變應性鼻炎腎陽虛復合豚鼠模型篩選與評價

潘利葉 馬重陽 劉 敏 李姝玉 于 雪 范盎然 王 旭 王淑艷 閆 凱

(1 北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，100029，北京； 2 北京中醫(yī)藥大學附屬東方醫(yī)院，100078，北京)

實驗研究

變應性鼻炎腎陽虛復合豚鼠模型篩選與評價

潘利葉1馬重陽1劉 敏1李姝玉1于 雪1范盎然1王 旭1王淑艷1閆 凱2

(1 北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，100029，北京； 2 北京中醫(yī)藥大學附屬東方醫(yī)院，100078，北京)

目的：在卵清蛋白致敏變應性鼻炎豚鼠模型基礎上，采用糖皮質(zhì)激素、羥基脲、腺嘌呤3種不同陽虛誘導劑誘發(fā)，建立變應性鼻炎腎陽虛復合模型，以篩選建立理想而穩(wěn)定的變應性鼻炎(Allergic Rhinitis，AR)病證結(jié)合動物模型。方法：采用卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)誘導建立變應性鼻炎豚鼠模型，同時給予糖皮質(zhì)激素、羥基脲或腺嘌呤建立腎陽虛復合模型，觀察動物宏觀體征及死亡情況、局部過敏癥狀，酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)法測血清中sIgE和組胺含量，蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin，HE)染色觀察腎和睪丸組織形態(tài)學改變。結(jié)果：糖皮質(zhì)激素、羥基脲和腺嘌呤3種致腎陽虛藥物均可使動物表現(xiàn)出腎陽虛癥狀及體征、體重下降并具有一定的致死率。與空白組相比，糖皮質(zhì)激素對腎臟和睪丸組織形態(tài)影響較小，羥基脲和腺嘌呤對腎臟和睪丸等形態(tài)結(jié)構影響較大。結(jié)論：對比3個腎陽虛復合模型，羥基脲復合組模型比激素復合組和腺嘌呤復合組模型更穩(wěn)定，且死亡率較低，較為理想。不過變應性鼻炎病證結(jié)合動物模型的指標評價標準尚待進一步研究。

變應性鼻炎；腎陽虛；糖皮質(zhì)激素；羥基脲；腺嘌呤

目前最常見的變應性鼻炎動物模型是通過OVA致敏再誘發(fā)誘導致敏豚鼠血清IgE效價升高，從而出現(xiàn)相應鼻部過敏癥狀。為了更符合AR腎陽虛的病機特性，近年學者開始探索建立腎陽虛型變應性鼻炎復合動物模型。通常做法是，在OVA誘導過敏的同時，采用某些“陽虛”誘導劑來模擬中醫(yī)腎陽虛證候，以此來建立變應性鼻炎病證結(jié)合的復合模型。目前，腎陽虛誘導劑各有不同，以糖皮質(zhì)激素、腺嘌呤、羥基脲最為常見，其建立的模型穩(wěn)定性也各有差異。本研究擬在同一條件下，對這3種模型進行對比評價，以篩選建立一種穩(wěn)定可行的變應性鼻炎腎陽虛病證結(jié)合動物模型。

1 材料與方法

1.1 動物與分組 選用3～4月齡普通級雄性豚鼠60只，體重300 g～350 g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司。隨機分4組：空白對照組(簡稱空白組)8只；單純AR組(簡稱單純組)10只；糖皮質(zhì)激素致腎陽虛AR組(簡稱激素復合組)14只；羥基脲致腎陽虛AR組(簡稱羥基脲復合組)14只；腺嘌呤致腎陽虛AR組(簡稱腺嘌呤復合組)14只。適應性飼養(yǎng)7 d后進行造模。

1.2 試劑與設備 OVA，購自Sigma-Aldrich(上海)貿(mào)易有限公司(貨號A5503)；氫氧化鋁佐劑，濃度40 mg/mL，購自北京百諾威生物科技有限公司(貨號PI77161)；醋酸潑尼松龍注射液，由華中藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號20131210；羥基脲片，由山西遠景康業(yè)制藥有限公司生產(chǎn)，批號20140101；腺嘌呤、伊文斯藍，購自國藥集團化學試劑北京有限公司；離心機；電子分析天平；微量取樣器。

1.3 模型制備(方法參考文獻[1-3])

1.3.1 單純組 以OVA 0.9 mg做抗原，氫氧化鋁佐劑0.3 mL，加生理鹽水0.3 mL，形成混懸液，腹腔內(nèi)注射，隔日1次，共7次；腹腔注射完成后第2 d，行被動皮膚過敏試驗(PCA)，確定IgE抗體效價升高后，將OVA 8 mg+生理鹽水20 μL用微量加樣器滴入雙側(cè)鼻腔，每側(cè)10 μL，1次/d，共7次激發(fā)。

1.3.2 激素復合組 每日用醋酸潑尼松龍注射液肌注，按50 mg/(kg·d)劑量，連續(xù)7 d，第8 d始將劑量減為40 mg/(kg·d)，連續(xù)7 d，第15 d將劑量減為30 mg/(kg·d)，連續(xù)7 d；同時按A組方法致敏。

1.3.3 羥基脲復合組 給予羥基脲混懸液1 mL灌胃，劑量為239 mg/(kg·d)，連續(xù)14 d，同時按A組方法致敏。

1.3.4 腺膘呤復合組 給予腺嘌呤混懸液1 mL灌胃，劑量為300 mg/(kg·d)，連續(xù)7 d；同時按A組方法致敏。

1.3.5 空白組 給予生理鹽水。

1.4 實驗方法

1.4.1 宏觀體征及死亡情況 每日觀察記錄動物的一般外觀癥狀，包括毛發(fā)變化，食欲、反應及活動情況，精神和呼吸是否改變、死亡數(shù)量等情況，并隔日測量體重。

1.4.2 局部過敏癥狀 給OVA致敏后，動物鼻部逐漸出現(xiàn)擦鼻、噴嚏、流涕等過敏癥狀，滴鼻激發(fā)后癥狀明顯增加。每次滴鼻后20 min內(nèi)，將上述行為記錄并作出評分，總分達5分者為過敏模型成功。標準如下見表1。

表1 過敏反應行為評分標準

1.4.3 被動皮膚過敏試驗(PCA) PCA試驗是利用與同種或異種動物組織有結(jié)合性的抗體所引起的局部過敏反應，來檢驗抗體或抗原的高敏感度的方法。實驗方法為：各組于末次腹腔注射OVA后，分別在每組動物中隨機選取3只，于球后靜脈叢采血0.3 mL，離心分離出血清，取40 μL并用生理鹽水稀釋配成1∶4、1∶16、1∶64、1∶256濃度；并取健康豚鼠15只，背部剃毛，將上述不同濃度的血清分別注射于背部皮下，間隔2 cm，并作記號；72 h后，以OVA 1 mg、伊文斯蘭5 mg溶于1 mL生理鹽水，于豚鼠足背靜脈注射，30 min后觀察結(jié)果，拍照。

1.4.4 血清中sIgE和組胺 將動物麻醉后，行腹主動脈取血，然后離心取血清，采用ELISA方法檢測，按試劑盒說明書操作。

1.4.5 腎臟、睪丸組織病理形態(tài) 剝?nèi)∧I臟、睪丸后，分別經(jīng)甲醛浸泡固定、脫水包埋、切片、HE染色，在光學顯微鏡下，觀察腎臟與睪丸組織病理形態(tài)結(jié)構。

2 結(jié)果

2.1 一般外觀癥狀、體重變化及死亡情況 結(jié)果如表2。

根據(jù)表2、表3、表4，結(jié)合一般外觀癥狀及體征、體重增長率和致死率的比較，3個腎陽虛復合組中，激素組出現(xiàn)腎陽虛等癥狀主要在用藥后期，1周內(nèi)體重變化不明顯，3周后體重明顯下降，死亡率較大；而羥基脲組在給藥過程中腎陽虛癥狀逐漸出現(xiàn)并加重，體重逐漸下降，死亡率較激素組和腺嘌呤組低；腺嘌呤組則主要在用藥早期迅速出現(xiàn)嚴重的腎陽虛癥狀，體重急劇下降，死亡率也較大。

因此，表明激素、羥基脲和腺嘌呤3種致腎陽虛藥物均可使動物表現(xiàn)出腎陽虛癥狀及體征、體重下降并具有一定的致死率。對比3個腎陽虛復合組，羥基脲復合組模型比激素復合組和腺嘌呤復合組模型更穩(wěn)定，且死亡率較低。

表2 比較3種致腎陽虛藥物對動物一般外觀癥狀及體征的影響

表3 比較3種致腎陽虛藥物對動物體重增長率的影響±s)

注：1周體重增長率=造模1周后體重/造模前體重；3周體重增長率=造模3周后體重/造模前體重與空白組相比，*P<0.05，**P<0.01。

表4 比較3種致腎陽虛藥物的致死率

2.2 過敏反應行為評分 據(jù)表5，與空白組相比，單純組和3個腎陽虛復合組過敏反應行為評分均較高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。單純組平均得分達5分(過敏模型成功)，羥基脲復合組和腺嘌呤復合組平均得分較高，但激素復合組平均得分較低(與激素抑制免疫反應相關)。

2.3 血清中sIgE、組胺含量 據(jù)表6，與空白組相比，單純組和3個腎陽虛復合組血清中sIgE含量均升高，差異有統(tǒng)計學意義；同時，與空白組相比，單純組和3個腎陽虛復合組血清中組胺含量均升高，差異有統(tǒng)計學意義。

2.4 被動皮膚過敏試驗(PCA) 見圖1。

表5 各組動物過敏反應行為評分

注：滴鼻激發(fā)后，第5、6、7天，各組動物的過敏反應表現(xiàn)較穩(wěn)定，比較該3 d的平均得分。與空白組相比，*P<0.05,**P<0.01。

表6 各組動物血清中sIgE、組胺含量

注：與空白組相比，*P<0.05,**P<0.01。

圖1 PCA試驗結(jié)果圖片

注：A:空白組；B:單純組；C:激素復合組；D:羥基脲復合組；E:腺嘌呤復合組。

實驗結(jié)果可見：靜脈注射后，B、C、D、E組豚鼠皮膚、眼眶逐漸出現(xiàn)顏色變化，背部致敏點處出現(xiàn)藍斑，血清濃度越高，藍斑直徑越大，甚至兩個點之間連成一片(如D)，濃度低者或可不出現(xiàn)藍斑(如B、C、E左側(cè))?？瞻讓φ战M未出現(xiàn)藍斑，結(jié)果為陰性；單純組在1∶4和1∶16濃度的注射點出現(xiàn)藍斑，直徑大于5 mm，結(jié)果為陽性；激素復合組在1∶4濃度的注射點出現(xiàn)藍斑，直徑大于5 mm，結(jié)果為陽性；羥基脲復合組藍斑面積連成片狀，直徑大于5 mm，結(jié)果為陽性；腺嘌呤復合組在1∶4濃度的注射點出現(xiàn)藍斑，直徑大于5 mm，結(jié)果為陽性。表明單純組和3個腎陽虛復合組動物體內(nèi)的IgE抗體效價升高。

結(jié)合過敏反應行為評分、PCA試驗和血清中sIgE、組胺含量變化，表明單純組和3個腎陽虛復合組動物體內(nèi)過敏反應發(fā)生。

2.5 腎臟、睪丸組織病理形態(tài)的變化 腎組織病理切片：正常對照組大鼠腎臟結(jié)構清晰,皮質(zhì)、髓質(zhì)結(jié)構正常,腎小球、腎小管及間質(zhì)均無異常改變(圖2A)。與空白組比較,單純組和激素復合組腎臟形態(tài)結(jié)構無明顯病理改變(圖2B和2C)。羥基脲復合組腎臟可見腎小體數(shù)量減少，腎小囊囊腔擴大，腎小管管腔呈代償性擴大、管壁變薄、細胞排列紊亂，腎小管間間質(zhì)結(jié)締組織增生，可見炎性細胞浸潤(圖2D)。腺嘌呤復合組可見,腎小管上皮濁腫、壞死、脫落,腎小管顯著擴張，腎小囊包膜結(jié)構不清，腎小管內(nèi)有大量結(jié)晶物沉著,且有異物肉芽腫形成,占據(jù)整個管腔,皮、髓質(zhì)間質(zhì)纖維組織增生,大量炎性細胞浸潤,可見纖維素樣壞死(圖2E)。

圖2 3種致腎陽虛藥物對腎臟組織病理形態(tài)的影響(HE×400)

注：A空白組；B單純組；C激素復合組；D羥基脲復合組；E腺嘌呤復合組。

睪丸組織病理切片：空白組睪丸中生精小管上皮厚度適中,可見不同發(fā)育階段的生精細胞及成熟的精子，上皮外的界膜均勻、完整，管腔飽滿,管腔內(nèi)可見密度適當?shù)木?；間質(zhì)細胞排列均勻,疏松結(jié)締組織中微血管豐富(圖3A)。與空白組相比，單純組和激素復合組睪丸界膜、生精小管上皮沒有明顯改變,各級生精細胞數(shù)量較多，生精小管形態(tài)完整,間質(zhì)相對豐富,間質(zhì)內(nèi)毛細血管相對較多，無明顯病理改變(圖3B和3C)。羥基脲復合組睪丸中生精小管上皮萎縮，各級生精細胞、精子細胞及精子減少，部分生精小管可見生精細胞脫落及排列紊亂,間質(zhì)細胞變性(圖3D)。腺嘌呤復合組睪丸中生精小管上皮明顯變薄,各級生精細胞數(shù)量顯著減少；管腔面幾乎見不到變態(tài)后的精子，僅見少量脫落的生精細胞,支持細胞和間質(zhì)細胞變性(圖3E)。

圖3 3種腎陽虛誘導劑對睪丸組織病理形態(tài)的影響(HE×400)

注：A空白組；B單純組；C激素復合組；D羥基脲復合組；E腺嘌呤復合組。

結(jié)合腎臟和睪丸的形態(tài)學變化，表明激素、羥基脲和腺嘌呤3種致腎陽虛藥物中，激素對腎臟和睪丸等形態(tài)結(jié)構影響較小，羥基脲和腺嘌呤對腎臟和睪丸等形態(tài)結(jié)構影響較大。

3 討論

現(xiàn)代中醫(yī)臨床具有辨證與辨病相結(jié)合的特點，建立病證結(jié)合模型是開展相關中醫(yī)藥實驗研究必不可少的手段，是連接中醫(yī)基礎理論和臨床實踐的橋梁與紐帶，是深化對證候物質(zhì)基礎認識的方法，同時也是篩選有效方藥、深入研究藥物作用機制的手段[5]。就腎陽虛證而言，臨床可表現(xiàn)出惡寒蜷縮，精神萎靡，膚白肢冷，消瘦乏力，食欲不振，大便稀溏，小便頻數(shù)而清長，免疫力及生殖功能低下等一系列癥狀和體征。在動物研究中通常采用各種不同措施使其出現(xiàn)上述癥狀來模擬腎陽虛的狀態(tài)，藥物是最普遍的方法，其中激素、羥基脲和腺嘌呤3種使用較廣泛。

這3種誘導劑使用后，我們的實驗結(jié)果顯示，3種模型動物均在局部過敏的同時出現(xiàn)了惡寒蜷縮，精神萎靡，肢冷，免疫力及性功能低下并易于死亡等一系列腎陽虛癥狀和體征。由于誘發(fā)腎陽虛的機制并不相同，所建立的動物模型也各有優(yōu)缺點[4]。

糖皮質(zhì)激素可抑制丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸的反饋作用，當糖皮質(zhì)激素突然停用，下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸的抑制狀態(tài)使的機體對外界環(huán)境變化的應激、適應能力顯著下降，水、電解質(zhì)代謝失調(diào)，同時具有免疫抑制作用。故造模過程中，動物在用藥后期才出現(xiàn)肢體無力或癱瘓，消瘦，部分死亡等腎陽虛表現(xiàn)，同時局部過敏癥狀不明顯，病理結(jié)果中腎臟和睪丸基本無損傷。此模型主要在免疫力低下方面體現(xiàn)腎陽虛的狀態(tài)，即腎陽抗邪愈病的功能受損。

羥基脲是一種核苷酸還原酶抑制劑，可抑制DNA的合成和核酸代謝，使得脂肪、蛋白質(zhì)、能量代謝下降，造成下丘腦-垂體-腎上腺軸/甲狀腺軸/性腺軸不同程度的功能紊亂，從而出現(xiàn)一系列虛損的表現(xiàn)。故造模過程中，動物逐漸出現(xiàn)毛發(fā)枯槁疏松、堆疊，攝食及活動減少，蜷縮、消瘦，精神萎靡，少數(shù)死亡等腎陽虛表現(xiàn)，局部過敏癥狀無影響、腎臟和睪丸的病理可見損傷。此模型主要在生理活動及代謝、性功能方面體現(xiàn)腎陽虛的狀態(tài)，即腎陽溫煦機體、維持生長發(fā)育和生殖的功能受損。

腺嘌呤在體內(nèi)黃嘌呤氧化酶的作用下會轉(zhuǎn)變成極難溶解于水的2，8-二羥基腺嘌呤，當機體大量攝入時，尿酸鹽將析出結(jié)晶并沉積于腎小管與腎間質(zhì)，刺激局部引起尿酸鹽異物肉芽腫性炎性反應，并堵塞腎小管腔引起腎功能衰竭。另外，腺嘌呤的代謝產(chǎn)物具有“毒性”，可抑制腎組織中與糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝有關的多種酶活性，影響腎組織的能量代謝。故動物造模過程中，動物早期迅速出現(xiàn)毛發(fā)枯槁疏松、脫落，攝食及活動明顯減少，精神萎靡，蜷縮、消瘦，呼吸急促，死亡等表現(xiàn)，局部過敏癥狀無影響，腎臟和睪丸的病理出現(xiàn)明顯損傷。此模型主要在生理活動及水液代謝方面體現(xiàn)腎陽虛的狀態(tài)，即腎陽溫煦機體、維持生長的功能受損。因此，機體用藥后迅速出現(xiàn)一系列嚴重的虛損癥狀，并大量死亡。

中醫(yī)證候概念是基于中醫(yī)思維而提出存在，其現(xiàn)代生物學實質(zhì)尚在挖掘研究中，相關評價指標體系尚未有權威定論，腎陽虛證也是如此。相同的腎陽虛證在不同的疾病中可以表現(xiàn)為不同的生物學基礎，其涉及現(xiàn)代醫(yī)學神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)等不同方面的功能紊亂或損傷。陳英華等認為應當從一般狀態(tài)、客觀指標、藥物反證3個角度進行模型評價。鄒海淼[6]等總結(jié)得出在腎陽虛的動物模型、作用機理、基因表達、代謝組學等研究中，多采用下丘腦-垂體-靶腺軸功能，免疫系統(tǒng)，腎功能，能量代謝，環(huán)核苷酸，核苷酸系統(tǒng)變化，自由基代謝，細胞信號系統(tǒng)，特殊蛋白功能等作為主要評價指標。王秀鳳[7]等利用因子分析的方法研究垂體-靶腺軸上的8個生物學指標，結(jié)果表明睪酮、黃體生成素和皮質(zhì)醇是3個時期共有的關鍵指標，發(fā)生變化的關鍵指標在早、中、晚3個時期分別為四碘甲腺原氨酸、促腎上腺皮質(zhì)激素和促卵泡激素，即隨著時期的不同這一關鍵指標從甲狀腺軸變動到腎上腺軸最后到性腺軸。

我們認為，具體疾病的腎陽虛病證結(jié)合動物模型也應根據(jù)具體的疾病來選擇。對變應性鼻炎而言，其免疫功能紊亂，腎陽虛模型的建立應反映其免疫功能異常的現(xiàn)代生物免疫機制。糖皮質(zhì)激素對過敏反應具有抑制作用，會對模型的致敏效果存在一定的干擾，用于本病是不恰當?shù)?。相比之下，腺嘌呤和羥基脲較為合適。同時，在實驗進行過程中發(fā)現(xiàn)，腺嘌呤會導致機體用藥后迅速出現(xiàn)一系列嚴重的虛損癥狀，并大量死亡，這為模型的穩(wěn)定性、可控性和重復性帶來了很大的困難。而羥基脲這些表現(xiàn)進程較緩慢，機體各系統(tǒng)功能處于低水平狀態(tài)，死亡率較低，是較理想的陽虛模型。不過，我們并不能完全肯定羥基脲就是最理想的變應性鼻炎腎陽虛證動物模型，其所致的腎陽虛與變應性鼻炎臨床實際的腎陽虛尚有距離，不能完全等同。

本實驗在動物模型的評價指標方面相對較少，藥物作用機制不同，評價指標也存在差異，單一的免疫系統(tǒng)血清學指標的變化難以作出客觀全面的評價。因此，應從中西醫(yī)生理病理機制的不同層面和角度，選擇具有代表性的評價指標。在垂體-靶腺軸的關鍵指標方面，研究發(fā)現(xiàn)腎陽虛變化的關鍵指標在早、中、晚3個時期分別為四碘甲腺原氨酸、促腎上腺皮質(zhì)激素和促卵泡激素，即隨著時期的不同這一關鍵指標從甲狀腺軸變動到腎上腺軸最后到性腺軸[7]。自由基代謝方面的關鍵指標，如SOD、MDA、GSH、GSH-PX等。研究認為，氧化應激反應也是變應性鼻炎發(fā)病的一個重要機制，氧化應激與機體變態(tài)反應過程交叉、相互影響，加重疾病的癥狀[8-9]。氧化應激參與了機體多種病理生理過程，活性氧的細胞毒性可影響細胞功能，造成細胞漸進式損害加重疾病狀態(tài)[10]。崔靜等[11]實驗研究發(fā)現(xiàn)變應性鼻炎大鼠鼻黏膜呼吸區(qū)組織SOD、GSH、GSH-PX降低，MDA升高，相關蛋白含量異常。細胞學方面的指標，如Th1、Th2細胞數(shù)目等。趙建東等[12]研究發(fā)現(xiàn)變應性鼻炎模型的Thl數(shù)量有下降趨勢，Th2細胞卻明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義，Thl/Th2顯著偏離正常比值，差異有統(tǒng)計學意義，說明變應性鼻炎在細胞水平上存在一定程度的偏移。

此外，甄甄[13]研究表明變應性鼻炎中存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可由表達上調(diào)的細胞因子誘導產(chǎn)生，并促進IgE及IL-5、IL-13分泌從而參與變應性鼻炎的發(fā)病過程。研究發(fā)現(xiàn)P物質(zhì)可作為誘導神經(jīng)源性炎性反應的物質(zhì)參與變應性鼻炎晚期反應過程，是重要的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)相互作用的遞質(zhì)和共同信使[14]。Zhang[15]等通過動物實驗發(fā)現(xiàn)P物質(zhì)可誘導豚鼠表現(xiàn)變應性鼻炎癥狀，且能誘導鼻黏膜趨化因子RANTESmRNA的表達，促進局部嗜酸粒細胞的趨化和遷移，誘導和加重鼻黏膜的炎性反應。臨床實驗表明變應性鼻炎患者鼻黏膜涂片中P物質(zhì)等神經(jīng)肽高表達[16]。史紅健[17]等觀察加味補中益氣湯對變應性鼻炎大鼠鼻腔黏膜P物質(zhì)及P物質(zhì)受體表達活性的影響，揭示了加味補中益氣湯對此病癥狀的緩解作用，可能是通過抑制鼻腔黏膜P物質(zhì)的釋放以及P物質(zhì)受體的表達，降低肥大細胞浸潤程度，減輕組織炎性反應來實現(xiàn)的。相關研究表明NF-κB的過度活化很可能使變應性鼻炎和支氣管哮喘中多種炎性反應基因表達升高，鼻黏膜、支氣管上皮反應性增高，并且參與疾病的發(fā)生和發(fā)展過程[18]。南麗紅[19]等研究發(fā)現(xiàn)醒鼻凝膠劑對變應性鼻炎豚鼠的作用，可能是通過抑制NF-κB的活化與核移位，降低了IL-5、GM-CSF、CCL-1的表達，從而減輕鼻部的炎性反應達到治療目的。

我們面對的問題是中醫(yī)證候研究的瓶頸問題，這與證候?qū)嵸|(zhì)的認識、與現(xiàn)代科學技術手段的發(fā)展等因素密切相關。因此，要想建立符合中醫(yī)學理論和臨床實際的病證結(jié)合動物模型，還需要進行動物模型評價體系的規(guī)范化和標準化研究，選擇進一步研究探索與具體疾病、證型關系緊密且具有代表性意義的客觀指標，這是一條很漫長的道路[20]。

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(2016-03-10收稿 責任編輯：張文婷)

Selection and Evaluation for Guinea Pig Model with Allergic Rhinitis of Kidney-yang Deficiency Pattern

Pan Liye1, Ma Chongyang1, Liu Min1, Li Shuyu1, Yu Xue1, Fan Angran1, Wang Xu1, Wang Shuyan1, Yan Kai2

(1BasicMedicalCollege,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China; 2EastHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100078,China)

Objective: To establish complex models with allergic rhinitis of kidney-yang-deficiency by three different kidney-Yang-deficiency inducers, glucocorticoid, hydroxyurea and adenine, based on guinea pig models of allergic rhinitis sensitized by ovalbumin, for screening a reliable and ideal model of allergic rhinitis of kidney yang deficiency pattern. Methods: Guinea pig models of Allergic Rhinitis sensitized by ovalbumin were set and glucocorticoid, hydroxyurea or adenine was used to build the complex models of allergic rhinitis with kidney-yang deficiency. The macro signs, death and partial allergy symptoms of animals were observed, the serum sIgE and histamine were tested by ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) and the morphology change of kidney and testis tissue were observed by HE (hematoxylin-eosin) staining. Results: Three different Yang deficiency inducers, glucocorticoid, hydroxyurea and adenine, could lead to kidney-yang-deficiency symptoms and signs, weight loss, and cause certain death. Compared with the control group, it is found the affection on morphology of glucocorticoid to kidney and testis tissue was little, while which of hydroxyurea and adenine were great. Conclusion: By comparison of three different complex models with allergic rhinitis of kidney-yang deficiency, the model induced by hydroxyurea was more stable and suitable with lower death rate. More researches should be conducted for the evaluation criteria of the allergic rhinitis animal model.

Allergic Rhinitis; Kidney-yang Deficiency; Glucocorticoid; Hydroxyurea; Adenine

國家自然科學基金面上項目(編號：81202728)——基于兩模兩方的小青龍湯、麻黃附子細辛湯對兩種不同AR模型干預機制的方證相應研究

潘利葉(1987.10—)，女，北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院2013級碩士研究生，研究方向：經(jīng)方防治常見病、疑難病研究，E-mail:363607705@qq.com

劉敏(1978.04—)，女，博士，副教授，副主任醫(yī)師，碩士生導師，研究方向：經(jīng)方防治常見病、疑難病研究，E-mail：liumin78@126.com

R285.5

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10.3969/j.issn.1673-7202.2016.12.057