥狀[13-14]。黑果花楸(Aroniamelanocarpa)，薔薇科(Rosaceae)腺肋花楸屬(Aronia)。黑果花楸含有豐富的維生素和黃酮類物質(zhì)[15-16]，對(duì)高血壓、心腦血管疾病具有特殊的預(yù)防和治療效果。

以上3種小漿果中，藍(lán)莓和藍(lán)靛果在市場(chǎng)上的研發(fā)產(chǎn)品較多，而關(guān)于黑果花楸的研發(fā)產(chǎn)品較少。筆者對(duì)這3種小漿果中花色苷、總黃酮、多糖的含量進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行比較分析，以期為黑果花楸深加工產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1原材料。藍(lán)莓、藍(lán)靛果購(gòu)于黑龍江省伊春市，黑果花楸購(gòu)于黑龍江省黑河市，均由佳木斯大學(xué)藥學(xué)院張宇教授鑒定。

1.1.2主要試劑。葡萄糖對(duì)照品、濃硫酸、乙醇、苯酚、鹽酸、三氯化鋁、乙酸、乙酸鈉、氯化鉀，均為分析純。

1.1.3主要儀器。RE-52 A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；DL-5-B低速大容量離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；FA2004電子天平，上海恒平科學(xué)儀器有限公司；RHS-25 pH計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；765紫外可見分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司；HH-S26S恒溫水浴鍋，山東鄄城華魯電熱儀器有限公司。

1.2方法

1.2.1花色苷含量測(cè)定。

1.2.1.1緩沖液的配置。pH 1.0 緩沖液：精密稱取1.49 g 氯化鉀，用蒸餾水定容至100 mL，精密量取1.7 mL鹽酸，用蒸餾水定容至100 mL；將0.2 mol/L氯化鉀與0.2 mol/L鹽酸以25∶67的比例混合，用氯化鉀溶液調(diào)節(jié)pH(1.0±0.1)。pH 4.5 緩沖液：精密稱取1.64 g乙酸鈉，用蒸餾水定容至100 mL，用鹽酸調(diào)節(jié)pH(4.5±0.1)。

1.2.1.2花色苷的提取。分別稱取10 g 3種小漿果的凍果樣品，解凍數(shù)分鐘后，用研缽研碎，置于200 mL錐形瓶中。按料液比為1∶10(m/V)加入100 mL 1%酸化乙醇溶液。在40 ℃的條件下，超聲輔助提取45 min后過濾并收集濾液。將濾渣再次置于錐形瓶中，按上述條件再提取2次。合并3次收集的濾液，置于圓底燒瓶中，45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到紫黑色黏稠粗提液。

1.2.1.3花色苷含量測(cè)定方法。該試驗(yàn)根據(jù)花色苷在pH 1.0時(shí)，在510 nm波長(zhǎng)處有最大光吸收，而在pH 4.5時(shí)，花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色查爾酮形式，在510 nm波長(zhǎng)處無吸收，所以可以利用pH示差法計(jì)算溶液中花色苷的含量。計(jì)算公式如下：

式中，A=pH1.0-pH4.5；V為提取液總體積；n為稀釋倍數(shù)；M為矢車菊-3-葡萄糖苷(Cy-3-Glu)的相對(duì)分子質(zhì)量(449)；ε為Cy-3-Glu的消光系數(shù)(29 600)；m為樣品質(zhì)量(g)。

1.2.2總黃酮含量測(cè)定。

1.2.2.1顯色試劑的配置。精密稱取三氯化鋁1.34g，50%乙醇溶液定容至100ml，配成0.1mol/L的溶液。精密稱取無水乙酸鈉1.76g，蒸餾水溶解至100ml，配成0.2mol/L的溶液。精密量取1.15ml冰醋酸，蒸餾水定容至100ml，配成0.2mol/L的醋酸溶液。將配制好的醋酸鈉溶液和冰醋酸溶液按比例混合，制得pH為5.2的緩沖溶液。

1.2.2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密稱取蘆丁0.02g，用50%乙醇溶液定容至100ml，制成0.2mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，置于10ml容量瓶，加入2.0ml0.1mol/L的三氯化鋁溶液，pH為5.2的醋酸鈉-醋酸緩沖溶液1.0ml，用50%乙醇定容至4ml，40 ℃水浴顯色15min，在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

1.2.2.3總黃酮的提取。分別稱取10g3種小漿果凍果樣品，解凍數(shù)分鐘后，用研缽研碎，置于200ml錐形瓶中。按料液比為1∶10(M/V)加入100ml50%乙醇溶液。在40 ℃下，超聲波輔助提取40min后過濾并收集濾液。將濾渣再次置于錐形瓶中，按上述條件再提取2次。合并3次收集的濾液，置于圓底燒瓶中，減壓濃縮得到黃酮粗提液。

1.2.2.4總黃酮含量測(cè)定方法。精密量取1.0ml的黃酮粗提液，用50%乙醇溶液定容至10ml。從中吸取1.0ml加入到10ml容量瓶中，按“1.2.2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行顯色，再在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(平行3次)。利用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮的含量。

1.2.3多糖含量測(cè)定。

1.2.3.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密稱取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖10.00mg，置于100ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，配得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分別置于10ml容量瓶中，加入蒸餾水補(bǔ)至2.0ml，然后再加入5%苯酚溶液1.0ml，搖勻，迅速加入濃硫酸 5.0ml。搖勻，沸水浴15min后，在冷水中冷卻至室溫。在490nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度。

1.2.3.2多糖的提取。分別稱取10g3種小漿果的凍果樣品，解凍數(shù)分鐘后，用研缽研碎，置于200ml錐形瓶中。按料液比為1∶8(M/V)加入80ml蒸餾水。在90 ℃的恒溫水浴鍋中提取4h。取出，8層紗布過濾、離心。取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的 1/8，加入乙醇，使乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到 80%，靜置24h。離心取沉淀，依次用丙酮、乙醚和乙醇洗滌脫脂，真空干燥，制得粗多糖。

1.2.3.3多糖含量測(cè)定方法。精密稱取5.00mg粗多糖，置于50ml的容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻。從中精密吸取1.0ml溶液加入到10ml容量瓶中，按“1.2.3.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行顯色后，在波長(zhǎng)490nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度(平行3次)。利用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖的含量。

2結(jié)果與分析

2.1花色苷含量測(cè)定結(jié)果根據(jù)“1.2.1”的方法測(cè)得3種小漿果樣品的花色苷含量見表1。由表1可見，藍(lán)莓、藍(lán)靛果、黑果花楸的花色苷含量依次為0.151 9、0.286 6、0.352 0mg/g，其中黑果花楸中花色苷含量最高，藍(lán)莓中花色苷含量相對(duì)最少。

表1　花色苷含量測(cè)定結(jié)果

2.2總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

2.2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。以蘆丁的濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A= 25.235C+0.070 2，R2=0.993 2，線性范圍為0.012～0.076 mg/ml。

2.2.2總黃酮含量分析比較。由表2可見，供試的藍(lán)莓、藍(lán)靛果、黑果花楸中的總黃酮含量依次為1.917、1.695、2.636 mg/g，其中黑果花楸黃酮含量最高，藍(lán)靛果中黃酮含量相對(duì)較低。

表2　總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

2.3多糖含量測(cè)定結(jié)果

2.3.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。以葡萄糖的濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A=7.702 9C-0.019 9，R2=0.995 3，線性范圍為0.02～0.12 mg/ml。

2.3.2多糖含量分析比較。由表3可見，供試樣品藍(lán)莓、藍(lán)靛果、黑果花楸中多糖含量依次為1.315、1.455、1.764 mg/g，其中黑果花楸中多糖含量相對(duì)最高，而藍(lán)莓中多糖含量相對(duì)最低。

表3　多糖含量測(cè)定結(jié)果

3結(jié)論與討論

從試驗(yàn)測(cè)得的花色苷、總黃酮和多糖的含量分析來看，藍(lán)莓、藍(lán)靛果和黑果花楸均含有這3種物質(zhì)，且其含量順序?yàn)椋夯ㄉ?，黑果花?藍(lán)靛果>藍(lán)莓；總黃酮，黑果花楸>藍(lán)莓>藍(lán)靛果；多糖，黑果花楸>藍(lán)靛果 >藍(lán)莓。藍(lán)莓被譽(yù)為“漿果之王”，營(yíng)養(yǎng)成分豐富。有研究指出，藍(lán)莓的花青素含量是所有的水果與蔬菜中含量最高的。而通過該試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黑果花楸中的花色苷、總黃酮及多糖的含量均高于藍(lán)莓和藍(lán)靛果，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，同時(shí)還有比藍(lán)莓更好的開發(fā)和應(yīng)用價(jià)值。

目前市場(chǎng)上研發(fā)的藍(lán)莓和藍(lán)靛果的產(chǎn)品較多，而關(guān)于黑果花楸產(chǎn)品較少，因此該類產(chǎn)品具有較大的潛在經(jīng)濟(jì)價(jià)值。該試驗(yàn)可以為黑果花楸加工商品提供理論依據(jù)和含量依據(jù)，為黑果花楸的深加工產(chǎn)品的開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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摘要[目的] 為黑果花楸相關(guān)加工產(chǎn)品提供理論和含量依據(jù)。[方法]以黑果花楸、藍(lán)莓和藍(lán)靛果為材料，采用紫外-分光光度法測(cè)定3種小漿果多糖及總黃酮含量，pH示差法測(cè)定花色苷含量，并進(jìn)行比較分析。[結(jié)果]黑果花楸全果的花色苷、總黃酮、多糖含量均高于藍(lán)莓和藍(lán)靛果，在所測(cè)3種小漿果中最高，分別為0.352 0、2.636、1.764 mg/g。[結(jié)論]黑果花楸中花色苷、總黃酮、多糖含量較高，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，有待進(jìn)一步開發(fā)利用。

關(guān)鍵詞藍(lán)莓；藍(lán)靛果；黑果花楸；花色苷；多糖

Comparison of Flavonoids and Polysaccharides Contents betweenAroniamelanocarpaand Two Kinds of Small Berries

YAO Li-yang, ZHANG Yu*, ZHANG Li-yu et al(Key Laboratory of Biological Medicine Preparations, Institute of Pharmacy, Jiamusi University, Jiamusi Heilongjiang 154007)

Abstract[Objective] To provide theoretical and content basis for the related processing products ofAroniamelanocarpa.[Method] WithA.melanocarpa, blueberry andLoniceraedulisas the materials, flavonoids and polysaccharides contents in the three small berries were detected by UV-VIS spectrophotometry. Anthocyanin content was detected by pH differential method. And comparative analysis was carried out. [Result] Anthocyanin, flavonoids and polysaccharides contents inA.melanocarpawere all higher than those in blueberry andL.edulis, which were 0.352 0, 2.636 and 1.764 mg/g, respectively. [Conclusion]A.melanocarpahas relatively high contents of anthocyanin, flavonoids and polysaccharides, which is of high medicinal and nutritional values, and is worthy of further research.

Key wordsBlueberry;Loniceraedulis;Aroniamelanocarpa; Anthocyanin; Polysaccharide

收稿日期2015-12-07

作者簡(jiǎn)介姚利陽(yáng)(1994- )，男，安徽滁州人，碩士研究生，研究方向：天然藥物有效成分的分離及結(jié)構(gòu)研究。*通訊作者，教授，碩士，碩士生導(dǎo)師，從事天然藥物有效成分的分離及結(jié)構(gòu)研究。

中圖分類號(hào)S 38

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)01-122-03