豬流行性腹瀉的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

梁喬

（遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110164）

豬流行性腹瀉的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

梁喬

（遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110164）

豬流行性腹瀉于2010年在中國暴發(fā)并流行至今，該病發(fā)生范圍廣、強(qiáng)度大、致死率高，且常與豬傳染性胃腸炎、豬輪狀病毒等傳染病混合感染，臨床診斷并不能對該病確。本文介紹了目前常用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，旨在對該病的防控提供一定的技術(shù)依據(jù)。

1 病原學(xué)檢測方法

1.1 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）

吳玉璐等針對PEDV的ORF3基因的缺失區(qū)設(shè)計(jì)引物，建立了可區(qū)分PEDV野毒株與疫苗株的RT-PCR診斷方法，其敏感性可達(dá)100TCⅠD50/0.1mL，該方法可通過電泳結(jié)果根據(jù)電泳條帶大小即可得出結(jié)論。

1.2 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）

湯小真等針對PEDV的NP基因保守區(qū)設(shè)計(jì)了1套LAMP擴(kuò)增引物，該方法可根據(jù)鈣黃綠素顯色肉眼可視化擴(kuò)增結(jié)果，可檢出的最低cDNAD的量是3.73Pg/μL，是RT-PCR方法檢出量的10倍，該方法無需昂貴的儀器設(shè)備，適合基層養(yǎng)殖場實(shí)驗(yàn)室使用。

1.3 熒光RT-PCR檢測方法

劉鄧等根據(jù)PEDV的N基因設(shè)計(jì)了引物和探針，建立了能夠快速檢測出PEDV含量的TaqMan熒光定量PCR方法，敏感性為1×101 copies/μL，特異性好與其他豬的病毒無交叉反應(yīng)。應(yīng)用該方法對60份臨床樣品進(jìn)行熒光RT-PCR和普通RT-PCR方法檢測，結(jié)果表明建立的熒光RT-PCR方法檢出率明顯高于普通RT-PCR方法。

2 血清學(xué)檢測方法

2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELⅠSA）

ELⅠSA方法是血清學(xué)檢測的經(jīng)典方法之一，目前針對PEDV國內(nèi)學(xué)者也進(jìn)行了大量的研究，建立了相關(guān)的ELⅠSA診斷方法。陳茹等使用聚乙二醇（PEG）沉淀法分離純化PEDV抗原，應(yīng)用該抗原包被，建立了Dot-ELⅠSA方法檢測PEDV抗體。研究結(jié)果表明該法檢測PEDV抗體敏感、特異、重復(fù)性好；姜艷平等以原核表達(dá)的重組N蛋白作為檢測抗原，經(jīng)過一系列條件的優(yōu)化，建立了PEDV間接ELⅠSA抗體檢測方法。李一經(jīng)等應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備的2株P(guān)EDV單克隆抗體，建立了檢測PEDV的雙抗體夾心ELⅠSA方法。

2.2 膠體金檢測技術(shù)

膠體金技術(shù)是近年來應(yīng)用較多的快速檢測技術(shù)，目前已有很多商品化的產(chǎn)品，該方法具備快捷、簡單、適用的優(yōu)點(diǎn)，特別適合在基層使用。張利勃等將體外表達(dá)的PEDV的M蛋白抗原和自制的抗SPA多抗血清包被NC膜，分別作為檢測線和質(zhì)控線，成功制備了可檢測PEDV血清抗體的快速診斷試紙條。研究表明該檢測試紙條與ELⅠSA敏感性相近，檢測了75份臨床樣本陽性樣品符合率達(dá)96%。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．04.004