豬偽狂犬病診斷技術(shù)研究進(jìn)展

鄧建新，蘇仕軍，韋方劍（江蘇省連云港市贛榆區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 連云港 222100）

豬偽狂犬病診斷技術(shù)研究進(jìn)展

鄧建新，蘇仕軍，韋方劍
（江蘇省連云港市贛榆區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 連云港 222100）

本文主要通過對豬偽狂犬病的綜述，概述了目前對偽狂犬病的診斷技術(shù)，通過對臨床診斷方法、病原學(xué)診斷方法、免疫學(xué)診斷方法及分子生物學(xué)診斷方法等方法的具體分析，探討目前豬偽狂犬病診斷技術(shù)的研究進(jìn)展。

豬偽狂犬??；診斷技術(shù)；研究進(jìn)展

中國是養(yǎng)豬大國，養(yǎng)豬數(shù)量位居世界前列。豬肉是國人餐桌上最主流的肉食品，養(yǎng)豬又是廣大農(nóng)牧民脫貧致富的主要途徑。由于養(yǎng)殖技術(shù)問題以及對環(huán)境的影響等問題，豬的發(fā)病率在一定程度上制約了我國養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。其中，豬偽狂犬病便是影響?zhàn)B殖戶收益的主要疾病之一，因此，了解豬偽狂犬病的傳染狀況和診斷方法對我國防控豬偽狂犬病和增加養(yǎng)殖戶收益有十分重要的意義。

1　豬偽狂犬病

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR），又稱Aujeszky氏病，是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。18世紀(jì)偽狂犬病毒第一次出現(xiàn)在人們的視野中，我國1947年劉永純首次從豬體分離到PRV，20世紀(jì)60年代，偽狂犬病病毒已席卷了全球近60多個國家以及地區(qū)。該病多種家畜和野生動物都可以感染，以豬感染最為普遍，損失也最嚴(yán)重。

偽狂犬病病毒是皰疹病毒科中抵抗力較強(qiáng)的一種。在8℃可存活46d，在25℃干草、樹枝、食物上可存活10～30d，但短期保存病毒時，4℃較-15℃和-20℃凍結(jié)保存更好。病毒在pH4～9之間保持穩(wěn)定。5%石炭酸2min滅活，但0.5%石炭酸處理32d后仍具有感染性。0.5%～1%氫氧化鈉迅速使其滅活。對乙醚、氯仿等脂溶劑以及福爾馬林和紫外線照射敏感。

PRV屬于皰疹病毒科甲型皰疹病毒亞科，潛伏周期較長，豬感染后，則會出現(xiàn)繁殖障礙、腦脊髓炎等典型的臨床癥狀，且病死率可達(dá)100%。由于豬偽狂犬病的臨床癥狀很復(fù)雜雜，比較容易誤診，因此給養(yǎng)殖戶帶來的損失也較大。另外，由于豬偽狂犬病的發(fā)生會使豬肉質(zhì)量下降，從而對人們的生活造成影響。所以加強(qiáng)對豬偽狂犬病的診斷和防控技術(shù)的研究，對養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展十分重要。

2　豬偽狂犬病的診斷技術(shù)

提高豬偽狂犬病的診斷技術(shù)以及診斷準(zhǔn)確率是養(yǎng)豬業(yè)防控豬偽狂犬病的先決條件，只有早發(fā)現(xiàn)和早防控才能更加有效地避免養(yǎng)豬業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前有關(guān)豬偽狂犬病的診斷技術(shù)主要有以下幾個方面。

2.1臨床診斷

臨床診斷就是根據(jù)典型的臨床癥狀、流行病學(xué)特點(diǎn)、病理剖檢、發(fā)病史等信息判斷豬只是否患有豬偽狂犬病的過程。不同生長時期、不同性別的豬只患病后的臨床癥狀不同。孕期母豬患病后會出現(xiàn)流產(chǎn)甚至是產(chǎn)死胎的現(xiàn)象；仔豬感染后則會出現(xiàn)發(fā)熱、嘔吐、厭食、呼吸困難等臨床癥狀，其中2～3周的仔豬的死亡率高達(dá)100%；公豬感染會出現(xiàn)繁殖力下降等癥狀。隱性感染的公豬沒有明顯的臨床癥狀，需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷確診，以便及時隔離已感染豬只，控制感染的蔓延。

2.2病原學(xué)診斷

病原學(xué)診斷包括病毒分離與鑒定和動物實(shí)回歸驗(yàn)。病毒分離與鑒定就是采集病樣的腦、扁桃體、腎和脾等組織剪碎后研磨，經(jīng)滅菌處理且加有抗生素的平衡鹽溶液或生理鹽水稀釋后接種在培養(yǎng)成單層的適宜細(xì)胞上，觀察直至出現(xiàn)特征性細(xì)胞病變。一般情況下，2～5d即可分離到病毒。有病變的細(xì)胞用H.E染色，鏡檢可觀察到嗜酸性核內(nèi)包涵體，也可進(jìn)一步以電鏡等方法鑒定。動物回歸實(shí)驗(yàn)就是把從豬的部分組織上分離出的病毒接種到實(shí)驗(yàn)鼠身上，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)鼠在經(jīng)過超過十代的繁殖后，所有的鼠類均出現(xiàn)了典型病毒，并可以在醫(yī)學(xué)電鏡下觀察到明顯的偽狂犬病病毒的存在。

2.3分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)診斷技術(shù)是近些年發(fā)展起來的，主要是根據(jù)病毒的特異性進(jìn)行診斷，目前基本所有的流行性傳染病都可以利用分子生物學(xué)診斷技術(shù)進(jìn)行診斷。當(dāng)偽狂犬病毒處于隱性狀態(tài)時，僅靠臨床診斷方法是無法準(zhǔn)確判別的，此時分子生物學(xué)診斷技術(shù)便可以根據(jù)偽狂犬病病毒的敏感性以及特異性進(jìn)行最為細(xì)致的判別，從而可以將病豬及時的隔離，保障養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益。

目前所采用的分子生物學(xué)診斷技術(shù)主要包括核酸探針技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）、基因芯片技術(shù)以及環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)，其中核酸探針技術(shù)主要是依靠DNA雜交，從而檢測病毒的存在；而聚合酶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)適合PRV臨床診斷以及流行病學(xué)調(diào)查且檢查速度較快。PCR技術(shù)又包括常規(guī)PCR、鑒別PCR和定量PCR?；蛐酒夹g(shù)是基于PCR技術(shù)的多核酸雜交的原理，從而進(jìn)行基因檢測，判斷病毒的存在；環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)利用DNA擴(kuò)增技術(shù)可快速檢測偽狂犬病病毒的存在。

2.4免疫學(xué)診斷

免疫學(xué)診斷是指采用血清學(xué)反應(yīng)的方法，對某些疾病進(jìn)行的診斷。主要是利用抗原抗體特異性結(jié)合的性質(zhì)，用已知的抗原測定患者血清中的未知抗體，來診斷患者是否患某種傳染病，也可用已知的抗體測定患者血清中是否含有相應(yīng)的抗原，來診斷疾病。檢測豬偽狂犬病病毒的方法有免疫熒光技術(shù)（FA）、反向間接血凝（抑制）試驗(yàn)（RPHA/RPHI）、單抗夾心ELISA、雙抗夾心ELISA；檢測豬偽狂犬病病毒抗體的方法有血凝和血凝抑制試驗(yàn)（HA-HI）、微量血清中和試驗(yàn)（MSN）、免疫電泳技術(shù)（IE）、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）、間接ELISA、競爭ELISA。中和試驗(yàn)主要是診斷隱性感染，檢測的特異性比較高、反應(yīng)靈敏，但可操作性低；凝集性試驗(yàn)主要通過利用抗原的特異性來檢測偽狂犬病病毒的存在，其中常用的輔助品為瓊脂、乳膠以及血凝劑來檢測抗原的存在；而標(biāo)記抗體技術(shù)主要通過標(biāo)記抗體，從而觀測病原體的存在，其中利用熒光進(jìn)行標(biāo)記以及酶的特異性來觀測抗體；利用血清診斷技術(shù)的準(zhǔn)確度相對較高。

3　豬偽狂犬病診斷技術(shù)的研究進(jìn)展以及前景展望

除了上述已相對成熟的診斷技術(shù)外，還有鑒別技術(shù)以及電子顯微鏡技術(shù)等診斷技術(shù)，目前在各國使用最為廣泛的是膠體金免疫層析技術(shù)，由于其檢測時間短、檢測結(jié)果準(zhǔn)確率高，從而被獸醫(yī)所青睞。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.005

江蘇省三新工程SXGC（2015）136

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