公牛精液品質(zhì)的檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)

雪雅妮

(青海省海西州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海 海西 817099)

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公牛精液品質(zhì)的檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)

雪雅妮

(青海省海西州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海 海西 817099)

摘要：精子是具有活動(dòng)能力含有遺傳物質(zhì)的雄性配子。牛精液檢驗(yàn)的內(nèi)容一般包括：精液量、精子初級(jí)活動(dòng)性檢驗(yàn)、精子直線(xiàn)活動(dòng)性、精子形態(tài)學(xué)、其他細(xì)胞觀察、精子濃度和總體評(píng)價(jià)等。上述前三項(xiàng)檢驗(yàn)通常在牧場(chǎng)進(jìn)行，精液涂片也在牧場(chǎng)制作，但不是必要的檢驗(yàn)項(xiàng)目。樣品和涂片帶回實(shí)驗(yàn)室做其他檢驗(yàn)及總體評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：公牛；精液；品質(zhì)；檢驗(yàn)；評(píng)價(jià)

1精子初級(jí)活動(dòng)性檢驗(yàn)

精液量常用量筒測(cè)量。采精后盡快將一小滴精液滴在溫?zé)岬妮d片上(35～37℃溫?zé)犸@微鏡臺(tái))，100倍下鏡檢，0～5級(jí)記分。0表示完全停止活動(dòng)，5表示活動(dòng)很好。公牛精子初級(jí)活動(dòng)性的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)是波動(dòng)性移動(dòng)，代表精子濃度、活動(dòng)精子比例及其活動(dòng)性。如果正確使用該方法，其結(jié)果與公牛生育力有很大的相關(guān)性。任何公牛如果連續(xù)出現(xiàn)精子評(píng)分在2以下則為可疑。

2精子直線(xiàn)活動(dòng)性檢驗(yàn)

精子直線(xiàn)活動(dòng)性檢驗(yàn)即精子直接向前運(yùn)動(dòng)的百分比。最好把精液稀釋后檢驗(yàn)(大約1∶50，視濃度而定)，稀釋液為預(yù)熱的37℃生理鹽水，在溫?zé)岬妮d片上加蓋片400倍下鏡檢。大于50%的比例是很好的，高百分比直線(xiàn)活動(dòng)性一般意味著精子的快速直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)。400倍下鏡檢也可以做一些初步的精子形態(tài)學(xué)和精液中特殊細(xì)胞的觀察。

3精子形態(tài)學(xué)觀察

一般家畜精子長(zhǎng)50～70μm，尾部約占全長(zhǎng)的80%。荷斯坦牛的精子頭部長(zhǎng)約9.5μm、中段長(zhǎng)約14.1μm，主段長(zhǎng)約47.5μm，終段長(zhǎng)2～3μm[1]。精子形態(tài)學(xué)與睪丸的功能密切相關(guān)。精子的頭部、中部和尾部形態(tài)均需要觀察。全面的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)包括1000倍下的精子及其他細(xì)胞的觀察，記錄任何異常形態(tài)及100個(gè)精子中異常精子的個(gè)數(shù)。盡管在牧場(chǎng)400倍下的初步觀察可以幫助做出預(yù)后以及判斷涂片是否做好，但詳細(xì)的觀察應(yīng)在遠(yuǎn)離牧場(chǎng)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。建議至少使用兩種不同的染色法，一種是稀釋精液的涂片，一種是直接涂片，固定后染色，具體方法如下。①苯胺黑-伊紅染色。采集的新鮮精液需與預(yù)熱的染液在小試管中混合，以大約1∶10的比例，35～37℃放置1min，然后取一小滴在預(yù)熱的載片上涂一薄層(就像做血涂片一樣)，在溫?zé)崤囵B(yǎng)箱或顯微鏡臺(tái)干燥，如此時(shí)冷卻會(huì)對(duì)精子的形態(tài)產(chǎn)生影響。涂片染色也可以觀察活、死精子比率，因?yàn)橐良t是一種活體染色劑，把死精子(不活動(dòng)的精子)染成粉紅色，而活精子不著色成蒼白或白色。活精子百分比和直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)精子百分比與生育力都密切相關(guān)。②姬姆薩染色及亞甲藍(lán)染色。至少制備3張精液直接涂片(方法同前)，自然干燥，這些可以在牧場(chǎng)完成?；氐綄?shí)驗(yàn)室后，涂片分別用10%緩沖鹽溶液和甲醇微熱固定，前2張涂片用10%姬姆薩緩沖液染色約3h后水洗，一般用自來(lái)水。這種染色法突出頂體，尤其可以鑒別頂體部分的異常。用兩種不同的固定法對(duì)形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)有獨(dú)特的價(jià)值。熱固定涂片用于亞甲藍(lán)染色。比較精液直接涂片和精液染色液混合涂片也可查明由于稀釋精液操作不當(dāng)對(duì)精子形態(tài)學(xué)的影響?？傮w上，至少需要70%的正常精子，但是影響精液生育力的活精子的具體比例與異常精子的類(lèi)型及程度有關(guān)。

4其他細(xì)胞檢驗(yàn)

正常情況下，精液中有許多其他細(xì)胞，在直接涂片姬姆薩染色及(或)直接涂片亞甲藍(lán)染色進(jìn)行觀察。大多數(shù)細(xì)胞來(lái)自于包皮或尿道上皮，這些細(xì)胞對(duì)精子沒(méi)有多大影響。可是如出現(xiàn)大量白細(xì)胞、退化的精子細(xì)胞、多核巨細(xì)胞及所謂的“圓細(xì)胞”可能提示精子發(fā)生障礙。

5精液濃度檢驗(yàn)

精子外觀為濃奶油狀，密度約3×109/mL；奶油狀，精子密度約2×109/mL；精子外觀為牛奶狀，密度約(0.5～1)×109/mL；精子外觀為水狀，密度約0.25×109/mL[2]。準(zhǔn)確的測(cè)算需用標(biāo)準(zhǔn)濁度儀或白細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。

6全面判定

有證據(jù)表明，通過(guò)假陰道采精和人工授精操作，精子活動(dòng)性和死精子百分比與生育力有關(guān)。在北美，動(dòng)物遺傳育種穩(wěn)定性評(píng)價(jià)系統(tǒng)的新學(xué)派根據(jù)電子射精器采精進(jìn)行檢驗(yàn)，其方法可能不適合假陰道采精樣品。該學(xué)派建議，好的精液樣品的“總活動(dòng)性”至少應(yīng)為“中”，“個(gè)體直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)性”至少為30%，形態(tài)學(xué)觀察正常精子至少為70%。這里的“總活動(dòng)性”與初級(jí)活動(dòng)性相同，“個(gè)體直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)性”與直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)性相同。一般認(rèn)為，初級(jí)運(yùn)動(dòng)性、直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)性、死精子百分比、正常形態(tài)精子百分比與公牛生育力相關(guān)性最好。公牛鮮精評(píng)價(jià)最小參考值及范圍：?jiǎn)未尾杉毫繛?(2～12)mL，外觀為白色或淡黃色，密度為1.0(0.3～2.5)×109/mL，初級(jí)運(yùn)動(dòng)性(0～5)≥2，直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)性>50%，總死精子數(shù)<50%，總形態(tài)異常精子<30%。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張金松，關(guān)龍，史建民，等.牛精子形態(tài)分析與評(píng)價(jià)[J].中國(guó)奶牛，2013(6):60-61.

[2] A.H.Andrews.R.W.Blowey，H.Boyd.R.G.Eddy等主編，韓博，蘇敬良，吳培福，等主譯.牛病學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2006：8.

收稿日期:2016-01-25

作者簡(jiǎn)介：雪雅妮(1985-)，女，青海德令哈人，大專(zhuān)，助理畜牧師，研究方向?yàn)槠贩N選育，畜禽品種改良技術(shù)，動(dòng)物纖維物理性能的分析工作。

中圖分類(lèi)號(hào)：S823.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：2095-9737(2016)06-0079-01