基于UPLC-Q/TOF MS技術(shù)的隔藥餅灸合募配穴治療UC大鼠的尿液代謝組學(xué)研究

吳璐一 顧沐恩 朱 毅 劉慧榮 秦文政 黃 艷竇傳字 袁凌松 陸 穎 周次利 李 璟

(1 上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市氣功研究所,上海,200030; 2 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,上海,200437;3 上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所,上海,200030; 4 上海中醫(yī)藥大學(xué),上海,201203)

基于UPLC-Q/TOF MS技術(shù)的隔藥餅灸合募配穴治療UC大鼠的尿液代謝組學(xué)研究

吳璐一1顧沐恩2朱 毅3劉慧榮3秦文政4黃 艷3竇傳字3袁凌松3陸 穎1周次利3李 璟2

(1 上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市氣功研究所,上海,200030; 2 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,上海,200437;3 上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所,上海,200030; 4 上海中醫(yī)藥大學(xué),上海,201203)

目的：運(yùn)用代謝組學(xué)用超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q/TOF MS)技術(shù)探討隔藥餅灸合募配穴治療潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)的作用機(jī)制。方法：27只SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、隔藥餅灸合募配穴組，采用DSS水溶液飲用法制備UC大鼠模型。隔藥餅灸合募配穴組每次每穴各灸2壯，1次/d，共灸14次。治療結(jié)束后，搜集各組尿液，UPLC-Q/TOF MS分析檢測(cè)，主成分分析(PCA)分析和偏最小二乘法分析(PLS-DA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，運(yùn)用Metlin(http://metlin.scripps.edu/)、KEGG(http://www.kegg.jp)、HMDB(http://www.hmdb.ca)、MetaboAnalyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca)數(shù)據(jù)庫和網(wǎng)站，確認(rèn)潛在生物標(biāo)志物，分析代謝物通路。結(jié)果：正、負(fù)離子模式下，正常組、模型組、隔藥餅灸合募配穴組3組大鼠尿液在PLS-DA數(shù)據(jù)模型下分離趨勢(shì)良好。隔藥餅灸合募配穴可有效回調(diào)UC模型大鼠6個(gè)差異代謝物L(fēng)-Cysteine(半胱氨酸)、Atraric acid、Tocopheronic acid、Dibutyl malate(二丁基蘋果酸鹽)、L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Pipecolic acid(哌啶酸)表達(dá)，主要參與Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)、Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸代謝)、Tyrosine metabolism(酪氨酸代謝)等氨基酸代謝通路。結(jié)論：隔藥餅灸合募配穴治療UC可能主要與氨基酸代謝有關(guān)。

灸法；代謝組學(xué)；超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜；潰瘍性結(jié)腸炎

代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的一種，通過代謝過程成中小分子代謝物的變化闡釋機(jī)體的生物學(xué)奧秘[1-2]，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、環(huán)境學(xué)等領(lǐng)域[3-6]。近年來，基于代謝組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢(shì)，開展中醫(yī)防治疾病作用機(jī)制的現(xiàn)代化研究，越來越得到關(guān)注。

潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)是一種世界范圍的疾病，全球患病率約5.3/105～238/105，呈逐年上升之勢(shì)[7]，持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的腹瀉、黏液膿血便伴腹痛、里急后重，以及不同程度的全身癥狀是UC的主要臨床表現(xiàn)，病程多在4～6周以上[8]。眾多臨床研究顯示[9-11]：中醫(yī)灸法可有效改善UC患者腹痛、腹瀉等臨床癥狀，改善腸黏膜。然而灸法治療UC的作用機(jī)制仍有待于進(jìn)一步深入研究。我們采用UPLC-Q/TOF MS技術(shù)開展隔藥餅灸合募配穴治療UC的代謝組學(xué)研究，以期從系統(tǒng)生物學(xué)角度探討灸法治療UC的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠，27只，雄性，清潔級(jí)，體重(180±20)g，由上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

飼養(yǎng)環(huán)境為12 h晝夜節(jié)律交替，室溫(20±2)℃，相對(duì)濕度(50±10)%，普通飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食與飲水。

1.2 主要試劑與儀器 1)主要實(shí)驗(yàn)材料與試劑：艾絨，南陽漢醫(yī)艾絨有限責(zé)任公司；甲醇、乙腈，均為質(zhì)譜級(jí)溶劑，德國(guó)Merck(Darmstadt)公司，甲酸，色譜級(jí)溶劑，瑞士Fluka(Buchs)公司。

2)主要實(shí)驗(yàn)儀器：液相色譜為Agilent1290 Infinity超高效液相系統(tǒng)(Agilent，美國(guó))；質(zhì)譜為Agilent 6538 Accurate-Mass Q-TOF/MS(Agilent，美國(guó))。

1.3 模型制備 適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，參照Fichna等[12]方法制備UC模型。造模大鼠分別采用3%DSS水溶液飲用7 d后，繼以濃度為1% DSS水溶液飲用4 d。

1.4 動(dòng)物分組與干預(yù) 27只SD大鼠隨機(jī)分為3組，即：正常組、模型組、隔藥餅灸合募配穴組，每組9只。

正常組：不進(jìn)行任何治療，與治療組做相同的固定。

模型組：不進(jìn)行任何治療，與治療組做相同的固定。

隔藥餅灸合募配穴組：取穴：天樞(雙)、上巨虛(雙)(穴位定位參照李忠仁主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007年)。藥餅配方：附子(四川)、肉桂(廣西)、木香(云南)等輾粉，加黃酒拌成厚糊狀制成直徑0.5 cm，厚0.3 cm大小藥餅。艾炷大小約90 mg，每次每穴各灸2壯，1次/d，共灸14次。

1.5 標(biāo)本采集 治療結(jié)束后，正常組、模型組、隔藥餅灸合募配穴組大鼠分別置于代謝籠中，單籠飼養(yǎng)，自由飲食，收集24 h尿液，1 000 r/min離心10 min，取上清，-80 ℃保存。

1.6 UPLC-Q/TOF MS代謝組學(xué)檢測(cè)

1.6.1 前處理?xiàng)l件 取100 μL尿液，加入300 μL內(nèi)標(biāo)溶液(含5 μg/mL L-2氯苯丙氨酸的甲醇溶液)，渦旋5 min，4 ℃下13 000 r/min離心15 min，取上清液即得供試品溶液。

1.6.2 UPLC-Q/TOF MS分析檢測(cè) 1)色譜條件。流動(dòng)相：A：0.1%的甲酸水溶液，B：0.1%的甲酸乙腈溶液。梯度脫洗程序：0—1 min，5% B；1—13 min，5%～95% B；13—15 min，95% B。流速：0.4 mL/min，柱溫：40 ℃，進(jìn)樣量：3 μL。

2)質(zhì)譜條件。正模式下毛細(xì)管電壓為4 kV，負(fù)模式下3.5 kV。氣體溫度350 ℃，流速11 L/min，。噴霧電壓45psi，碎裂電壓120V，Skimmer1電壓60V。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Agilent Masshunter Qualitative AnalysisB.04.00 software對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行采集。在R軟件平臺(tái)下，使用XCMS程序(http://metlin.scripps.edu/download/)進(jìn)行峰的識(shí)別，保留時(shí)間校正，自動(dòng)積分等。根據(jù)80%原則進(jìn)行峰的篩選后，將所有離子以內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的分子離子峰(正離子模式下：200.0473；負(fù)離子模式下：198.0328)為標(biāo)準(zhǔn)離子進(jìn)行歸一化處理。隨后，將數(shù)據(jù)矩陣導(dǎo)入Simca-P軟件(版本11.0)，Par標(biāo)度化處理后，進(jìn)行主成分分析(PCA)分析和偏最小二乘法分析(PLS-DA)。VIP>1的代謝物，進(jìn)一步通過方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05則認(rèn)為是差異代謝物。

將統(tǒng)計(jì)學(xué)意義離子的精確m/z值使用網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫Metlin(http://metlin.scripps.edu/)進(jìn)行鑒別，結(jié)合KEGG(http://www.kegg.jp)、HMDB(http://www.hmdb.ca)、MetaboAnalyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca)數(shù)據(jù)庫和網(wǎng)站，確認(rèn)潛在生物標(biāo)志物，分析代謝物通路。MetaboAnalyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca)代謝物通路分析顯示Impact值>0.10者為重要代謝物通路[13-15]。

2 結(jié)果

2.1 PLS-DA得分圖 正、負(fù)離子模式下，正常組、模型組、隔藥餅灸合募配穴組大鼠尿液代謝物的PLS-DA得分圖如圖1、圖2所示。從圖1、圖2可見，3組大鼠尿液代謝物在PLS-DA數(shù)據(jù)模型下分離趨勢(shì)良好，提示正常組、模型組、隔藥餅灸合募配穴組大鼠尿液在內(nèi)源性代謝物層面都發(fā)生了較為明顯的變化。

圖1 正離子模式下各組大鼠尿液

注：A：正常組，B：模型組，C：隔藥餅灸合募配穴組。

圖2 負(fù)離子模式下各組大鼠尿液

注：A：正常組，B：模型組，C：隔藥餅灸合募配穴組。

2.2 差異代謝物 各組大鼠尿液差異代謝物如表1所示。與正常組比較，模型組共有19個(gè)差異代謝物表達(dá)，其中L-Cysteine、Atraric acid、Tocopheronic acid等15個(gè)差異代謝物含量在模型組表達(dá)升高，Phosphorylcholine、Phenyl glucuronide、Dopamine等4個(gè)差異代謝物含量在模型組表達(dá)降低。隔藥餅灸合募配穴干預(yù)后，可有效回調(diào)6個(gè)差異代謝物L(fēng)-Cysteine(半胱氨酸)、Atraric acid、Tocopheronic acid、Dibutyl malate(二丁基蘋果酸鹽)、L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Pipecolic acid(哌啶酸)表達(dá)。

2.3 代謝通路 將隔藥餅灸合募配穴干預(yù)后，可有效回調(diào)的6個(gè)差異代謝物L(fēng)-Cysteine、Atraric acid、Tocopheronic acid、Dibutyl malate、L-Tyrosine、L-Pipecolic acid導(dǎo)入MetaboAnalyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca)，進(jìn)行代謝物通路分析。如圖3、表2所示，隔藥餅灸合募配穴組對(duì)UC大鼠Ubiquinone and other terpenoid-quinone biosynthesis、Aminoacyl-tRNA biosynthesis、Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis、Thiamine metabolism等12條代謝通路產(chǎn)生影響。其中，Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)、Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸代謝)、Tyrosine metabolism(酪氨酸代謝)3條代謝通路Impact值>0.10，為重要代謝物通路。

圖3 隔藥餅灸合募配穴對(duì)UC大鼠代謝通路的影響

注：表2與圖3互為補(bǔ)充。圖3中的圓點(diǎn)代表相應(yīng)代謝通路，按Y軸-log(P)值大小，從上往下，依次與表2中的代謝通路相對(duì)應(yīng)。圓點(diǎn)的顏色代表代謝通路的P值，P值越小(-log(P)值越大)，顏色越紅；圓點(diǎn)的半徑大小代表代謝通路Impact值，Impact值越大，半徑越大。①-③為3條重要的代謝通路，①：Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis，②：Cysteine and methionine metabolism，③：Tyrosine metabolism。

3 討論

UC臨床主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、黏液膿血便，屬于中醫(yī)“腹痛”“泄瀉”“痢疾”等范疇。課題組前期研究顯示[16-18]：艾灸對(duì)UC等腸腑病內(nèi)臟痛具有良好的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，可抑制腸道炎性反應(yīng)，促進(jìn)病變局部組織修復(fù)和/或功能改善，提高痛閾，調(diào)節(jié)中樞/病變局部神經(jīng)遞質(zhì)等疼痛相關(guān)物質(zhì)水平，抑制腸纖維化。上巨虛、天樞分別為大腸的下合穴、募穴，合募配穴法是中醫(yī)針灸常用的治療腑病的配穴方法。UC病變以大腸為主，大腸為六腑之一。《素問·咳論篇》記載“治腑者，治其合”，《靈樞·邪氣臟腑病形》也有言“合治內(nèi)腑”，上巨虛為大腸下合穴，常用于腸腑疾病的治療。天樞為大腸募穴，募穴也是針灸臨床上用于治療腑病的主要穴位?！都滓医?jīng)》記載“腹脹腸鳴，氣上沖胸，不能久立，腹中(切)痛(而鳴)濯濯。冬月重感于寒則瀉，當(dāng)臍而痛，胃腸間游氣切痛，食不化，不嗜食，身腫，俠臍急，天樞主之”。劉朝等[19]采用計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)，分析針灸治療UC的診療現(xiàn)狀與特點(diǎn)，顯示天樞、上巨虛這2個(gè)穴位的使用頻次居前3位?？梢姡鞓?、上巨虛是治療UC的常用有效穴位。因此，本研究中，我們采用隔藥餅灸天樞(雙)、上巨虛(雙)治療UC，從代謝組學(xué)角度進(jìn)一步探討灸法治療UC的作用機(jī)制。

表1 各組大鼠尿液差異代謝物

注：A：正常組，B：模型組，C：隔藥餅灸合募配穴組。

表2 隔藥餅灸合募配穴對(duì)UC大鼠代謝通路的影響

代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)之后發(fā)展起來的一種系統(tǒng)生物學(xué)研究方法。中醫(yī)整體觀認(rèn)為：人體是一個(gè)有機(jī)的整體，各細(xì)胞、組織、器官之間相互聯(lián)系，相互影響，單一的從某一靶點(diǎn)、信號(hào)通路等，不足以全面闡釋中醫(yī)防病治病的作用機(jī)制。代謝組學(xué)可通過新陳代謝動(dòng)態(tài)過程中得相關(guān)代謝產(chǎn)物，闡釋機(jī)體的整體功能狀態(tài)、病理生理機(jī)制，與中醫(yī)的整體觀高度契合，近年來，在中醫(yī)領(lǐng)域研究運(yùn)用越來越廣泛[20-24]。部分學(xué)者運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)、超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q/TOF MS)技術(shù)等開展了中藥治療UC的代謝組學(xué)研究[25-26]，也有學(xué)者運(yùn)用1HNMR技術(shù)開展了針刺足陽明經(jīng)穴與非經(jīng)非穴治療UC的代謝組學(xué)研究[27]。目前，灸法治療UC的代謝組學(xué)研究較少，本研究中，我們采用UPLC-Q/TOF MS技術(shù)開展隔藥餅灸合募配穴治療UC的代謝組學(xué)研究。

本研究中，隔藥餅灸合募配穴干預(yù)后，有效回調(diào)的6個(gè)差異代謝物參與機(jī)體Ubiquinone and other terpenoid-quinone biosynthesis(輔酶q和其他類萜-醌生物合成)、Aminoacyl-tRNA biosynthesis(氨?；?tRNA生物合成)、Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)、Thiamine metabolism(硫胺素(維生素B1)代謝)等12條氨基酸代謝、輔酶因子與維生素代謝等相關(guān)通路。其中，3條重要代謝通路Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)、Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸代謝)、Tyrosine metabolism(酪氨酸代謝)均為氨基酸代謝通路，可見，調(diào)節(jié)機(jī)體氨基酸代謝是隔藥餅灸合募配穴治療UC的重要作用機(jī)制。

本研究中，UC模型組與正常組比較有19個(gè)差異代謝物表達(dá)，隔藥餅灸合募配穴干預(yù)后，可有效回調(diào)其中6個(gè)差異代謝物L(fēng)-Cysteine(半胱氨酸)、Atraric acid、Tocopheronic acid、Dibutyl malate(二丁基蘋果酸鹽)、L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Pipecolic acid(哌啶酸)表達(dá)。上述6個(gè)差異代謝物中，L-Tyrosine(酪氨酸)與L-Cysteine(半胱氨酸)是參與機(jī)體代謝通路較多的2種差異代謝物。L-Tyrosine(酪氨酸)參與了Ubiquinone and other terpenoid-quinone biosynthesis(輔酶q和其他類萜-醌生物合成)、Aminoacyl-tRNA biosynthesis(氨?；?tRNA生物合成)、Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)、Phenylalanine metabolism(苯丙氨酸代謝)、Tyrosine metabolism(酪氨酸代謝)5條代謝通路。L-Cysteine(半胱氨酸)則參與了Aminoacyl-tRNA biosynthesis(氨?；?tRNA生物合成)、Thiamine metabolism[硫胺素(維生素B1)代謝)]、Taurine and hypotaurine metabolism(?；撬岷蛠喤；撬岽x)、Pantothenate and CoA biosynthesis(泛酸鹽和輔酶a生物合成)、Glutathione metabolism(谷胱甘肽代謝)、Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸代謝)、Glycine，serine and threonine metabolism(甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝)7條代謝通路。L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Cysteine(半胱氨酸)參與的上述代謝通路，均與機(jī)體氨基酸代謝、輔酶因子與維生素代謝、遺傳信息翻譯相關(guān)。隔藥餅灸合募配穴干預(yù)后影響的3條重要代謝通路Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)、Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸代謝)、Tyrosine metabolism(酪氨酸代謝)，均與L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Cysteine(半胱氨酸)相關(guān)。Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)代謝通路中，L-Tyrosine(酪氨酸)的Impact值為0.5，Tyrosine metabolism(酪氨酸代謝)代謝通路中，L-Tyrosine(酪氨酸)的Impact值為0.14045，Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸代謝)代謝通路中，L-Cysteine(半胱氨酸)的Impact值為0.12829，顯示L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Cysteine(半胱氨酸)與上述隔藥餅灸合募配穴干預(yù)后影響的3條重要代謝通路密切相關(guān)。與正常組比較，UC模型組大鼠19個(gè)尿液差異代謝物中，L-Cysteine(半胱氨酸)變化最為顯著，排第1位，升高2.20倍；L-Tyrosine(酪氨酸)變化也很顯著，排第5位，升高1.48倍，可見，L-Cysteine(半胱氨酸)、L-Tyrosine(酪氨酸)是介導(dǎo)UC病理機(jī)制的重要物質(zhì)。隔藥餅灸合募配穴干預(yù)后，L-Cysteine(半胱氨酸)、L-Tyrosine(酪氨酸)均顯著降低，分別為UC模型組的0.54倍、0.41倍。上述結(jié)果顯示：L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Cysteine(半胱氨酸)可能在隔藥餅灸合募配穴治療UC的過程中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Cysteine(半胱氨酸)，及其相關(guān)的Phenylalanine，tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)、Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸代謝)、Tyrosine metabolism(酪氨酸代謝)3條氨基酸代謝通路，可能在隔藥餅灸合募配穴治療UC的過程中發(fā)揮重要作用。

[1]Nicholson JK，Lindon JC.Systems biology：Metabonomics[J].Nature，2008，455(7216):1054-1056.

[2]Gary J Patti，Oscar Yanes，Gary Siuzdak.Metabolomics：the apogee of the omic triology[J].Nat Rev Mol Cell Biol,2012，13(4)：263-269.

[3]Armitage EG，Barbas C.Metabolomics in cancer biomarker discovery：current trends and future perspectives[J].J Pharm Biomed Anal，2014，87:1-11.

[4]Puchades-Carrasco L，Pineda-Lucena A.Metabolomics in pharmaceutical research and development[J].Curr Opin Biotechnol，2015，35:73-77.

[5]Gibbons H，O′Gorman A，Brennan L.Metabolomics as a tool in nutritional research[J].Curr Opin Lipidol,2015，26(1):30-34.

[6]Lankadurai Brian P，Nagato Edward G，Simpson Myrna J.Environmental metabolomics：an emerging approach to study organism responses to environmental stressors[J].Environmental Reviews，2013，21(3):180-205.

[7]da Silva BC，Lyra AC，Rocha R，Santana GO.Epidemiology，demographic characteristics and prognostic predictors of ulcerative colitis[J].World J Gastroenterol,2014，20(28)：9458-9467.

[8]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)炎癥性腸病學(xué)組.炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(2012年·廣州)[J].胃腸病學(xué),2012，17(12)：763-781.

[9]Yang L，Zhao JM，Guan X，et al.Observation on the effects of different partitioned moxibustion in treating ulcerative colitis[J].J Acupunct Tuina Sci，2016,14(4)：231-241.

[10]楊周雨，張理順，李益筠，等.隔藥餅灸治療脾虛濕蘊(yùn)證輕中度潰瘍性結(jié)腸炎臨床觀察[J].針灸臨床雜志，2016，32(8)：56-58.

[11]陳潔，劉軍，王文麗，等.艾盒灸神闕佐治輕中度潰瘍性結(jié)腸炎(脾虛證)臨床觀察[J].新中醫(yī)，2016，48(8)：71-73.

[12]Fichna J，Dicay M，Lewellvn K，et al.Salvinorin A has anti-inflammatory and antinociceptive effects in experimental models of colitis in mice mediated by KOR and CBI receptors[J].Inflamm Bowel Dis，2012，18(6):1137-1145.

[13]Yi L，Shi S，Wang Y，et al.Serum Metabolic Profiling Reveals Altered Metabolic Pathways in Patients with Post-traumatic Cognitive Impairments[J].Sci Rep，2016，6:21320.

[14]Liao WT，Liu B，Chen J，et al.Metabolite Modulation in Human Plasma in the Early Phase of Acclimatization to Hypobaric Hypoxia[J].Sci Rep，2016，6:22589.

[15]Xia J，Sinelnikov IV，Han B，Wishart DS.MetaboAnalyst 3.0--making metabolomics more meaningful[J].Nucleic Acids Res，2015，43(W1):W251-W257.

[16]包春輝，吳璐一，吳煥淦，等.艾灸抑制腸腑病內(nèi)臟痛的效應(yīng)及機(jī)制研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2014，29(2)：419-422.

[17]劉慧榮，譚琳鎣，吳煥淦，等.艾灸對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎腸纖維化大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞增殖影響的研究[J].上海針灸雜志，2008，27(7)：42-45.

[18]吳煥淦，張必萌，安廣青.隔藥灸調(diào)節(jié)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎腸纖維化TGF-β及其受體的研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，15(1)：39-42.

[19]劉朝，楊金生，吳遠(yuǎn)，等.基于數(shù)據(jù)挖掘的針灸治療潰瘍性結(jié)腸炎的診療現(xiàn)狀與特點(diǎn)[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015，30(11)：3893-38977.

[20]王喜軍.中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的系統(tǒng)方法學(xué)——中醫(yī)方證代謝組學(xué)[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40(1)：13-17.

[21]高駿，劉旭光，顏賢忠，等.代謝組學(xué)研究針灸關(guān)鍵問題的初步策略分析與探討[J].針刺研究，2011，36(4)：296-301.

[22]Wang X，Sun H，Zhang A，et al.Potential role of metabolomics apporoaches in the area of traditional Chinese medicine：as pillars of the bridge between Chinese and Western medicine[J].J Pharm Biomed Anal，2011，55(5)：859-868.

[23]Dou CZ，F(xiàn)eng H，Zheng X，et al.Thinking on Functional Mechanism of Acupuncture for Inflammatory Bowel Diseases Based on Metabolomics.J Acupunct Tuina Sci，2014，12(2):73-79.

[24]楊星月,馬玉俠,杜冬青,等.基于代謝組學(xué)的隔藥灸臍法治療原發(fā)性痛經(jīng)的機(jī)理研究[J].上海針灸雜志,2015,34(8):707-710.

[25]孫平良，耿曙光，袁代解，等.安腸湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸黏膜組織中內(nèi)源性代謝物的影響[J].中醫(yī)雜志，2016，57(19)：1678-1784.

[26]王鳳云，伍海濤，韓亮.敗醬草總皂苷對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用及代謝組學(xué)的初步研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2015，26(2)：217-220.

[27]吳巧鳳，楊陽，趙紀(jì)嵐，等.基于代謝組學(xué)技術(shù)研究針剌經(jīng)穴與非經(jīng)穴治療潰瘍性結(jié)腸炎的腦代謝物質(zhì)基礎(chǔ)[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，37(8)：572-577.

(2016-12-07收稿 責(zé)任編輯：洪志強(qiáng))

Urine Metabonomic Research of Herbs-partition Moxibustion with Mactching Mu Points in UC Rats Based on UPLC-Q/TOF MS

Wu Luyi1,Gu Muen2,Zhu Yi2,Liu Huirong2,Qin Wenzheng3,Huang Yan2, Dou Chuanzi2,Yuan Lingsong2,Lu Ying1,Zhou Cili2,Li Jing4

(1ShanghaiQigongResearchInstitute,ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai200030,China; 2DepartmentofAcupuncture,YueyangHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai200437China; 3ShanghaiResearchInstituteofAcupunctureandMeridian,ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai200030,China; 4ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai200437,China)

Objective:To explore the mechanism of herbs-partition moxibustion with the matching mu points in treating UC rats based on metabonomic with UPLC-Q/TOF MS. Methods:Sprague-Dawley rats of 27 cases were randomly divided into normal group, model group, herbs-partition moxibustion with the mactching mu points group. The UC rat model was established by drinking DSS aqueous solution. In herbs-partition moxibustion with the matching mu points group, each point moxibustion with 2 moxa cones, once per day, and lasting for 14 days. After moxibustion treatment, all groups urine was analyzed with UPLC-Q/TOF MS. The acquired data were analyzed using principal component analysis (PCA) and partial leastsquares discriminant analysis (PLS-DA).The potential biomarkers and metabolic pathways were analyzed by Metlin(http://metlin.scripps.edu/), KEGG(http://www.kegg.jp), HMDB (http://www.hmdb.ca), MetaboAnalyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca). Results:Under both positive ion model and negative ion model, the separation trends of 3 groups urine were good. Herbs-partition moxibustion with the matching mu points effectively reduced in 6 different metabolites expression, such as L-cysteine, atraric acid、tocopheronic acid, dibutyl malate、L-tyrosine、L-pipecolic acid, which increased in model group. All 6 different metabolites above were mainly related to amino acid metabolic pathways, such as phenylalanine, tyrosine and tryptophan biosynthesis, cysteine and methionine metabolism, tyrosine metabolism, and so on. Conclusion:The mechanism of herbs-partition moxibustion with the matching mu points in treating UC may mainly relate to amino acid metabolism.

Moxibustion; Metabonomic; UPLC-Q/TOF MS; Ulcerative colitis

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(“973”計(jì)劃)項(xiàng)目(編號(hào)：2009CB522900；2015CB554501)；國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(編號(hào)：81303033)；上海市科技啟明星計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：16QA1403400)

李璟，主任醫(yī)師，研究生導(dǎo)師，主要研究方向：針灸胃腸疾病的臨床與基礎(chǔ)研究；周次利，博士，副研究員，主要研究方向：針灸作用機(jī)制與臨床研究

R245.8

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.12.009