決明子水煎劑對(duì)大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)的影響

文│王琳 吳宗梅（安徽省鳳陽縣畜牧獸醫(yī)局）李升和（安徽科技學(xué)院）

決明子水煎劑對(duì)大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)的影響

文│王琳 吳宗梅（安徽省鳳陽縣畜牧獸醫(yī)局）李升和（安徽科技學(xué)院）

決明子（Semen Cassiae）為豆科植物決明的干燥成熟種子，亦稱草決明。決明子主要含有大黃素、大黃酸、決明子素等化學(xué)物質(zhì)，具有護(hù)肝、明目、降脂、降血壓、利尿、抗血小板聚集等作用，用于目赤色痛、羞明多淚。中醫(yī)認(rèn)為，決明子性寒，味甘、苦，歸肝、大腸經(jīng)，具“清肝明目，潤腸通便”等功效，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。決明子無毒性，無副作用，民間常用生決明子煎服，或置鍋中炒至微有香味，作為沖泡飲料服用或與其他藥配伍，而今，臨床主要應(yīng)用于降血壓、降血脂、保肝、導(dǎo)瀉、抗菌、抗血小板凝集等，其中對(duì)高血壓、高膽固醇、習(xí)慣性便秘等療效較好。近年來，國內(nèi)有學(xué)者對(duì)決明子保肝作用機(jī)制進(jìn)行研究，決明子乙醇提取物對(duì)D-氨基半乳糖所致大鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用。有研究表明，決明子對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠糖尿病腎病具有保護(hù)作用。

目前未見到有關(guān)決明子水煎劑對(duì)動(dòng)物視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)功能影響的報(bào)道，本研究以大鼠為研究對(duì)象，采用HE染色方法，觀察CCl4（四氯化碳）在致大鼠肝損傷的同時(shí)是否對(duì)視網(wǎng)膜具有損傷作用，同時(shí)觀察決明子水煎劑對(duì)大鼠視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)及其損傷是否具有保護(hù)作用，以期為決明子對(duì)眼病防治方面提供一定的形態(tài)學(xué)資料理論基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1.實(shí)驗(yàn)材料。

（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。48只清潔級(jí)SD大鼠，雌雄各半，購自南京市江寧區(qū)青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖場。

（2）實(shí)驗(yàn)飼料。“湯山龍泉牌”實(shí)驗(yàn)鼠顆粒飼料，購自南京市江寧區(qū)青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖場。飼料營養(yǎng)水平：水分≤10%，粗蛋白≥1 8%，粗脂肪≥4%，粗纖維≥5%，粗灰分≤8%，鈣1.0%～1.8%，磷0.6%～1.2%。

（3）實(shí)驗(yàn)藥品與試劑。決明子，購于鳳陽縣華佗大藥房；CCl4（天津市化學(xué)試劑廠）；蘇木精、伊紅、乙醇、二甲苯等均為（FMP）國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

（4）決明子水煎液的制備。取干燥決明子160克，加水浸泡半小時(shí)，再加水至2000毫升，移至電爐上開始煎煮至沸騰，邊攪拌邊煎煮大約半小時(shí)后過濾，再將濾渣加水1000毫升煎煮約1.5小時(shí)后過濾，如此反復(fù)一次，最后合并濾液并濃縮至2000毫升，制得每升含生藥80克的決明子水煎液。

（5）主要儀器設(shè)備。FRI-IS-25型全膜終端獨(dú)立通氣籠盒（IVC）；LDZX-50FBS型立式壓力蒸汽滅菌器；切片機(jī)；CH30型顯微顯微攝影系統(tǒng)。

2.實(shí)驗(yàn)方法。

（1）動(dòng)物分組及給藥方法。48只清潔級(jí)SD大鼠，體重180～240克（約60日齡），適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、決明子Ⅰ組和決明子Ⅱ組，未注射決明子Ⅰ組，未注射CCl4決明子Ⅱ組，每組8只且雌雄各半。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組自由飲用蒸餾水，決明子Ⅰ組、未注射CCl4決明子Ⅰ組和決明子Ⅱ組、未注射CCl4決明子Ⅱ組分別自由飲用濃度為40克/升和80克/升的決明子水煎液，連用2周。

（2）動(dòng)物飼養(yǎng)。大鼠飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)在安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房進(jìn)行，大鼠的飼養(yǎng)管理及飼養(yǎng)環(huán)境、用具和IVC的清洗、消毒、滅菌均嚴(yán)格按照IVC標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)范進(jìn)行。使用刨花作為大鼠墊料，墊料首先在陽光下曬干，然后紫外燈照射3～4小時(shí)，再裝入自制的布袋中121℃高溫蒸汽滅菌20分鐘，最后置入干燥箱內(nèi)60℃鼓風(fēng)干燥后備用。依據(jù)大鼠活動(dòng)規(guī)律及日需要飼料量定時(shí)加料，環(huán)境溫度24～28℃，濕度50%～65%，光照12小時(shí)。

（3）樣品采集與處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型對(duì)照組、決明子Ⅰ組和決明子Ⅱ組腹腔注射CCl4（2.0毫升/千克體重），正常對(duì)照組、未注射 CCl4決明子Ⅰ組，未注射CCl4決明子Ⅱ組腹腔注射等體積生理鹽水，24小時(shí)后逐只稱重，10%水合氯醛（300～400毫克/千克體重）腹腔麻醉，取大鼠眼球，取眼杯，并置于Bouin液中常溫固定24小時(shí)，梯度乙醇脫水，水楊酸甲酯透明，石蠟包埋，切片6微米，HE染色，中性樹膠封片，日本Olympus CH30-313型光學(xué)顯微攝影系統(tǒng)顯微觀察與攝影。

二、結(jié)果

顯微觀察可見，正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)完整，各層細(xì)胞界限清楚、結(jié)構(gòu)正常，視桿、視錐層細(xì)胞結(jié)構(gòu)明顯，外界膜清晰，外核層細(xì)胞排列緊密，數(shù)量適中，外網(wǎng)層結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)核層細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，數(shù)量適中，內(nèi)網(wǎng)層結(jié)構(gòu)緊密，節(jié)細(xì)胞大小適中，內(nèi)界膜與神經(jīng)纖維層界限較為明顯，內(nèi)界膜明顯，結(jié)構(gòu)完整（圖1、2）。

◎圖1 正常對(duì)照組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×400）

◎圖2 正常對(duì)照組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×1000）

模型對(duì)照組視網(wǎng)膜的視桿、視椎層細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)完整，外界膜明顯，外核層細(xì)胞空隙較大，數(shù)量較正常對(duì)照組減少，外網(wǎng)層損傷嚴(yán)重，幾乎消失，內(nèi)核層細(xì)胞較為正常，內(nèi)網(wǎng)層結(jié)構(gòu)稀疏，節(jié)細(xì)胞層的細(xì)胞破裂，大部分溶解，神經(jīng)纖維層破損、脫落，內(nèi)界膜損傷，脫離（圖3、4）。

◎圖3 模型對(duì)照組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×400）

決明子Ⅰ組視桿、視椎層細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為明顯，外界膜界限模糊，外核層細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，數(shù)量較正常對(duì)照組少，外網(wǎng)層結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)核層細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)完好，其細(xì)胞間隙較大，內(nèi)網(wǎng)層結(jié)構(gòu)較為豐富，內(nèi)界膜與神經(jīng)纖維層界限明顯，但其間有少量空隙，節(jié)細(xì)胞層的細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)完整（圖5、6）。

◎圖6 決明子Ⅰ組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×1000）

未注射CCl4決明子Ⅰ組視網(wǎng)膜視桿、視椎層細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)完好，外界膜清晰，外核層細(xì)胞緊密，數(shù)量適中，外網(wǎng)層結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)核層細(xì)胞緊密，內(nèi)網(wǎng)層結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)界膜與神經(jīng)纖維層界限明顯，節(jié)細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，有突起（圖7、8）。

◎圖7 未注射CCl4決明子Ⅰ組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×400）

◎圖8 未注射CCl4決明子Ⅰ組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×1000）

決明子Ⅱ組視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)較為完整，色素上皮層明顯，視桿視錐層明顯，外核層細(xì)胞排列較為緊密，有少量空隙，數(shù)量適中，外網(wǎng)層結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)核層細(xì)胞排列緊密，內(nèi)網(wǎng)層較稀疏，結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)界膜與神經(jīng)纖維層界限明顯，節(jié)細(xì)胞有少量突起（圖9、10）。

◎圖9 決明子Ⅱ組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×400）

◎圖10 決明子Ⅱ組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×1000）

未注射CCl4決明子Ⅱ組色素上皮層明顯，視桿視錐層結(jié)構(gòu)明顯，外界膜非常明顯，外核層細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，數(shù)量適中，外網(wǎng)層結(jié)構(gòu)完整、清晰，內(nèi)核層細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，數(shù)量適中，內(nèi)網(wǎng)層結(jié)構(gòu)正常，神經(jīng)纖維層與內(nèi)界膜層界限明顯，細(xì)胞有突起（圖11、12）。

◎圖11 未注射CCl4決明子Ⅱ組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×400）

◎圖12 未注射CCl4決明子Ⅱ組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)（×1000）

三、討論

1.決明子水煎劑對(duì)視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)與功能具有明顯的改善和促進(jìn)作用。研究表明，決明子味甘苦、涼，有清肝明目、潤腸通便之功。試驗(yàn)結(jié)果顯示，決明子含有決明子素、大黃酚等成分，能使睫狀肌中乳酸脫氫酶活性顯著提高，增加眼組織中三磷酸腺苷的含量，降低眼壓，防止眼結(jié)膜炎、青光眼等疾病，對(duì)視神經(jīng)有保護(hù)作用。視網(wǎng)膜由外向內(nèi)依次包括色素上皮層、視桿視錐層、外界膜、外核層、外網(wǎng)層、內(nèi)核層、內(nèi)網(wǎng)層、節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層和內(nèi)界膜層等10層結(jié)構(gòu)，其中神經(jīng)纖維層和節(jié)細(xì)胞層內(nèi)神經(jīng)元可能是其主要作用細(xì)胞。

本實(shí)驗(yàn)顯微觀察結(jié)果顯示，模型對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)病理變化明顯，視網(wǎng)膜外核層細(xì)胞數(shù)量較少，神經(jīng)纖維層與內(nèi)界膜界膜消失、節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞破裂、溶解；未注射CCl4決明子Ⅰ、Ⅱ組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)較正常對(duì)照組有不同程度改善，其中飲用80克/升決明子水煎劑的大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)改善效果最好。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn)表明，決明子水煎劑對(duì)大鼠視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)與功能有明顯改善作用，并以飲用高濃度（決明子濃度80克/升）決明子水煎劑的保護(hù)作用效果最好。

2.決明子水煎劑對(duì)四氯化碳所致的大鼠視網(wǎng)膜損傷具有保護(hù)作用。CCl4是一種常用的有機(jī)溶劑，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)及肝、腎等臟器都有毒性作用。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)照組大鼠視網(wǎng)膜病理組織學(xué)變化明顯，組織結(jié)構(gòu)損傷嚴(yán)重，視網(wǎng)膜外核層細(xì)胞數(shù)量較少，神經(jīng)纖維層與內(nèi)界膜消失、節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞破裂、溶解。表明CCl4對(duì)視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)有明顯的損傷作用，主要損傷視網(wǎng)膜的神經(jīng)纖維層與內(nèi)界膜層，內(nèi)外核層。

本研究決明子Ⅰ、Ⅱ組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)雖較模型對(duì)照組有較明顯改善，但較正常對(duì)照組和未注射CCl4決明子Ⅰ、Ⅱ組則可見不同程度病理組織學(xué)變化，表明飲用不同濃度決明子水煎劑對(duì)CCl4所致大鼠視網(wǎng)膜的損傷有較明顯的改善與保護(hù)作用，其中以飲用高劑量決明子水煎劑（80克/升）改善和保護(hù)作用效果最好。

綜上所述，決明子水煎劑對(duì)大鼠視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)與功能有明顯改善作用，對(duì)CCl4所致急性肝損傷大鼠視網(wǎng)膜的損傷有明顯改善和保護(hù)作用，并以飲用80克/升決明子水煎劑的改善和保護(hù)作用效果最好。

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