肝癌患者術(shù)前血清胸苷激酶1表達(dá)水平及其臨床意義▲

唐艷萍 謝雨萱 蔡政民 蘇程琳 譚曉玉 張力圖 利基林

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究部，南寧市 530021，E-mail：tangyanping1986@126.com)

論著·臨床研究

肝癌患者術(shù)前血清胸苷激酶1表達(dá)水平及其臨床意義▲

唐艷萍 謝雨萱 蔡政民 蘇程琳 譚曉玉 張力圖 利基林

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究部，南寧市 530021，E-mail：tangyanping1986@126.com)

目的 探討肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)前血清胸苷激酶1(TK1)表達(dá)水平及其臨床意義。方法 采用免疫印跡增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測125例肝細(xì)胞肝癌患者(肝癌組)、30例肝臟良性病變患者(肝臟良性病變組)和40例健康體檢者(健康對照組)血清TK1水平。分析肝癌組患者TK1水平與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 肝癌組血清TK1水平和陽性表達(dá)率均明顯高于肝臟良性病變組和健康對照組(P<0.05)，而肝臟良性病變組與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。巴塞羅那臨床肝癌分期為(B+C)期肝癌患者血清TK1水平高于(0+A)期肝癌患者(P<0.05)。結(jié)論 檢測血清TK1對肝癌的診斷具有一定的臨床參考價值。

肝細(xì)胞肝癌；血清胸苷激酶1

肝細(xì)胞肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一。大部分患者就診時病情已屬中晚期，失去了最佳治療時機(jī)，早期明確診斷及正確治療是影響預(yù)后的關(guān)鍵，因此，尋找對肝癌早期診斷有輔助作用的血清腫瘤標(biāo)志物具有重要的意義。胸苷激酶1(thymidine kinase 1，TK1)是一種與細(xì)胞DNA合成和增殖密切相關(guān)的激酶，其表達(dá)水平與DNA合成呈正相關(guān)。檢測血清中TK1含量的變化反映患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的增殖速度，可作為腫瘤細(xì)胞增殖水平的監(jiān)控指標(biāo)，也有助于臨床評估腫瘤的增殖度惡性程度[1]。本研究應(yīng)用免疫印跡增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測125例初治原發(fā)性肝癌患者術(shù)前的血清TK1水平，并與肝臟良性疾病患者和健康體檢者的血清TK1水平進(jìn)行比較，以探討血清TK1在診斷肝癌中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年1月至2015年5月于廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院住院治療的肝細(xì)胞肝癌患者125例(肝癌組)，其中男性107例、女性18例，年齡23～79歲，中位年齡50歲。全部病例均經(jīng)肝穿刺活檢或術(shù)后病理確診，能夠進(jìn)行病理分級且無異議，且臨床病史資料完整。另選取肝臟良性疾病患者30例(肝臟良性病變組)，其中男性18例、女性12例，年齡27～85歲，中位年齡56歲，肝血管瘤11例，肝囊腫12例、肝腺瘤3例和肝硬化4例，均經(jīng)胸腹部CT、磁共振等輔助檢查排除腫瘤。選取健康體檢者40例作為健康對照組，其中男性27例、女性13例，年齡24～70歲，中位年齡48歲，均無心、胃、肺的不良疾病，同時受試者均無肝部疾病史，且排除貧血、女性月經(jīng)期等處于細(xì)胞增殖狀態(tài)。3組性別構(gòu)成、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 主要試劑及儀器 TK1檢測試劑盒(生產(chǎn)批號：NT3160105A)和CIS系列化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀均由深圳市華瑞同康生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 檢測方法 采用免疫印跡增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測血清TK1值。所有受試者均于清晨空腹采集靜脈血2 ml，血標(biāo)本置于真空采血管中，室溫下靜置1 h；4 000 r/min常溫離心10 min，分離血清，貯存于-20℃?zhèn)溆?。檢測模板加標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣品，室溫晾干20～30 min；稀釋液振搖洗膜2次，5 min/次；加入一抗，室溫振搖反應(yīng)2 h；漂洗后加二抗室溫反應(yīng)40 min；洗滌，加入鏈酶親核素一酶復(fù)合物，室溫反應(yīng)1 h；洗滌，加入 電化學(xué)發(fā)光發(fā)光劑過膜浸濕1 min，上機(jī)檢測。TK1>2 pmol/L即為TK1陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料呈非正態(tài)分布，采用中位數(shù)表示，比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 肝癌組、肝臟良性病變組與健康對照組血清TK1表達(dá)水平的比較 肝癌組TK1水平和陽性表達(dá)率均高于肝臟良性病變組與健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肝臟良性病變組與健康對照組TK1水平和陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組血清TK1表達(dá)水平的比較

注：與肝癌組比較，*P<0.05。

2.2 血清TK1水平與肝癌臨床病理特征之間的關(guān)系 根據(jù)性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤數(shù)目、HBsAg、 甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)、有無包膜、有無癌栓、有無肝硬化、組織分化程度及巴塞羅那臨床肝癌(Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC)分期等分組比較，結(jié)果顯示，BCLC分期(B+C)期肝癌患者血清TK1水平高于(0+A)期肝癌患者(P<0.05)，但不同性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、AFP水平、HBsAg水平以及有無癌栓、肝硬化及組織分化者的TK1濃度比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同肝癌臨床病理特征 患者的血清TK1水平比較[中位數(shù)(最小值，最大值)]

3 討 論

TK1與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，其存在于細(xì)胞質(zhì)中，是DNA合成過程中嘧啶補(bǔ)救途徑的限速酶，它在三磷酸腺苷和鎂離子參與的條件下，催化脫氧胸苷為脫氧胸苷一磷酸進(jìn)而形成DNA合成所必需的脫氧胸苷三磷酸[1]。正常細(xì)胞中TK1受細(xì)胞周期的調(diào)控，在G1晚期時開始升高，在DNA 合成期開始急劇升高直至S和S2交界處，從G2晚期開始細(xì)胞中的TK1急劇降解，直至降低到G1前期最低水平[2]。對于腫瘤患者而言，處于S期、G2期的細(xì)胞比例高，原來依賴于后期促進(jìn)復(fù)合物介導(dǎo)的泛素-蛋白酶體降解途徑等在內(nèi)的一系列細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制被打亂，使得TK1在腫瘤細(xì)胞的G1/S期交界處開始升高并持續(xù)至G2或M期。因此，健康人靜止細(xì)胞及血清中的TK1濃度極低，一旦細(xì)胞發(fā)生癌變，惡性腫瘤患者TK1的含量隨著細(xì)胞的急劇增殖而升高，超過正常水平的數(shù)倍[3]。血清中TK1的含量在一定程度上能反應(yīng)體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的增殖情況。

作為一種與腫瘤分裂增殖相關(guān)的重要新指標(biāo)，TK1已應(yīng)用于多種腫瘤的診斷，包括非小細(xì)胞肺癌[4]、胃癌[5]、乳腺癌[6]、膀胱癌[7]等。在本研究中，肝癌組患者TK1水平和陽性表達(dá)率均顯著高于肝良性疾病組和健康對照組(P<0.05)，這與肝癌患者腫瘤負(fù)荷較高、細(xì)胞增殖旺盛有關(guān)。此外，健康對照組、肝臟良性疾病組及肝癌組的TKl水平依次升高，推測可能與細(xì)胞增殖活性的逐步增強(qiáng)有關(guān)，但肝臟良性疾病組與健康對照組之間，TK1水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這提示血清TK1的檢測對肝癌的診斷具有潛在的應(yīng)用價值。

對于健康人和腫瘤患者血清中TK1水平不同的具體機(jī)制有幾種假說，其中最重要的一種假說是與細(xì)胞死亡相關(guān)：非惡性細(xì)胞在細(xì)胞周期中的G1/G0期死亡，此時細(xì)胞內(nèi)的 TK1濃度很低；而腫瘤細(xì)胞則在S/G2期死亡，此時細(xì)胞內(nèi)TK1濃度較高，在血清中也會產(chǎn)生更多的TK1，所以腫瘤患者STK1明顯高于健康人[8]。另一種推測是血清中可能存在另一個因素能夠影響 TK1的穩(wěn)定性，此因素在健康人和腫瘤患者中作用不同[9]。

值得注意的是，血清TK1水平升高并不完全意味著惡性腫瘤的潛在，TK1在健康人血清中同樣會有一定程度的升高，如獻(xiàn)血者和月經(jīng)期女性，由于骨髓應(yīng)激產(chǎn)生了新的血細(xì)胞也可導(dǎo)致TK1暫時性升高[10]。炎癥和感染也可使TK1水平一定程度地升高，這是由于炎癥激活了免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫功能細(xì)胞增殖強(qiáng)化，生長因子結(jié)合于細(xì)胞膜上特定的載體，啟動一系列事件并最終引起細(xì)胞增殖[11-12]。因此檢測血清TK1前應(yīng)排除炎癥、感染、近期出血、女性月經(jīng)期以及乳腺增生、前列腺增生等增殖性疾病情況下細(xì)胞生理或病理性增殖所導(dǎo)致血清TK1升高的情況。

目前國內(nèi)關(guān)于TK1與肝癌臨床病理特征相關(guān)性的研究報告不多。本研究結(jié)果顯示，與BCLC分期0～A期肝癌患者相比，B～C期肝癌患者TK1水平明顯升高(P<0.05)，提示BCLC分期較晚的肝癌患者，血清TK1水平較高，血清TK1水平可能與肝癌患者臨床分期有關(guān)。國內(nèi)有研究表明，血清TK1水平與非小細(xì)胞肺癌臨床分期相關(guān)[13]，與本研究結(jié)果類似。這可能是因?yàn)榉制谠酵淼幕颊咂潴w內(nèi)腫瘤負(fù)荷較高，增殖細(xì)胞較多，隨著腫瘤細(xì)胞不斷增生、壞死，釋放入血的TK1水平也隨之升高，這提示TK1水平在一定程度上能反映腫瘤發(fā)展過程。BCLC分期是唯一綜合考慮腫瘤情況、肝功能和患者體力的分期系統(tǒng)[14]，有利于判斷病情、選擇治療方案和評估預(yù)后。對初治肝癌患者檢測TK1，能反映腫瘤的分期信息，幫助臨床醫(yī)師掌握腫瘤的增殖程度，以及患者獲得更好的治療方法及評估肝癌患者的預(yù)后。另外，本研究結(jié)果顯示不同性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、AFP水平、HBsAg水平以及有無癌栓、肝硬化及組織分化者的TK1濃度比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示血清TK1水平與性別、年齡、腫瘤大小及腫瘤數(shù)目、AFP、HBsAg、癌栓、包膜、肝硬化及組織分化程度可能無關(guān)，說明TK1在一定程度上具有廣泛適用的特點(diǎn)。

與既往王強(qiáng)等[15]、秦繼寶等[16]報告的原發(fā)性肝癌患者血清TK1陽性表達(dá)率(分別為86.0%和82.1%)相比，本研究所得的陽性表達(dá)率(61.6%)較低，這可能與選擇的樣本標(biāo)準(zhǔn)、收集的臨床數(shù)據(jù)、地域性或者種族性等多因素有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步研究探討。

AFP 是目前公認(rèn)診斷原發(fā)性肝癌的首選血清腫瘤標(biāo)志物，但單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測的敏感性及特異性往往難以滿足臨床對肝癌診斷、鑒別診斷要求。TK1作為一種新的與腫瘤生長相關(guān)的血清學(xué)標(biāo)志物，在肝癌患者血清中高表達(dá)，對肝癌的診斷和分期評估具有一定的臨床應(yīng)用價值，故在實(shí)際工作中可將血清TK1檢測作為輔助診斷以提高肝癌的診治水平。

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Preoperative expression level of serum thymidine kinase 1 in hepatocellular carcinoma patients and its clinical significance

TANGYan-ping,XIEYu-xuan,CAIZheng-min,SUCheng-lin,TANXiao-yu,ZHANGLi-tu,LIJi-lin

(DepartmentofLaboratoryResearch,AffiliatedCancerHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To investigate the preoperative expression level of serum thymidine kinase 1(TK1) in patients with hepatocellular carcinoma(HCC) and its clinical significance.Methods The serum levels of TK1 of 125 patients with HCC(HCC group),30 patients with liver benign lesions(liver benign lesion group) and 40 normal individuals(health control group) were detected by enhanced Western blot-chemiluminescence assay.The relationship of TK1 level with clinicopathological features was analyzed in HCC group.Results The serum level and positive expression rate of TK1 in the HCC group were significantly higher than those in the liver benign lesion group and health control group(P<0.05),but no significant different was found between liver benign lesion group and health control group(P>0.05).The serum level of TK1 in HCC patients with Barcelona Clinic Liver Cancer stage(B+C) was higher than that in the patients with stage(0+A)(P<0.05).Conclusion The detection of serum TK1 has a certain clinical reference value in the diagnosis of HCC.

Hepatocellular carcinoma,Serum thymidine kinase 1

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃(桂科攻1298003-2-8)

唐艷萍(1986～)，女，碩士，助理研究員，研究方向：腫瘤分子生物學(xué)研究。

利基林(1965～)，男，碩士，副主任技師，研究方向：腫瘤分子診斷學(xué)研究，E-mail：455620024@qq.com。

R 735.7

A

0253-4304(2016)09-1219-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.09.08

2016-04-28

2016-06-26)