丹參注射液對(duì)疊氮化鈉誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

胡 君丁玉娟熊存全周紅成

1鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院 江蘇省鹽城市 224005 2鹽城市第三人民醫(yī)院 江蘇省鹽城市 224001

丹參注射液對(duì)疊氮化鈉誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

胡 君1丁玉娟2熊存全1周紅成1

1鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院 江蘇省鹽城市 224005 2鹽城市第三人民醫(yī)院 江蘇省鹽城市 224001

目的：研究丹參注射液對(duì)疊氮化鈉損傷心肌細(xì)胞H9C2的保護(hù)作用。方法：建立疊氮化鈉誘導(dǎo)心肌細(xì)胞H9C2氧化損傷的模型。將H9C2細(xì)胞分為空白對(duì)照組、疊氮化鈉模型組，疊氮化鈉+丹參酮ⅡA低劑量組（50μg/ml），疊氮化鈉+丹參酮ⅡA高劑量組（200μg/ml），CCK8法檢測心肌細(xì)胞活性的變化。結(jié)果：丹參注射液能顯著減輕由疊氮化鈉誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞損傷，提高心肌細(xì)胞的活性。結(jié)論：丹參注射液可保護(hù)心肌細(xì)胞H9C2免受氧化損傷。

丹參注射液；疊氮化鈉；心肌細(xì)胞；細(xì)胞活性

在缺血性心臟病的治療過程中，冠狀動(dòng)脈內(nèi)溶栓及冠脈搭橋手術(shù)等被廣泛使用，但同時(shí)心肌缺血再灌注損傷引起的問題也日益突出[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注時(shí)產(chǎn)生大量的氧自由基（活性氧），誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生氧化損傷[3]。傳統(tǒng)中藥丹參是一種天然抗氧化劑，具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等作用[4]。本實(shí)驗(yàn)用疊氮化鈉制作心肌細(xì)胞的氧化損傷模型，觀察不同濃度的丹參注射液對(duì)疊氮化鈉誘導(dǎo)的心肌氧化損傷的保護(hù)作用，為研究丹參的臨床藥理作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

L-DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶、疊氮化鈉、注射用丹參、CCK8試劑盒。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 H9C2細(xì)胞培養(yǎng)

37℃、5%CO2條件下，H9C2心肌細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的L-DMEM培養(yǎng)基中，每2d換液一次。當(dāng)細(xì)胞生長至融合度達(dá)90%時(shí)，0.25%胰酶消化傳代，調(diào)整細(xì)胞密度為5×104/ml，接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上。

1.2.2 丹參注射液處理

將接種至96孔板上的H9C2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組、疊氮化鈉模型組（50μmol/L疊氮化鈉）、丹參注射液低劑量組、高劑量組（分別加入50μg/ ml、200μg/ml的丹參注射液預(yù)處理細(xì)胞1 h，再加入50μmol/L疊氮化鈉孵育6h）。

1.2.3 CCK8檢測細(xì)胞的存活率

向處理后的H9C2細(xì)胞，每孔加入10 μl CCK8溶液，放置到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h，酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光度值。細(xì)胞活性的計(jì)算公式：細(xì)胞活性=[（實(shí)驗(yàn)孔OD值-空白孔OD值）/（對(duì)照孔OD值-空白孔OD值）]×100%。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，p<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

與對(duì)照組相比，疊氮化鈉模型組細(xì)胞活性明顯下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，200μg/ml丹參注射液處理后，細(xì)胞活性顯著增加，但50μg/ml丹參注射液對(duì)H9C2的保護(hù)作用不明顯，與模型組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

氧化應(yīng)激介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡是缺血再灌注損傷的主要機(jī)制[5]。疊氮化鈉，線粒體有氧呼吸鏈中細(xì)胞色素c氧化酶的特異性抑制劑，可誘導(dǎo)氧化磷酸化和細(xì)胞呼吸異常，常被用做氧化應(yīng)激下心肌細(xì)胞損傷模型的建立。丹參是傳統(tǒng)中藥，具有活血通脈、消炎止痛之功效，包含脂溶性和水溶性兩部分。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)丹參制劑能顯著提高心肌細(xì)胞中超氧化物歧化酶活性，降低乳酸脫氫酶和丙二醛含量，降低細(xì)胞中脂質(zhì)過氧化物濃度，達(dá)到清除氧自由基的作用[6]。本實(shí)驗(yàn)用不同濃度的丹參注射液對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理發(fā)現(xiàn)，200μg/ml丹參注射液可顯著改善由疊氮化鈉誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷，提高受損心肌細(xì)胞的活性，提示丹參注射液可減少氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，維持心肌細(xì)胞活力，從而最終改善心功能狀態(tài)。

[1]侯少科,郝麗娜,李建輝等.聯(lián)合應(yīng)用貝那普利與丙泊酚對(duì)體外循環(huán)下冠脈搭橋術(shù)患者心肌缺血再灌注損傷的影響[J].中國老年學(xué)雜志.2015;35:5508-5510.

[2]Yao T,Ying X,Zhao Y,et al. Vitamin D receptor activation protects against myocardial reperfusion injury through inhibition of apoptosis and modulation of autophagy[J].Antioxid Redox Signal.2015;22(08):633-50.

[3]Bagheri F,Khori V,Alizadeh AM, et al.Reactive oxygen speciesmediated cardiac-reperfusion injury:Mechanisms and therapies [J].Life Sci.2016;165:43-55.

[4]Liu Y,Huang Y,Zhao C,et al. Salvia miltiorrhiza injection on pulmonary heart disease:a systematic review and metaanalysis [J].Am J Chin Med.2014; 42(06):1315-31.