仔豬流行性腹瀉病毒原性調(diào)查研究

朱文淵，郝晴晴，霍翠梅，呂玉星

（濟(jì)寧市畜牧獸醫(yī)局，山東濟(jì)寧 272037）

仔豬流行性腹瀉病毒原性調(diào)查研究

朱文淵，郝晴晴，霍翠梅，呂玉星

（濟(jì)寧市畜牧獸醫(yī)局，山東濟(jì)寧 272037）

通過(guò)濟(jì)寧市仔豬流行性的發(fā)病情況，找出主要致病因子，對(duì)該地區(qū)36家豬場(chǎng)的134份病樣，進(jìn)行了豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬圓環(huán)病毒-2（PCV-2）、豬偽狂犬病毒（PRV）熒光RT-PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示：PEDV、TGEV、PCV-2、PRV陽(yáng)性率分別為73.9%、17.9、21.6% 和20.1%，群陽(yáng)性率分別為83.3%、27.8%、33.3%和25.0%。研究表明：引起仔豬腹瀉流行的主要致病因子為PEDV，并伴隨TGEV、PCV-2、PRV的混合感染。

養(yǎng)殖 仔豬 流行性腹瀉 病毒原性

仔豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea，PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的一種以腹瀉、嘔吐和脫水為主要特征的接觸性腸道傳染?。?］。各年齡的豬均可能發(fā)病，對(duì)哺乳仔豬影響較大，致死率常能達(dá)到100%。

臨床上，造成仔豬腹瀉發(fā)生的原因是多方面的，如豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬輪狀病毒（PRV）、豬偽狂犬病毒（PRV）等，且多以混合感染呈現(xiàn)［2～4］。2015年秋冬季節(jié)，濟(jì)寧市地區(qū)仔豬流行性腹瀉呈暴發(fā)趨勢(shì)。此次疫情多在中小型養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生，發(fā)病快，死亡率高，出生后到斷奶的仔豬死亡率高達(dá)70%以上，對(duì)該市生豬養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損失。為了解濟(jì)寧市仔豬流行性腹瀉的發(fā)病情況，找出致病原因，研究通過(guò)熒光RT-PCR檢測(cè)方法，對(duì)采自濟(jì)寧市36家養(yǎng)豬場(chǎng)的134份病料進(jìn)行了4種病毒原性檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 病料采集

剖檢病弱或剛剛死亡的仔豬，采集明顯發(fā)病的小腸、胃、肺、腎臟作為檢測(cè)樣本，實(shí)驗(yàn)室-40℃凍存，以備檢測(cè)。

1.2 主要儀器和試劑

主要儀器：羅氏LightCycle 480熒光定量PCR儀、高速冷凍離心機(jī)（sigma 2-16 pk）。

主要試劑：RNA柱式提取套裝，PEDV、TGEV、PCV-2、PRV熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司。

1.3 樣品檢測(cè)

研究共檢測(cè)PEDV、TGEV、PCV-2、PRV4項(xiàng)?？俁NA提取按照柱式RNA提取套裝說(shuō)明書操作。提取后，-40℃保存?zhèn)溆谩０凑赵噭┖姓f(shuō)明書配制反應(yīng)體系，并進(jìn)行擴(kuò)增。

1.4 結(jié)果判斷

使用LightCycle 480 software處理擴(kuò)增曲線，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié)果

共檢測(cè)2015年11月至2016年2月，采自9個(gè)縣市區(qū)36家中小型養(yǎng)豬場(chǎng)的病料134份，每場(chǎng)采樣2～5份。結(jié)果：PEDV、TGEV、PCV-2、PRV陽(yáng)性率分別為73.9%、17.9、21.6%和20.1%，群陽(yáng)性率分別為83.3%、27.8%、33.3%和25.0%。絕大部分發(fā)病豬場(chǎng)存在2～3種病毒的混合感染。

3 討論

臨床上，仔豬腹瀉的發(fā)生往往是多方因素共同作用的結(jié)果。如，玉米霉變導(dǎo)致的黃曲霉素含量過(guò)高、氣候劇烈變化引起的冷應(yīng)激、細(xì)菌原性腹瀉、病毒原性腹瀉等。秋冬季節(jié)氣溫下降，造成的冷應(yīng)激是發(fā)生仔豬腹瀉的主要誘因。中小型養(yǎng)豬場(chǎng)保溫措施差，隔離、衛(wèi)生條件差，也是引發(fā)仔豬腹瀉病暴發(fā)的主要原因。研究結(jié)果顯示PEDV陽(yáng)性率最高，說(shuō)明仔豬腹瀉的流行PEDV是主要致病因子，此結(jié)果與我國(guó)其他地區(qū)近年來(lái)仔豬腹瀉的致病原一致［4～6］。仔豬腹瀉的發(fā)生，往往伴隨著多種病毒的混合感染［2～4］。研究也證明了這一點(diǎn)，TGEV、PCV-2、PRV病毒與PEDV的混合感染是導(dǎo)致疫病發(fā)病快、死亡率高的原因之一。

對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)戶調(diào)查問(wèn)詢可知，仔豬腹瀉病的死亡率普遍在70%以上，部分死亡率在90%以上。多家豬場(chǎng)免疫PEDV-TGEV二聯(lián)苗，并未起到保護(hù)作用，究其原因，可能是由于母源抗體水平過(guò)低或PEDV病毒突變?cè)斐傻模行柽M(jìn)一步研究確定。

［1］ 林裕勝，王隆柏，吳秋玉，等.福建省豬流行性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2014，30（35）：83～86

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［3］ 毛黎紅，王開(kāi)功，周碧君.貴州省部分地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)仔豬4種腹瀉病毒感染調(diào)查.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，36（5）：121～124

［4］ 杜季梅.仔豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查及卵黃抗體在PEDV防治中的應(yīng)用.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013

［5］ 趙夢(mèng)姣.2012年春季山東省豬流行性腹瀉的流行病學(xué)調(diào)查.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013

［6］ 林裕勝，王隆柏，吳學(xué)敏，等.2012-2013年福建省豬流行性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查.福建畜牧獸醫(yī)，2015，35（6）：16～18