黃牛精液冷凍技術(shù)探討

趙爾軍，金　剛（.甘肅省肅北縣畜牧獸醫(yī)局，甘肅 肅北 736300；.甘肅省肅北縣鹽池灣鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，甘肅 肅北 736300）

黃牛精液冷凍技術(shù)探討

趙爾軍1，金剛2
（1.甘肅省肅北縣畜牧獸醫(yī)局，甘肅 肅北 736300；2.甘肅省肅北縣鹽池灣鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，甘肅 肅北 736300）

甘肅省黃牛地方品種優(yōu)良，黃牛養(yǎng)殖業(yè)已經(jīng)成為農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的主要來(lái)源。為了促進(jìn)養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展，人工授精技術(shù)已經(jīng)普遍推廣，尤其是冷凍精液的保存技術(shù)的成功研制及推廣，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)有非常重要的意義。本文詳細(xì)闡述了牛精液的冷凍技術(shù)，和同行們共同探討，共同提高。

冷凍精液；意義；原理；保護(hù)劑；冷凍技術(shù)

甘肅省黃牛地方品種優(yōu)良，發(fā)展前景看好，養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展迅速。為了促進(jìn)黃牛養(yǎng)殖的發(fā)展，黃牛的人工授精技術(shù)早在20世紀(jì)70年代左右逐漸普及推廣，尤其是精液冷凍技術(shù)的成功研制，使得精液能夠長(zhǎng)期保存，對(duì)促進(jìn)甘肅省養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展起了很大的作用。

1　黃牛冷凍精液的意義

用黃牛冷凍精液進(jìn)行品種改良，可以最大限度的發(fā)揮種公牛的種用價(jià)值，冷凍精液可以長(zhǎng)期保存，這樣1頭良種公牛的精液就可以用于1萬(wàn)頭以上的母牛配種；縮短品種改良的時(shí)間；冷凍精液不受時(shí)間、地域的限制，可以大范圍的利用良種種公牛，同時(shí)種公牛的飼養(yǎng)數(shù)量可以減少，飼養(yǎng)成本降低了。

2　精液冷凍保存的原理

精液的冷凍就是就是將精液經(jīng)過(guò)特殊處理，能夠達(dá)到長(zhǎng)期保存的目的。生產(chǎn)中常用液氮（-196℃）、干冰（-79℃）為冷源，在超低溫下保存經(jīng)過(guò)處理的精液，此時(shí)精子的生理代謝活動(dòng)受到抑制，升溫后精子的活力又可以恢復(fù)，這樣就達(dá)到了長(zhǎng)期保存利用的目的。

3　精液冷凍保護(hù)劑

生產(chǎn)中最常用的冷凍精液保護(hù)劑就是甘油，甘油可以保護(hù)精子，提高精子的存活力和活動(dòng)力，但是也會(huì)對(duì)精子有一定的損傷，新型的保護(hù)劑的開(kāi)發(fā)一直是研究的重要課題。冷凍稀釋液是精子的載體，要為精子提供代謝物質(zhì)，調(diào)節(jié)精子的受精能力，其成份對(duì)精子有很大的影響。例如，牛冷凍精液稀釋液中添加VB12可以顯著提高精子活力、頂體完整率和質(zhì)膜完整率；添加某些氨基酸如添加半胱氨酸和谷胱甘肽可以降低在冷凍過(guò)程對(duì)精子的DNA產(chǎn)生損害。

4　冷凍保存技術(shù)

4.1采精及精液品質(zhì)檢查精液的品質(zhì)直接關(guān)系著精液冷凍效果，做好采精的準(zhǔn)備工作并規(guī)范采精操作技術(shù)，才可以獲得高質(zhì)量的精液。采集精液以后，要對(duì)精液的品質(zhì)進(jìn)行鑒定，不合格的產(chǎn)品要廢棄。牛精液的精子活率要不低于0.7，并保存在30℃的水浴中。

4.2精液稀釋選擇合適的稀釋液，按照科學(xué)的稀釋方法，規(guī)范操作程序來(lái)對(duì)精液進(jìn)行稀釋。稀釋以后取樣，在38～40℃的條件下進(jìn)行鏡檢，稀釋后的精液活率要不低于原精液的活率。

4.3降溫和平衡降溫就是在精液稀釋以后，用12～16層的紗布包裹，放到0～5℃的冰箱內(nèi)經(jīng)過(guò)1～2h的時(shí)間將精液緩慢降溫的過(guò)程。平衡就是將降溫后的精液放在冰壺內(nèi)，放入0～5℃的冰箱內(nèi)平衡2～4h，以便精液的保護(hù)劑充分的進(jìn)入精子的內(nèi)部，發(fā)揮保護(hù)精子的質(zhì)量的作用。在操作過(guò)程中要注意降溫、平衡過(guò)程中要避光操作，已經(jīng)降溫、平衡后的精液溫度不能在回升了。

4.4精液的分裝目前常用的分裝設(shè)備為細(xì)管精液分裝一體機(jī)，這是一套灌裝、封口、噴墨印字的一條龍式作業(yè)的一體化設(shè)備，這種設(shè)備的自動(dòng)化程度高，可以確保精液不被外界污染。如果單獨(dú)使用細(xì)管分裝機(jī)操作，要在分裝前做好細(xì)管上的標(biāo)記，如種公牛的詳細(xì)信息，自己要清楚，信息要準(zhǔn)確、全面。

4.5冷凍（1）冷凍溫度冷凍溫度是影響牛精液品質(zhì)的關(guān)鍵因素，精液冷凍剛開(kāi)始的溫度一般為－120～－140℃之間，盡量在8min內(nèi)達(dá)到和維持這個(gè)溫度區(qū)域后，繼續(xù)降溫倒入液氮。生產(chǎn)中由于冷凍精液的數(shù)量不同，有時(shí)溫度稍有回升，同時(shí)由于采精的季節(jié)、稀釋液的成分、甘油的濃度、冷凍劑型的不同，降溫的速度和時(shí)間也會(huì)稍有差異。

（2）冷凍方法目前我國(guó)對(duì)牛精液的冷凍方法根據(jù)設(shè)備的不同可以分為兩種：精液自動(dòng)冷凍儀法和簡(jiǎn)易細(xì)管精液冷凍箱法。精液自動(dòng)冷凍儀法是一種科技含量比較高的方法，冷凍儀是由計(jì)算機(jī)控制的全自動(dòng)冷凍容器，人工做好各種準(zhǔn)備工作，設(shè)定好參數(shù)，啟動(dòng)程序，有計(jì)算機(jī)控制來(lái)完成精液的冷凍過(guò)程。簡(jiǎn)易細(xì)管精液冷凍箱法是生產(chǎn)中常用的方法，投資少，操作簡(jiǎn)單。首先要有一個(gè)隔熱性能較好的、深度在50cm以上的冷凍箱，使用前先加入液氮制冷，根據(jù)冷凍細(xì)管精液量的多少確定液氮的使用量。然后把冷凍細(xì)管精液放在冷凍架上，迅速放入冷凍箱中進(jìn)行冷凍，整個(gè)的冷凍過(guò)程一般為8min以內(nèi)。

4.6牛冷凍精液保存牛的冷凍精液保存在液氮罐中，液氮罐要放在干燥、通風(fēng)的室內(nèi)，底部要墊上木板或者毛氈，以防潮濕。儲(chǔ)存精液后，要熟知罐的空重和液氮的多少，及時(shí)測(cè)量，及時(shí)補(bǔ)充，盡量減少開(kāi)罐的次數(shù)，開(kāi)罐后及時(shí)蓋好。取放精液的時(shí)候，速度要快，不要把盛凍精的提桶提到罐口之外，只能到頸基部，開(kāi)罐時(shí)間控制在5s以內(nèi)為好。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.056