新疆紅棗黑斑病防治藥劑篩選

劉艷祥，郭慶元*，王登元，白劍宇(.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 83005； .阿克蘇地區(qū)農(nóng)技推廣中心，新疆 阿克蘇 843000)

新疆紅棗黑斑病防治藥劑篩選

劉艷祥1，郭慶元1*，王登元1，白劍宇2
(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052； 2.阿克蘇地區(qū)農(nóng)技推廣中心，新疆 阿克蘇 843000)

為了有效控制新疆紅棗黑斑病的發(fā)生及危害，采用抑菌圈比較、毒力測定及田間藥效試驗(yàn)相結(jié)合的方法對(duì)20種殺菌劑進(jìn)行篩選。通過抑菌圈比較發(fā)現(xiàn)，80%乙蒜素、50%氯溴異氰尿酸、40%多·福、40%氟硅唑、50%乙嘧酚、72%霜脲錳鋅、37%苯醚甲環(huán)唑和5%己唑醇8種殺菌劑抑菌力較強(qiáng)，抑菌半徑在1.83～3.80 cm。對(duì)其毒力測定結(jié)果表明，40%氟硅唑?qū)t棗黑斑病菌的毒力最大，EC50值(抑菌中質(zhì)量濃度)為35.89 mg/L；其次為5%己唑醇，EC50值為58.24 mg/L；其余6種藥劑EC50值為113.11～517.13 mg/L。選取抑菌效果好且穩(wěn)定的4種藥劑進(jìn)行田間防治試驗(yàn)，結(jié)果表明，80%乙蒜素最終防效最高(65.3%)，5%己唑醇次之(61.7%),其余2種藥劑(50%氯溴異氰尿酸、40%氟硅唑)的防效為52.7%～56.3%。綜上，80%乙蒜素和5%己唑醇防效最好，可作為當(dāng)前防治新疆紅棗黑斑病的主打藥劑。

紅棗； 黑斑病； 殺菌劑； 毒力測定； 防治效果

紅棗(ZiziphusjujubaMill.)是原產(chǎn)于我國的傳統(tǒng)名優(yōu)樹種，全國各地均有分布[1]。棗果具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值、營養(yǎng)價(jià)值及藥用價(jià)值，社會(huì)需求量不斷增加[2]。新疆南疆地區(qū)因光熱資源豐富，紅棗種植面積迅速增加。2014年新疆紅棗種植面積已達(dá)47.37萬hm2，占全國總面積近1/3，盛果期產(chǎn)量占到全國總產(chǎn)量的50%以上[3]。然而，隨著新疆棗樹栽培面積的擴(kuò)大及種植模式的轉(zhuǎn)變，一些病害相繼出現(xiàn)，危害面積也逐年擴(kuò)大。目前，新疆棗果實(shí)主要病害有縮果病、軟腐病、黑斑病、裂果病等，發(fā)生及危害程度尤以棗黑斑病為甚，病害的發(fā)生不僅導(dǎo)致紅棗產(chǎn)量下降，而且嚴(yán)重影響紅棗品質(zhì)，大大降低了新疆紅棗的商品價(jià)值和市場競爭力[4]。

新疆紅棗黑斑病情日趨嚴(yán)重，由2000年初病果率不足5%上升到目前的30%，嚴(yán)重的病果率達(dá)70%[5]。該病如不及時(shí)控制，新疆紅棗這一地方特產(chǎn)將在很大程度上受到影響。在棗黑斑病的相關(guān)報(bào)道中，病原至今未形成統(tǒng)一定論。季延平等[6]報(bào)道，棗果實(shí)黑斑病主要是由鏈格孢屬真菌(Alternariasp.)侵染引起；王軍等[7]報(bào)道，山東棗黑斑病的病原物為鏈格孢(Alternariaalternata)；吳玉柱等[8]、李夏鳴等[9]報(bào)道，棗黑斑病病原是細(xì)極鏈格孢(Alternariatenuissima)；而李曉軍等[10]則認(rèn)為，棗黑斑病由黃單胞桿菌屬(Xanthomonas)和假單胞桿菌屬 (Pseudomonas)2種細(xì)菌共同感染引起。由于在病原菌種類上的認(rèn)識(shí)不同，國內(nèi)開展防病試驗(yàn)的藥劑選擇側(cè)重點(diǎn)也不同。吳玉柱等[8]對(duì)山東沾化的冬棗在棗樹萌芽及坐果前期采用800倍50%撲海因和70%代森錳鋅混配液噴施，可以達(dá)到85%的防效。蔡龍[11]對(duì)新疆棗黑斑病進(jìn)行藥劑篩選，在市面上常見的藥劑中，43%戊唑醇5 000倍液和多抗霉素1 500倍液的防效較好。這些研究都是將細(xì)極鏈格孢視為棗黑斑病病原開展藥劑防治。李曉軍等[10]以黃單胞桿菌和假單胞桿菌2種細(xì)菌為研究對(duì)象，篩選出紅霉素和鏈霉素以及50%輪紋寧400～500倍液作為防治藥劑。對(duì)于棗黑斑病，在病原性質(zhì)及病原種類上還有爭議，新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室按照柯赫氏法則，經(jīng)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定，確定新疆紅棗黑斑病病原為鏈格孢，這與王軍等[7]的報(bào)道相一致。但以鏈格孢為病原，對(duì)棗黑斑病進(jìn)行藥劑篩選和病害防治的研究尚未見報(bào)道。為此，本研究采用抑菌圈試驗(yàn)、毒力測定及田間藥效試驗(yàn)相結(jié)合的方法，篩選能夠防治以鏈格孢為病原的新疆棗黑斑病的高效藥劑，為新疆紅棗生產(chǎn)上科學(xué)用藥提供參考。

1 材料和方法

1.1 供試菌株

自阿克蘇地區(qū)、和田地區(qū)采樣，經(jīng)新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室分離、鑒定后保存的棗黑斑病菌株AHB1308-5-1、HTHB1406-5-1和WSGB1308-16-2用于供試藥劑的抑菌圈試驗(yàn)和毒力測定。

1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PSA)：馬鈴薯 200 g、蔗糖 20 g、瓊脂 20 g、水1 000 mL，pH值7.2。

1.3 供試藥劑

通過查閱文獻(xiàn)，選擇主要針對(duì)真菌病害的各類藥劑20種作為供試藥劑，具體劑型、推薦使用劑量、有效成分及生產(chǎn)廠家見表1。

表1 供試藥劑名稱、推薦使用劑量及生產(chǎn)廠家

1.4 抑菌圈試驗(yàn)

將供試菌株在PSA平板培養(yǎng)基上活化，然后接種于PSA斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)72 h，在試管中加入3 mL無菌水，輕搖，制成菌懸液備用。通過無菌操作將PSA培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)皿中(直徑9 cm，每培養(yǎng)皿10 mL)制成平板培養(yǎng)基。吸取100 μL上述病原菌懸液加入每個(gè)培養(yǎng)皿中，用滅菌玻璃涂布器把所加菌液涂勻。待干燥后，在培養(yǎng)皿中央重疊放置2片已滅菌圓形濾紙片(直徑1 cm)。在濾紙片中央加50 μL藥液(推薦使用劑量的200倍濃縮液)，每個(gè)處理重復(fù)3次，以加入無菌水的處理作為對(duì)照(CK)，放入25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待對(duì)照處理菌落長滿培養(yǎng)皿后，采用十字交叉法測量各藥劑處理抑菌圈直徑，統(tǒng)計(jì)抑菌半徑，運(yùn)用SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。

1.5 藥劑毒力測定

采用菌絲生長速率法測定藥劑毒力[12]。將抑菌圈試驗(yàn)中抑菌效果較好的藥劑作為供試藥劑，參考農(nóng)藥推薦使用劑量及抑菌圈試驗(yàn)中的抑菌效果，對(duì)每種藥劑設(shè)置從高到低7個(gè)有效成分用量。將各不同用量藥劑與熔化并冷卻至45 ℃的PSA培養(yǎng)基按1∶9比例配制成含藥培養(yǎng)基，在超凈工作臺(tái)上分裝至培養(yǎng)皿中(直徑9 cm，每培養(yǎng)皿10 mL)。待培養(yǎng)基冷凝且表面干燥后，用直徑相同的打孔器打菌餅(直徑1 cm)，分別放置于每個(gè)處理培養(yǎng)基中間位置，菌絲面向下。每種藥劑每個(gè)劑量處理3個(gè)培養(yǎng)皿(3次重復(fù))，以不加農(nóng)藥處理作為對(duì)照(CK)，25 ℃恒溫培養(yǎng)72 h后，采用十字交叉法測量各重復(fù)菌落直徑，統(tǒng)計(jì)抑菌半徑以及對(duì)照菌落與每一處理菌落半徑的差值，據(jù)此計(jì)算各藥劑處理對(duì)各菌株的抑制率，根據(jù)抑制率保留5個(gè)適當(dāng)劑量。以藥劑質(zhì)量濃度(mg/L)的對(duì)數(shù)值為自變量，抑制率的概率值為因變量，運(yùn)用SPSS 20.0建立毒力回歸方程，求出各藥劑的抑菌中質(zhì)量濃度(EC50)，比較抑菌效果。

1.6 田間藥劑篩選

試驗(yàn)田位于新疆阿克蘇阿瓦提縣多浪鄉(xiāng)小拜什艾日克村，面積4 hm2左右，海拔1 077 m，80°29.45′E、40°31.41′N，棗樹品種為駿棗，樹齡8 a，平均冠幅2.4 m，棗樹株行距1.5 m×2 m。該田棗黑斑病發(fā)生較重，發(fā)病高峰期病果率在30%以上。

將通過抑菌圈試驗(yàn)和毒力測定篩選的藥劑作為田間藥效試驗(yàn)供試藥劑，按推薦劑量使用。在田間每種藥劑噴施50 m，隨機(jī)選擇連續(xù)3株為一個(gè)重復(fù)，每種藥劑設(shè)置3個(gè)重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列，每個(gè)處理共計(jì)9株，以清水處理作為對(duì)照，每種藥劑處理之間設(shè)置保護(hù)行。試驗(yàn)于2015年8月下旬(棗果上色期，發(fā)病前期)進(jìn)行第一次噴藥，選擇無雨、風(fēng)速小的天氣，用背負(fù)手動(dòng)噴霧器全株噴霧，確保上下均勻，噴藥量以葉面聚集成滴為宜，共施藥3次，每次間隔2周，且每次噴藥后2周調(diào)查病情。采用定株定數(shù)隨機(jī)抽樣調(diào)查法調(diào)查，記錄每株病果數(shù)以及病果病斑面積，統(tǒng)計(jì)各處理的病果率、病情指數(shù)以及各處理防治效果。棗黑斑病危害程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[13]見表2。

表2 棗黑斑病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果與分析

2.1 20種殺菌劑的抑菌力比較

殺菌劑對(duì)棗黑斑病菌3個(gè)菌株的抑菌圈大小比較表明(表3)：20種殺菌劑對(duì)紅棗黑斑病菌的抑菌力有顯著差異。在推薦使用劑量200倍濃縮液下， 80%乙蒜素和50%氯溴異氰尿酸的抑菌力較強(qiáng)，平均抑菌半徑均在2.50 cm以上，尤其80%乙蒜素，平均抑菌半徑達(dá)3.80 cm，接近培養(yǎng)皿半徑；其次為40%多·福、40%氟硅唑、50%乙嘧酚、72%霜脲錳鋅、37%苯醚甲環(huán)唑、5%己唑醇6種藥劑，平均抑菌半徑在1.83～2.26 cm；其余12種藥劑抑菌力較低，平均抑菌半徑均在1.80 cm以下。由此，篩選出80%乙蒜素、50%氯溴異氰尿酸、40%多·福、40%氟硅唑、50%乙嘧酚、72%霜脲錳鋅、37%苯醚甲環(huán)唑、5%己唑醇8種殺菌劑進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

表3 20種殺菌劑對(duì)紅棗黑斑病菌的抑菌半徑比較

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 分別為菌株AHB1308-5-1、HTHB1406-5-1、WSGB1308-16-2；同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同大、小寫字母分別表示差異在0.01、0.05水平極顯著、顯著。下同。

2.2 8種殺菌劑對(duì)紅棗黑斑病菌的毒力比較

通過比較藥劑對(duì)3個(gè)棗黑斑病菌株的EC50值(表4)發(fā)現(xiàn)：8種藥劑對(duì)黑斑病菌的毒力大小有顯著差異。其中，40%氟硅唑?qū)椇诎卟【亩玖ψ畲螅珽C50值為35.89 mg/L；其次為5%己唑醇，EC50值為58.24 mg/L；40%多·福的毒力最小，EC50值為517.13 mg/L。其余5種藥劑的毒力由大到小依次為50%氯溴異氰尿酸、50%乙嘧酚、80%乙蒜素、72%霜脲錳鋅、37%苯醚甲環(huán)唑，EC50值分別為113.11、220.04、226.20、398.11、489.78 mg/L。

表4 8種殺菌劑對(duì)紅棗黑斑病菌的毒力比較

續(xù)表4 8種殺菌劑對(duì)紅棗黑斑病菌的毒力比較

2.3 田間藥效試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 4種藥劑處理的病果率和病情指數(shù)比較 綜合抑菌圈試驗(yàn)與室內(nèi)毒力測定結(jié)果，80%乙蒜素、50%氯溴異氰尿酸、40%氟硅唑及5%己唑醇4種藥劑抑菌效果較好且穩(wěn)定，選其進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)。各藥劑處理在3次施藥后的病情動(dòng)態(tài)調(diào)查顯示(表5)，雖在有零星病果時(shí)期(病情忽略不計(jì))開始施藥，但平均病果率均呈現(xiàn)遞增趨勢，說明仍有新增病情，但與CK相比，各藥劑處理的新增病情明顯較小，說明各藥劑對(duì)棗黑斑病均有一定抑制作用。根據(jù)最終調(diào)查結(jié)果(表5)，CK平均病果率達(dá)到31.6%，各施藥處理平均病果率均小于CK；其中80%乙蒜素效果最好，平均病果率僅為16.0%，相比CK，病果率降低15.6個(gè)百分點(diǎn)；其次為5%己唑醇和50%氯溴異氰尿酸，其平均病果率均低于20%(分別為17.1%、19.5%)；40%氟硅唑效果最差，但仍優(yōu)于CK，病果率為21.3%。病情指數(shù)是反映病害發(fā)病率與嚴(yán)重度的綜合指標(biāo)[14]。由3次調(diào)查結(jié)果(表5)可見，隨著生長期的延長，病果病斑面積逐漸增大，則各處理病情指數(shù)也相應(yīng)增加。9月24日，新增病情指數(shù)、新增病果率總體大于9月10日和10月8日，說明此時(shí)為黑斑病發(fā)病盛期，之后病情發(fā)展減緩，至采收時(shí)達(dá)到峰值。最終調(diào)查結(jié)果顯示，各藥劑處理之間病情指數(shù)存在差異，依次為CK>40%氟硅唑>50%氯溴異氰尿酸>5%己唑醇>80%乙蒜素。

表5 紅棗黑斑病病情動(dòng)態(tài)

2.3.2 4種藥劑處理的防治效果比較 按病情指數(shù)統(tǒng)計(jì)的各處理防病效果表明：各藥劑處理在3次施藥后均有一定的防效，初始防效在60%以上，最終防效也在50%以上，但均不能完全控制病情的增加(圖1)。不同藥劑的防效有明顯差異，第3次施藥后2周，各藥劑防治效果依次為80%乙蒜素(65.3%)、5%己唑醇(61.7%)、50%氯溴異氰尿酸(56.3%)、40%氟硅唑(52.7%)。其中，作為植物源農(nóng)藥的80%乙蒜素防病效果最為理想，5%己唑醇次之。5%己唑醇處理第2次施藥的防治效果高于第1次及第3次施藥，是由于此階段為病害高發(fā)期，CK新增病情指數(shù)遠(yuǎn)大于其余兩階段。

圖1 4種藥劑的田間防治效果

3 結(jié)論與討論

從已有的報(bào)道來看，盡管棗黑斑病因地區(qū)和品種不同，鑒定的病原和采用的防治方法也不同，但藥劑防治仍是目前預(yù)防及控制紅棗黑斑病暴發(fā)與流行的主要措施之一。張棟海等[15]開展棗黑斑病的田間藥劑篩選，發(fā)現(xiàn)3%中生菌素、70%代森錳鋅和70%的甲基托布津防效較好；馬榮等[16]通過藥劑室內(nèi)篩選，認(rèn)為40%氟硅唑防效較好；王蘭等[17]認(rèn)為32.5%苯甲·嘧菌酯懸浮劑2 000倍液對(duì)棗黑斑病具有較好的防治效果，商品果率得到明顯提高。本研究從20種殺真菌劑中，通過抑菌圈比較、室內(nèi)毒力測定、田間藥效試驗(yàn)逐步篩選出4種以鏈格孢為病原的新疆紅棗黑斑病防治藥劑，分別為80%乙蒜素、50%氯溴異氰尿酸、40%氟硅唑、5%己唑醇，其中80%乙蒜素和5%己唑醇防效相對(duì)較高，分別為65.3%和61.7%，可作為當(dāng)前防治新疆紅棗黑斑病的主打藥劑。

本研究中所篩出的4種藥劑，除40%氟硅唑外，其余3種尚未見報(bào)道。張棟海等[15]認(rèn)為，3%中生菌素效果較好，但在本研究中效果不明顯。80%乙蒜素是對(duì)新疆棗黑斑病防效最高的藥劑，它是一種仿生植物源殺菌劑，具有低殘留、污染小的優(yōu)點(diǎn)，能夠在保產(chǎn)的同時(shí)減少對(duì)環(huán)境的污染。50%氯溴異氰尿酸噴施在作物表面后能緩慢地釋放次溴酸(HBrO)和次氯酸(HClO)，次溴酸的活性是次氯酸的4倍，有強(qiáng)烈的殺滅細(xì)菌、真菌的能力。另外，因起始原料富含鉀鹽及微量元素群，氯溴異氰尿酸不僅有強(qiáng)烈的殺菌能力，而且有促進(jìn)作物營養(yǎng)生長等作用。同時(shí)在試驗(yàn)結(jié)果調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)，80%乙蒜素、50%氯溴異氰尿酸及5%己唑醇處理行的棗軟腐病病果率也大大降低，說明其具有一定的兼防能力。

篩選出的4種藥劑最終防效為60%左右，與以往報(bào)道相差很大，可能由于施藥間隔較長，藥劑后期的防效下降，在2次施藥間隙期存在病情暴發(fā)迅速擴(kuò)展的情況。對(duì)棗黑斑病防治效果最好的幾種殺菌劑均為單一成分藥劑，分析為在抑菌圈試驗(yàn)中，單一成分藥劑針對(duì)靶標(biāo)菌作用專一，而商品復(fù)配藥劑因考慮田間多因素，直接作用于田間植株，在室內(nèi)抑菌圈試驗(yàn)中作用不明顯而被淘汰，可能引起試驗(yàn)誤差，藥劑之間的混配是否會(huì)提高防治效果，需在后續(xù)試驗(yàn)中加以驗(yàn)證。

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Screening of Fungicides for Controlling Jujube Fruit Black Spot in Xinjiang

LIU Yanxiang1，GUO Qingyuan1*，WANG Dengyuan1，BAI Jianyu2
(1.Academy of Agronomy,Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052,China；2.Agricultural Technology Promotion Center of Aksu Region，Aksu 843000,China)

Jujube fruit black spot is a widespread and serious disease in jujube producing area in Xinjiang.This research aimed to screen out efficient fungicides to control the occurrence and harm of jujube fruit black spot.The methods of inhibition comparing,toxicity test and field control efficacy trials were used for screening from 20 kinds of fungicides.The results indicated that among the 20 kinds of fungicides,the antibacterial capacities of 8 kinds of fungicides were higher in inhibition comparing,and their antibacterial radii were 1.83—3.80 cm,which were 80% Ethylicin,50% Bromo-isocyanuric-acid,40% Duofu,40% Flusilazole,50% Ethirimol,72% Nancozeb·cymoxanil,37% Difenoconazole and 5% Hexaconazole.The results of the toxicity test with 8 kinds of fungicides showed that the virulence of 40% Flusilazole was the greatest,and the EC50was 35.89 mg/L; the second was 5% Hexaconazole,of which the EC50was 58.24 mg/L; the EC50range of the rest six kinds of fungicides was 113.11—517.13 mg/L.Four kinds of fungicides were selected for the control effect test in the field,and the results showed that the control effect of 80% Ethylicin was the highest for jujube fruit black spot (65.3%),followed by 5% Hexaconazole (61.7%),and the control effects of the rest two fungicides(50% Bromo-isocyanuric-acid,40% Flusilazole) were 52.7%—56.3%.In a word,80% Ethylicin and 5% Hexaconazole can be used as the main fungicides for controlling jujube fruit black spot in Xinjiang.

jujube (ZiziphusjujubaMill.)； black spot； fungicide； toxicity test； control effect

2016-03-18

新疆維吾爾自治區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(201130102)

劉艷祥(1989-)，男，遼寧阜新人，在讀碩士研究生，研究方向：植物病理學(xué)。E-mail:lyxiang1105@126.com

*通訊作者：郭慶元(1962-)，男，四川樂山人，教授，博士，主要從事植物病理學(xué)研究。E-mail:guoqingyuan3009@sina.com

S436.65

A

1004-3268(2016)09-0078-06