梔子金花丸有效成分含量測定的研究進展

肖 婭，劉喜綱

(河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，承德醫(yī)學院中藥研究所，承德 067000)

綜 述

梔子金花丸有效成分含量測定的研究進展

肖 婭，劉喜綱*

(河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，承德醫(yī)學院中藥研究所，承德 067000)

梔子金花丸是《中國藥典》收錄的清熱瀉火藥，由8味中藥以藥材原粉入藥，有效成分較多。近年來該制劑中的有效成分的含量測定逐漸被諸多學者廣泛研究，其中梔子苷、黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃蒽醌類等成分研究相對較多，主要采用HPLC法、毛細管電泳法、UPLC法、單波長法或多波長HPLC法測定，測定一種或多種有效成分的含量。本文系統(tǒng)的綜述了梔子金花丸中多種有效成分含量測定方法的研究進展，為其體內(nèi)藥動學過程的研究和質(zhì)量評價提供依據(jù)。

梔子金花丸，有效成分，黃芩苷，梔子苷，鹽酸小檗堿，大黃蒽醌類

梔子金花丸由梔子、黃芩、黃連、黃柏、大黃、金銀花、知母、天花粉8味藥材組成，收載于《中國藥典》2015年版一部[1]。臨床用于治療牙齦腫痛，口舌生瘡，咽喉腫痛，目赤眩暈，肺胃熱盛，吐血衄血，大便秘結等病癥。藥理研究表明，該制劑中有效成分有黃芩苷、梔子苷、鹽酸小檗堿、大黃蒽醌類、西紅花苷-1、知母皂苷BⅡ、芒果苷等成分。近年來，多位研究者對黃芩苷、鹽酸小檗堿及大黃蒽醌等成分進行了測定，其中有單一成分或多種成分含量的測定。本文擬對其有效成分含量測定方法進行綜述，以期通過多定量指標完善、提高梔子金花丸的質(zhì)量標準，檢測有效成分含量變化，從而有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 梔子金花丸中單味藥材的含量測定

1.1 黃芩藥材的含量測定 黃芩苷是藥材黃芩的主要有效成分，關于梔子金花丸中黃芩苷含量測定方法的研究報道有很多，大多采用HPLC法，也有采用毛細管電泳法進行測定的。劉元媛[2]等采用超聲法提取梔子金花丸中黃芩苷，再用HPLC法測定含量，采用Hypersil ODS(200 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)為流動相，檢測波長280 nm，柱溫25 ℃，平均回收率為100.4%(RSD為1.2%)；林輝[3]改進了黃芩苷測定的流動相系統(tǒng)，采用甲醇-水-冰醋酸(45∶55∶1)為流動相，避免了使用含有磷酸的溶液損壞泵頭的問題，在檢測波長為274 nm，柱溫40 ℃下，黃芩苷在2.072～10.360 μg的范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.999 6)，平均回收率為97.87%(RSD為0.55%)。為了減少樣品用量，降低分析成本，楊慧文等[4]采用毛細管電泳法測定梔子金花丸中黃芩苷的含量，采用未涂層彈性融硅石英毛細管柱(60 cm×75 μm，有效長度52 cm),40 mmol/L的硼砂溶液(pH 9.0)為運行緩沖液，檢測波長280 nm，黃芩苷的平均回收率為96.7%(RSD為2.15%)。

為了更全面反映梔子金花丸的質(zhì)量，牛德斌[5]對丸劑中黃芩藥材所含的多種有效成分進行測定，以HPLC法測定黃芩苷和漢黃芩苷的含量。采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-0.3 %冰醋酸溶液(43∶57)為流動相，檢測波長為275 nm，流速為1 ml/min，柱溫35 ℃，黃芩苷和漢黃芩苷的平均回收率分別為98.85%(RSD為1.63%)、97.56%(RSD為1.95%)。黎曉玲等[6]采用HPLC同時測定梔子金花丸中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素4種成分的含量，以Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，流動相為乙腈-0.1 %磷酸，梯度洗脫，檢測波長為278 nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30 ℃，黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素的平均回收率分別為98.40%(RSD為0.45%)、98.66%(RSD為1.41%)、98.88%(RSD為1.48%)和98.97%(RSD為1.45%)。

1.2 梔子藥材的含量測定 梔子金花丸處方中梔子的量較大，其有效成分是梔子苷和西紅花苷-1?！吨袊幍洹?015年版[1]中關于梔子金花丸中梔子苷的含量測定標準是用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈-水(11∶89)為流動相，檢測波長為238 nm。王曉可等[7]采用毛細管電泳法，以未涂層彈性融硅石英毛細管柱(60 cm×75 μm ID，有效長度52 cm)；以25 mmol/L硼砂+25 mmol/L SDS+4 mmol/L磺丁基-β-環(huán)糊精+8%(體積分數(shù))甲醇為緩沖液，檢測波長238 nm，以維生素B1為內(nèi)標，結果梔子苷在21.0～63.0 μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.999 9)，加樣回收率100.5%(RSD為0.56%)。嚴安定等[8]建立用HPLC法同時測定不同品種梔子藥材及梔子金花丸中梔子苷含量方法，采用Hypersil ODS色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-水(15∶85)為流動相，檢測波長為238 nm，結果梔子苷與其相鄰雜質(zhì)峰能完全分離，梔子苷在2.5～80 μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.999 6)，平均加樣回收率為100.05%(RSD為1.58%)。

梔子藥材中含量較多的另一類成分是西紅花苷，其是一類特殊的水溶性類胡蘿卜素，有控制心血管系統(tǒng)疾病、抑制腫瘤細胞增值、保護神經(jīng)和肝臟的作用。其中西紅花苷-1含量最高(含量約為梔子藥材中總西紅花苷的87%)，因此西紅花苷-1含量的高低可能會對制劑的藥理活性具有一定影響。于是陳陽等[9]采用UPLC法，選用Acquity UPLC BEH Shield RP C18(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)色譜柱，以乙腈-水為流動相，進行梯度洗脫，在440 nm檢測波長下，測得西紅花苷-1的線性范圍為2.5～40.0 μg/ml，計算西紅花苷-1峰面積的RSD為2.13%，回收率為98.5%，由此表明該方法準確、快速、重復性好。

1.3 黃連藥材的含量測定 處方中黃連的主要有效成分是鹽酸小檗堿，王曉可等[10]采用未涂層彈性融硅石英毛細管柱(60 cm×75 μm×52 cm)，以0.2 mol/L磷酸二氫鈉溶液-無水乙醇(50∶50)(pH 5.50)為緩沖液，檢測波長265 nm，結果梔子金花丸中所含鹽酸小檗堿的濃度在11.0～44.0 mg/ml的范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.999 3)，平均回收率為100.0%(RSD為1.21%)。

1.4 大黃藥材的含量測定 大黃是處方中的主藥，所含有效成分較多。楊躍龍[11]采用RP-HPLC法對梔子金花丸中大黃藥材的大黃素和大黃酚進行測定，色譜柱為Dikma C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流動相為甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1)，檢測波長為254 nm，柱溫為25 ℃。大黃素、大黃酚的平均回收率分別為99.20%(RSD為0.4%)、99.30%(RSD為0.2%)。

1.5 黃柏藥材的含量測定 處方中的黃柏藥材，其化學成分主要有生物堿類、甾醇類、檸檬苷素類及其他。而鹽酸黃柏堿為黃柏中的特有成分，目前在黃連及小檗屬多種植物中尚未發(fā)現(xiàn)。黃麗玫等[12]建立了專屬于含黃柏及其復方制劑的質(zhì)量評價方法。其研究以鹽酸黃柏堿為指標，采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)，以Diamonsil-C18柱，用乙腈-0.1%磷酸水溶液洗脫，在284 nm的波長下檢測到鹽酸黃柏堿峰的拖尾因子為0.86，且與其他組分峰的分離度大于1.5，測得其平均回收率為100.8%，RSD為0.62%，結果表明該方法準確可靠。

1.6 知母藥材的含量測定 藥材知母所含化學成分種類較多，主要有甾體皂苷、雙苯吡酮類、黃酮類、木質(zhì)素類、有機酸等。芒果苷是主要的雙苯吡酮類成分，是知母中主要的抗炎、抗病毒和抗氧化成分。為進一步評價梔子金花丸制劑的質(zhì)量，溫金蓮等[13]采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)對制劑中知母所含的芒果苷進行了測定，以Diamonsil-C18柱為色譜柱，采用乙腈-磷酸水洗脫系統(tǒng)，在258 nm的波長下檢測，其平均回收率為99.0%，回收率合格，該方法可以準確測定芒果苷的含量。知母中所含的皂苷類成分也很重要，知母皂苷及其苷元均具有較好的抗衰老、抗血小板聚集等作用，知母皂苷BⅡ被認為是知母中含量最高的皂苷類成分，葉志欣等[14]通過采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法(HPLC-ESLD)測定知母皂苷BⅡ的含量來評價該制劑的質(zhì)量。該方法采用Diamonsil-C8色譜柱，以乙腈-水系統(tǒng)洗脫，在蒸發(fā)光散射檢測器下檢測到知母皂苷BⅡ的拖尾因子為1.04，與其他組分峰的分離度大于1.5，平均加樣回收率合格。該方法可以準確、無干擾的測定知母皂苷BⅡ的含量。

2 同時測定梔子金花丸中多味藥材的含量

2.1 同時測定兩味藥材的含量 黃燕萍等[15]采用HPLC建立了同時測定黃芩苷和梔子苷含量的方法，采用Agilent TC-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-0.5%冰乙酸溶液，梯度洗脫，檢測波長239 nm，柱溫為室溫。該方法所得樣品提取率高、回收率、重復性及穩(wěn)定性好，平均加樣回收率分別為101.15%(RSD為2.82)、100.56%(RSD為2.57)。左銀風[16]改進了流動相系統(tǒng)，以Dik-ma Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，流動相采用乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，柱溫為30 ℃，檢測波長為240 nm，在上述色譜條件下，測得黃芩苷與梔子苷的分離度均符合要求且峰形較好，梔子苷、黃芩苷的平均回收率分別為97.06%(RSD為1.09%)、97.92%(RSD為1.17%)。

大黃中主要有效成分是蒽醌類，包括大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素等。雷小紅[17]采用高效液相色譜法測定梔子金花丸中黃芩和大黃藥材中黃芩苷、大黃素、大黃酚的含量。以Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液，梯度洗脫，檢測波長為254 nm，柱溫為室溫。結果黃芩苷回收率為100.2%(RSD為1.5%)，大黃素回收率為99.7%(RSD為1.2%)，大黃酚回收率為100.0%(RSD為1.2%)。

郭小龍等[18]在《中國藥典》梔子苷含量測定標準的基礎上，增加了鹽酸小檗堿的含量測定，Thermo Hypersil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-10 mmol/L SDS水溶液梯度洗脫，柱溫40 ℃，變換檢測波長(0～17 min，240 nm；17～30 min，346 nm)，結果梔子苷回收率為99.8%(RSD為1.9%)、鹽酸小檗堿回收率為100.5%(RSD為0.8%)。而牛德斌[19]在《中國藥典》含量測定標準的基礎上，增加了3個大黃蒽醌苷元類成分的含量測定，采用HPLC法同時對梔子苷及蒽醌類成分(大黃酸、大黃素、大黃酚)進行含量測定，Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相甲醇-0.1%磷酸(85∶15)，檢測波長254 nm，柱溫35 ℃，結果大黃的3個對照品測定的平均回收率均>97.20%(RSD均<2.05%)；梔子苷的平均質(zhì)量分數(shù)為3.386 mg/g。

2.2 同時測定三味及三味以上藥材的含量 陳威等[20]建立了同時測定丸劑中三種有效成分的含量測定方法，色譜柱為Dimonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，檢測波長為254 nm，柱溫為35 ℃。結果梔子苷平均回收率為99.7%(RSD為2.5%)，鹽酸小檗堿平均回收率為100.2%(RSD為1.7%)，黃芩苷平均回收率為99.0%(RSD為2.3%)。蔣范任等[21]采用反相高效液相色譜法同時測定梔子金花丸中梔子苷、鹽酸小檗堿、黃芩苷、大黃酸、大黃素、大黃酚等6種有效成分的含量，色譜柱為Gemini NX C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相進行梯度洗脫，結果這6種成分的平均回收率分別為99.9%(RSD為1.7%)、98.8%(RSD為1.8%)、101.0%(RSD為1.4%)、99.6%(RSD為1.7%)、101.3%(RSD為1.4%)、98.1%(RSD為0.9%)。

由于不同成分的最大吸收波長不同，也有采用不同波長測定有效成分，高旭東等[22]采用雙波長HPLC測定梔子金花丸中梔子苷、黃芩苷、鹽酸小檗堿和大黃素的含量，Zorbax Eclipse XDB-C18鍵合硅膠柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.2%磷酸溶液為流動相，進行梯度洗脫，柱溫為室溫，梔子苷波長240 nm、黃芩苷、鹽酸小檗堿和大黃素波長275 nm。在上述條件下，梔子苷、黃芩苷、鹽酸小檗堿和大黃素平均回收率分別為91.18%(RSD為1.60%)、91.55%(RSD為0.75%)、91.19%(RSD為1.08%)和92.29%(RSD為1.98%)。郝乘儀等[23]采用變換波長的方法，運用HPLC同時測定梔子金花丸中9個成分的含量。采用色譜柱DIKMA Platisil ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相以甲醇-0.1%磷酸水溶液進行梯度洗脫，檢測波長254 nm(梔子苷、黃芩苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚)、327 nm(綠原酸、鹽酸小檗堿)，柱溫35 ℃。試驗所得各成分的平均加樣回收率及RSD值均符合要求。

大黃藥材含量測定的報道多是大黃蒽醌類，也有番瀉苷A和番瀉苷B測定的研究，但復方中關于這2個成分含量測定較少。高曉燕等[24]研究建立了同時測定梔子苷、黃芩苷、番瀉苷A和番瀉苷B的方法。該方法快速、靈敏得同時定量測定多種指標成分，其中各成分的峰分離度良好，回收率合格。

諸多文獻報道對梔子、黃芩、大黃等有效成分的含量測定多采用HPLC法，但未能全面有效地測定該復方制劑的多種成分。陳曉虎等[25]采用UPLC法同時測定梔子金花丸中綠原酸、梔子苷、黃芩苷、小檗堿、漢黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃素、漢黃芩素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等11種成分的含量。色譜柱為Acquity UPLC BEH C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫，流速為0.4 ml/min，檢測波長：綠原酸為324 nm，梔子苷為238 nm，小檗堿為345 nm，黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素為276 nm，蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚為254 nm，柱溫35 ℃。結果各成分平均回收率及RSD值均符合要求。

3 小結

關于梔子金花丸中有效成分含量測定的報道有很多，該復方制劑組成成分的復雜，測定的干擾因素也較多，HPLC法因操作簡便、分析速度快、靈敏度高等優(yōu)點被大量應用。現(xiàn)行標準僅僅測定梔子苷的含量，并不能全面評價丸劑的質(zhì)量；而通過一種方法同時測得多種成分，可以全面有效地評價制劑的質(zhì)量。上述科研人員的研究為完善梔子金花丸的含量測定標準提供了實驗依據(jù)。

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2016-09-09

河北省高等學校科學技術研究項目(No.QN2014145)；河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃項目(No.2016188)；河北省醫(yī)學科學研究重點課題計劃項目(No.20160311)；河北省高校重點學科建設項目(No.冀教高[2013]4號)

R927.2

A

1006-5687(2016)06-0053-04

*通訊作者：劉喜綱，E-mail：liuxgmail@sina.com。