• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    研究基因沉默途徑的幾種篩選系統(tǒng)概述

    2016-02-06 18:47:21陳黃曌劉延波余海尤鄧曉旭王永芬
    中國農(nóng)業(yè)信息 2016年11期
    關(guān)鍵詞:突變體擬南芥甲基化

    陳黃曌,劉延波,余海尤,鄧曉旭,王永芬

    (河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院生物工程學(xué)院,鄭州 450046)

    研究基因沉默途徑的幾種篩選系統(tǒng)概述

    陳黃曌,劉延波,余海尤,鄧曉旭,王永芬

    (河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院生物工程學(xué)院,鄭州 450046)

    在真核生物中,基因表達的表觀遺傳控制,在應(yīng)對病毒入侵、轉(zhuǎn)座子易位和轉(zhuǎn)基因片段插入過程中,發(fā)揮著重要作用。在植物中,轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源基因的沉默,主要通過轉(zhuǎn)錄基因沉默(transcriptional gene silencing,TGS)或者轉(zhuǎn)錄后基因沉默途徑(posttranscriptional gene silencing,PTGS)。TGS通常是由轉(zhuǎn)入基因的多拷貝或由轉(zhuǎn)基因片段插入到了染色體的特定區(qū)域引起的,受內(nèi)源基因啟動子啟動的轉(zhuǎn)基因表達,可能會導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因及該內(nèi)源基因的沉默,該過程可能通過RNAs介導(dǎo)完成。擬南芥屬雙子葉開花植物,花期較短,且已經(jīng)完成全基因組測序及注釋工作。目前,作為一種模式研究植物,植物表觀遺傳學(xué)研究者利用擬南芥,通過遺傳篩選結(jié)合蛋白和分子生物學(xué)方法,研究DNA甲基化、組蛋白修飾和基因表達調(diào)控的表觀遺傳分子機制,通過構(gòu)建不同的篩選系統(tǒng)發(fā)現(xiàn),參與到RdDM(RNA-directed DNA methylation)及其它途徑中的新基因,并借助轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白組學(xué)研究工具,具體闡明該新發(fā)現(xiàn)基因,在整個甲基化調(diào)控中的作用機理。文章以甲基化調(diào)控為研究對象,對當(dāng)前具有代表性的篩選系統(tǒng)做概括介紹。

    DNA甲基化 基因沉默 RdDM 篩選系統(tǒng)

    與原核生物不同,真核生物的遺傳信息儲存,在以組蛋白八聚體包裹著DNA組成的核小體中,并以染色質(zhì)形式存在。因此,基因的表達調(diào)控就不可避免地受到DNA和組蛋白表觀遺傳修飾的影響,尤以DNA甲基化修飾最為常見[1]。DNA甲基化是指,在胞嘧啶堿基端添加一個甲基基團。在哺乳動物中,DNA甲基化專一性的發(fā)生在對稱的CG背景下,占到了整個基因組比例的70%~80%;在植物中,DNA甲基化發(fā)生在以下的序列背景:對稱的CG、CHG和不對稱的CHH(H = A T or C)。其中,CG和CHG序列背景下的甲基化,主要是由MET1 和CMT3兩個基因編碼蛋白維持的,而CHH序列背景下的DNA甲基化則由DRM2基因編碼蛋白從頭合成來維持的,與哺乳動物不同,植物中DNA甲基化,主要發(fā)生在轉(zhuǎn)座子和其它DNA重復(fù)序列原件[2]。

    植物中DNA甲基化的從頭合成,最初被發(fā)現(xiàn)是由小RNA介導(dǎo)的[3],目前已被命名為RdDM(RNA指導(dǎo)下的DNA甲基化)途徑,PolIV和PolV(DNA依賴的RNA聚合酶)是植物所編碼特有的兩個聚合酶,也是RdDM所必需的[4]。在RdDM途徑中,由PolIV轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的單鏈RNA,經(jīng)RDR2(RNA依賴的RNA聚合酶)基因編碼蛋白被合成雙鏈,之后,由DCL3基因編碼蛋白被加工為24 nt siRNA,并以單鏈形式被轉(zhuǎn)載到AGO4蛋白上,形成AGO-siRNA復(fù)合體。同時,由PolV在靶位點轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的非蛋白編碼基因轉(zhuǎn)錄本作為支架[5]。研究表明,KTF1基因編碼蛋白可以結(jié)合由PolV轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的scaffolds,并招募AGO4蛋白形成AGO-siRNA復(fù)合體,并與IDN2蛋白和DDR復(fù)合體形成更大的RdDM效應(yīng)子蛋白復(fù)合體,之后,該效應(yīng)子蛋白復(fù)合體,通過一種未知的機制招募到DNA甲基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶到基因組特定位點,從而實現(xiàn)對靶位點的甲基化沉默[6]。

    1 RD29Apro:LUC 篩選系統(tǒng)

    RD29A是植物逆境脅迫應(yīng)答基因,啟動子區(qū)域含有ABA、干旱、鹽和冷脅迫應(yīng)答元件[7]。朱健康實驗室將RD29A啟動子與LUC基因連接,構(gòu)建成為RD29Apro:LUC表達系統(tǒng)轉(zhuǎn)入到野生型擬南芥C24中,轉(zhuǎn)基因的擬南芥因此獲得2個甚至以上RD29A啟動子的拷貝數(shù)。經(jīng)過多代篩選后,獲得RD29A-LUC轉(zhuǎn)基因穩(wěn)定表達的株系,對該株系進行EMS誘變處理后,在M2代中,經(jīng)過鹽處理后篩選異常發(fā)光的突變體[8],經(jīng)過篩選發(fā)現(xiàn)其中一個突變體,在經(jīng)過鹽脅迫處理后,失去發(fā)光能力。以此,將該突變體命名為ros1。通過圖位克隆,對該位點進行精細(xì)定位,并進行克隆測序,結(jié)果顯示,該ROS1基因編碼具有Ⅲ型核酸內(nèi)切酶功能域核蛋白,和參與DNA損傷修復(fù)的HhH-GPD超家族蛋白,具有顯著的相似性。關(guān)于其功能的描述有兩種假說:一種認(rèn)為ROS1蛋白可能參與阻止由smRNAs引發(fā)的DNA甲基化反應(yīng);另一種學(xué)說則認(rèn)為ROS1蛋白直接作用DNA的去甲基化反應(yīng),從而抑制特定DNA序列的過度甲基化水平[9]。該實驗結(jié)果得出的結(jié)論與后一種假說一致,在ros1突變體中,由于ROS1蛋白去甲基化功能的缺失,整個基因組甲基化水平處于較高的狀態(tài),因此,轉(zhuǎn)基因被沉默,報告基因不會發(fā)出熒光。在此基礎(chǔ)上,以該ros1突變體為背景,實驗室又構(gòu)建出一種篩選系統(tǒng),即RD29Apro:LUC/ros1篩選系統(tǒng)。

    2 SDCpro:GFP篩選系統(tǒng)

    研究表明,SDC(Suppressor of drm2cmt3)基因在擬南芥多個組織中的表達,受到DRM2和 CMT3的表達抑制,因此,SDC的表達沉默在drm2cmt3雙突變體中,而非各自單突變體中能夠得到釋放,SDC基因啟動子區(qū)域含有7個串聯(lián)重復(fù)區(qū)域,可招募結(jié)合DNA甲基化蛋白,進而引起該基因的沉默。通過分子操作實驗,將SDC啟動子和綠色熒光蛋白GFP連接構(gòu)建融合表達篩選系統(tǒng),將含有該SDCpro:GFP的融合載體,通過農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)入野生型擬南芥中,由于SDC啟動子區(qū)域串聯(lián)重復(fù)序列的存在,轉(zhuǎn)基因擬南芥中GFP基因的表達因此被沉默,通過EMS突變處理后,從中篩選出GFP基因表達沉默被釋放的突變體。Steven E. Jacobsen實驗室通過該種方法,成功尋找到參與到甲基化沉默途徑的新基因AtMORC6[10]。研究表明,基因編碼蛋白含有一保守的腺苷三磷酸酶結(jié)構(gòu)域[11],可能參與了染色質(zhì)超級結(jié)構(gòu)的重塑化過程,其作用機理可能是通過與RdDM途徑中的DMS3蛋白相互作用,參與到RdDM過程,實現(xiàn)對轉(zhuǎn)錄抑制的調(diào)控,也有的研究直接將AtMORC6/DMS11列為RdDM作用機制中的一個新成員基因。AtMORC6基因的發(fā)現(xiàn)證明,SDCpro:GFP篩選系統(tǒng),可以成功的用于篩選參與甲基化調(diào)控途徑的新成員基因,且SDC作為RdDM途徑直接作用的靶位點[12],受甲基化影響而沉默,使得該篩選系統(tǒng)更具有針對性。該系統(tǒng)的創(chuàng)新之處,就在于利用植物了內(nèi)源基因,啟動子區(qū)域特有的重復(fù)序列結(jié)構(gòu),作為研究途徑的靶位點兩大優(yōu)勢,特異性地篩選新功能基因。

    3 d35S:LUC-AP2篩選系統(tǒng)

    LUC(LUCIFERASE)常作為報告基因被轉(zhuǎn)入作為水稻和煙草中,通過與底物反應(yīng)發(fā)出熒光,借此研究轉(zhuǎn)基因表達。陳雪梅實驗室將兩個35S啟動子串聯(lián)排列,分別啟動LUC和NPTⅡ(抗性篩選標(biāo)記)基因表達,構(gòu)建雙元35S啟動子融合熒光素酶表達系統(tǒng)構(gòu)建篩選系統(tǒng),并與LUC基因末端融合一段AP2序列。該AP2序列包含miR172 結(jié)合位點,形成d35S:LUC-AP2和d35S:NPTⅡ結(jié)構(gòu)。該系統(tǒng)同時篩選分別參與RdDM和miRNAs介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默途徑的新基因,為消除轉(zhuǎn)錄后基因沉默造成的影響,該表達系統(tǒng)通過農(nóng)桿菌被轉(zhuǎn)入到rdr6突變體中[13-14],分離得到LUC信號中等強度水平的株系,將其命名為LUCH(LUC repressed by CHH methylation),通過EMS誘變處理后,從中篩選熒光信號高和低強度的突變體,并通過該系統(tǒng)篩選得到已知的參與DNA甲基化修飾的MOM1和ROS1等基因。除此之外,該系統(tǒng)同時篩選得到一新基因AMP1。該基因編碼產(chǎn)物為一膜整合蛋白,與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和AGO1相關(guān)聯(lián),AGO1是與膜相關(guān)的主要miRNAs效應(yīng)子蛋白[15],表明該蛋白主要參與擬南芥miRNAs介導(dǎo)的翻譯抑制過程[14],miRNAs主要通過作用于target mRNAs實現(xiàn)翻譯的抑制調(diào)控。但,該發(fā)生過程的亞細(xì)胞定位一直沒有被闡明,通過對AMP1亞細(xì)胞定位的鑒定和miRNAs作用的target mRNAs的分布研究,證實了miRNA介導(dǎo)的翻譯抑制過程發(fā)生在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。

    目前,文獻已報道的篩選系統(tǒng),遠(yuǎn)不止于以上3種,調(diào)控植物甲基化的方式也不止于RdDM、

    DDM1等。從就目前已經(jīng)報道的篩選系統(tǒng)所得到的結(jié)果可看出,某些基因,如典型的RdDM途徑蛋白AGO4及不依賴于RdDM途徑的MOM1蛋白,在不同的篩選系統(tǒng)中,幾乎都可以被重復(fù)篩到,表明基因沉默的機理本身十分復(fù)雜,不同的沉默途徑之間并不是嚴(yán)格獨立的,相互之間可能存在著功能上的部分重疊,甚至是相互作用。隨著研究的深入,多數(shù)篩選系統(tǒng)對新基因的發(fā)掘趨于飽和,使新基因的發(fā)掘越來越有限。未來的研究,可能要通過構(gòu)建更加具有針對性的篩選系統(tǒng),對介導(dǎo)甲基化沉默的不同通路之間的相互作用,進行深入探究,進一步揭示表觀遺傳學(xué)的分子機理。

    [1] Law J A,Jacobsen S E . Establishing,maintaining and modifying DNA methylation patterns in plants and animals. Nature reviews Genetics,2010,(11):204~220

    [2] Zhang X,Yazaki J,Sundaresan A,et al. Genome-wide high-resolution mapping and functional analysis of DNA methylation in arabidopsis. Cell,2006,(126):1189~1201

    [3] Wassenegger M,Heimes S,Riedel L,and Sanger,et al. RNA-directed de novo methylation of genomic sequences in plants. Cell,1994,(76):567~576

    [4] Matzke M,Kanno T,Daxinger L,et al. RNA-mediated chromatinbased silencing in plants. Current opinion in cell biology,2009,(21):367~376

    [5] Zheng B,Wang Z,Li S,et al. Intergenic transcription by RNA polymerase II coordinates Pol IV and Pol V in siRNA-directed transcriptional gene silencing in Arabidopsis. Genes & Development,2009,(23):2850~2860

    [6] Cao X,Aufsatz W,Zilberman D,et al. Role of the DRM and CMT3 methyltransferases in RNA-directed DNA methylation. Current biology :CB,2003,(13):2212~2217

    [7] Ishitani M,Xiong L,Stevenson B,et al. Genetic analysis of osmotic and cold stress signal transduction in Arabidopsis: interactions and convergence of abscisic acid-dependent and abscisic acid-independent pathways. Plant Cell,1997,(9):1935~1949

    [8] Gong Z Z,Rafael R. Ariza,et al. ROS1,a Repressor of Transcriptional Gene Silencing in Arabidopsis,Encodes a DNA Glycosylase/Lyase. Cell,2002,(111):803~814

    [9] Lindahl T,Wood R D. Quality control by DNA repair. Science,1999,(286):1897~1905

    [10] Guillaume M,S J C,Joshua C,et al. MORC Family ATPases Required for Heterochromatin Condensation and Gene Silencing. Science,2012,(336)

    [11] Moissiard G,Cokus S J,Cary J,et al. MORC family ATPases required for heterochromatin condensation and gene silencing. Science,2012,(336):1448~1451

    [12] Henderson I R,Jacobsen S E. Tandem repeats upstream of the Arabidopsis endogene SDC recruit non-CG DNA methylation and initiate siRNA spreading. Genes & Development,2008,(22):1597~1606

    [13] Dalmay T,Hamilton A,Rudd S,et al. An RNA-dependent RNA polymerase gene in Arabidopsis is required for posttranscriptional gene silencing mediated by a transgene but not by a virus. Cell,2000,(101):543~553

    [14] Peragine A ,Yoshikawa MG,Albrecht HL,et al. SGS3 and SGS2/ SDE1/ RDR6 are required For juvenile development and the production of transacting siRNAs in Arabidopsis. Genes Dev,2004,(18):2368~2379

    [15] Brodersen P,Sakvarelidze-Achard L,Schaller H,et al. Isoprenoid biosynthesis is required for miRNA function and affects membrane association of ARGONAUTE 1 in Arabidopsis. Proceedings of the National Academy of Sciences,2012,(109):1778~1783

    猜你喜歡
    突變體擬南芥甲基化
    擬南芥:活得粗糙,才讓我有了上太空的資格
    尿黑酸對擬南芥酪氨酸降解缺陷突變體sscd1的影響
    兩種LED光源作為擬南芥生長光源的應(yīng)用探究
    CLIC1及其點突變體與Sedlin蛋白的共定位研究
    擬南芥干旱敏感突變體篩選及其干旱脅迫響應(yīng)機制探究
    Survivin D53A突變體對宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    鼻咽癌組織中SYK基因啟動子區(qū)的甲基化分析
    胃癌DNA甲基化研究進展
    基因組DNA甲基化及組蛋白甲基化
    遺傳(2014年3期)2014-02-28 20:58:49
    全甲基化沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備
    久久99热这里只有精品18| 直男gayav资源| 精品免费久久久久久久清纯| aaaaa片日本免费| 午夜免费成人在线视频| 观看免费一级毛片| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲第一电影网av| 久久99热6这里只有精品| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产伦人伦偷精品视频| 国产欧美日韩一区二区三| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 看黄色毛片网站| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲 国产 在线| 变态另类丝袜制服| 亚洲人与动物交配视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产毛片a区久久久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 一个人免费在线观看电影| 久99久视频精品免费| 国产探花在线观看一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日日夜夜操网爽| 免费观看精品视频网站| 老女人水多毛片| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 一本综合久久免费| 在线观看66精品国产| 国产一级毛片七仙女欲春2| 波多野结衣高清作品| 欧美一区二区亚洲| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 天天躁日日操中文字幕| 老鸭窝网址在线观看| 免费观看的影片在线观看| 久99久视频精品免费| 欧美极品一区二区三区四区| 日本一本二区三区精品| 少妇人妻一区二区三区视频| 黄色女人牲交| 亚洲内射少妇av| 18美女黄网站色大片免费观看| av女优亚洲男人天堂| 老司机午夜福利在线观看视频| 男女那种视频在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 欧美性感艳星| 亚洲,欧美精品.| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日本a在线网址| 毛片女人毛片| 99久国产av精品| 麻豆一二三区av精品| 久久久久久久久久成人| 亚洲三级黄色毛片| 欧美日本视频| 久久久久久久久久成人| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产成人影院久久av| 欧美日韩福利视频一区二区| 最新在线观看一区二区三区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 99精品在免费线老司机午夜| 又黄又爽又免费观看的视频| 欧美三级亚洲精品| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲国产高清在线一区二区三| 成人毛片a级毛片在线播放| 日韩中字成人| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 久久亚洲真实| 亚洲欧美清纯卡通| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 日日夜夜操网爽| 亚洲午夜理论影院| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 不卡一级毛片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 757午夜福利合集在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 成人av一区二区三区在线看| 91av网一区二区| www.999成人在线观看| 极品教师在线免费播放| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美色视频一区免费| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 看免费av毛片| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲国产高清在线一区二区三| 一级a爱片免费观看的视频| 天堂动漫精品| 午夜日韩欧美国产| 成年版毛片免费区| 午夜福利高清视频| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品av视频在线免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 天堂网av新在线| 亚洲成av人片在线播放无| 18+在线观看网站| 亚洲欧美清纯卡通| 久久99热6这里只有精品| 欧美极品一区二区三区四区| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 免费无遮挡裸体视频| 国产高潮美女av| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 免费高清视频大片| 男女视频在线观看网站免费| 夜夜夜夜夜久久久久| 十八禁国产超污无遮挡网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产精品亚洲美女久久久| 久久国产精品影院| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产av不卡久久| 中国美女看黄片| 久久九九热精品免费| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产精品野战在线观看| 看十八女毛片水多多多| 精品人妻1区二区| 天堂√8在线中文| 日韩欧美免费精品| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 成人美女网站在线观看视频| 日日夜夜操网爽| 亚洲经典国产精华液单 | 狠狠狠狠99中文字幕| 免费在线观看亚洲国产| 国产精品电影一区二区三区| 一区二区三区激情视频| 精华霜和精华液先用哪个| 一个人免费在线观看的高清视频| 午夜福利视频1000在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 免费无遮挡裸体视频| 午夜福利在线在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一本一本综合久久| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品99久久久久久久久| 在线观看免费视频日本深夜| 久久国产乱子免费精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 1024手机看黄色片| 熟女人妻精品中文字幕| 国产单亲对白刺激| 国产激情偷乱视频一区二区| 三级国产精品欧美在线观看| 1000部很黄的大片| 亚洲国产精品999在线| 无遮挡黄片免费观看| 天堂√8在线中文| 男人和女人高潮做爰伦理| 中文在线观看免费www的网站| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 91字幕亚洲| 色哟哟·www| 欧美色视频一区免费| 国产精品一区二区免费欧美| 激情在线观看视频在线高清| 美女大奶头视频| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美zozozo另类| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产精品野战在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久中文看片网| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 成人欧美大片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲最大成人手机在线| 精品久久久久久久久久久久久| 白带黄色成豆腐渣| 国产一区二区在线观看日韩| 18禁在线播放成人免费| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产免费男女视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久99热6这里只有精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 嫩草影院精品99| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av五月六月丁香网| 国内揄拍国产精品人妻在线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 黄色一级大片看看| av国产免费在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6 | 中国美女看黄片| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚洲国产精品成人综合色| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲,欧美,日韩| 无遮挡黄片免费观看| 免费观看人在逋| 最新在线观看一区二区三区| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 免费观看人在逋| 人妻久久中文字幕网| h日本视频在线播放| 欧美午夜高清在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久人妻av系列| 身体一侧抽搐| 久久人人爽人人爽人人片va | 国产精品99久久久久久久久| av国产免费在线观看| 夜夜爽天天搞| 国产久久久一区二区三区| 在线观看66精品国产| 成人三级黄色视频| 一区二区三区四区激情视频 | 伊人久久精品亚洲午夜| 国产一区二区在线观看日韩| 18美女黄网站色大片免费观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产高清激情床上av| 最近最新免费中文字幕在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 在线观看免费视频日本深夜| 精品一区二区免费观看| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲不卡免费看| 少妇熟女aⅴ在线视频| www日本黄色视频网| 欧美成人性av电影在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产老妇女一区| 高清在线国产一区| 欧美+日韩+精品| 无遮挡黄片免费观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久久久久久久黄片| 毛片女人毛片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 一区二区三区高清视频在线| АⅤ资源中文在线天堂| 成人性生交大片免费视频hd| 丁香六月欧美| 一区二区三区高清视频在线| 色吧在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久伊人香网站| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜a级毛片| 老鸭窝网址在线观看| 国产高清三级在线| 成人av一区二区三区在线看| 久久久久久国产a免费观看| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲色图av天堂| 日本精品一区二区三区蜜桃| 麻豆国产av国片精品| 国产av麻豆久久久久久久| 欧美+亚洲+日韩+国产| 成年女人永久免费观看视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品野战在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美zozozo另类| 国产精品永久免费网站| 九九在线视频观看精品| 成人三级黄色视频| 欧美激情在线99| 在线播放国产精品三级| 在线天堂最新版资源| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精华一区二区三区| 淫妇啪啪啪对白视频| 悠悠久久av| 丰满乱子伦码专区| 51国产日韩欧美| 在线观看舔阴道视频| 五月伊人婷婷丁香| 国产成人影院久久av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产老妇女一区| 99热只有精品国产| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产免费av片在线观看野外av| 午夜免费激情av| 脱女人内裤的视频| 午夜免费成人在线视频| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久精品91蜜桃| 精品久久久久久久久av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产伦在线观看视频一区| 一a级毛片在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 中文字幕久久专区| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久6这里有精品| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 精品人妻偷拍中文字幕| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲性夜色夜夜综合| 日韩欧美在线二视频| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 校园春色视频在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲性夜色夜夜综合| 99久久成人亚洲精品观看| 91字幕亚洲| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久人妻av系列| 午夜福利高清视频| 极品教师在线免费播放| 99久久成人亚洲精品观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美成人性av电影在线观看| 久久人妻av系列| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品一区二区性色av| 亚洲最大成人av| 日本在线视频免费播放| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 搡老妇女老女人老熟妇| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 亚洲美女黄片视频| 夜夜爽天天搞| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 日韩亚洲欧美综合| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 夜夜爽天天搞| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 精品人妻偷拍中文字幕| 制服丝袜大香蕉在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲真实伦在线观看| 午夜福利在线观看吧| 精品国内亚洲2022精品成人| 午夜福利18| 一本久久中文字幕| 国产亚洲精品av在线| 亚洲综合色惰| 女人被狂操c到高潮| 全区人妻精品视频| 国产精品女同一区二区软件 | 欧美日韩国产亚洲二区| 色吧在线观看| 国产视频内射| 日韩欧美 国产精品| 在线观看午夜福利视频| 一本综合久久免费| 天堂√8在线中文| 亚洲国产精品久久男人天堂| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 在现免费观看毛片| 伦理电影大哥的女人| 天堂√8在线中文| 国产成人欧美在线观看| 精品国产亚洲在线| av视频在线观看入口| 国产av麻豆久久久久久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 久9热在线精品视频| 婷婷亚洲欧美| or卡值多少钱| 亚洲在线自拍视频| av欧美777| 国产中年淑女户外野战色| 久久国产精品影院| 一个人免费在线观看电影| 高潮久久久久久久久久久不卡| 热99在线观看视频| 在线看三级毛片| 欧美三级亚洲精品| 嫩草影院新地址| 赤兔流量卡办理| 亚洲综合色惰| 精品日产1卡2卡| 精品人妻1区二区| www.www免费av| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 色精品久久人妻99蜜桃| 色综合婷婷激情| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲男人的天堂狠狠| 午夜免费成人在线视频| 日韩亚洲欧美综合| 欧美最新免费一区二区三区 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 在线观看午夜福利视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲国产精品久久男人天堂| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 能在线免费观看的黄片| 一级黄色大片毛片| 搡老妇女老女人老熟妇| 赤兔流量卡办理| 欧美精品国产亚洲| 精品久久久久久久久久久久久| 搡老岳熟女国产| aaaaa片日本免费| 悠悠久久av| 亚洲五月婷婷丁香| 黄色配什么色好看| 亚洲av电影在线进入| 看免费av毛片| 他把我摸到了高潮在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产三级中文精品| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 欧美高清性xxxxhd video| 悠悠久久av| 一区二区三区免费毛片| 内射极品少妇av片p| 哪里可以看免费的av片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 村上凉子中文字幕在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美激情在线99| 日韩国内少妇激情av| xxx大片免费视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 男女那种视频在线观看| 国产成人91sexporn| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 精品久久国产蜜桃| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产一区二区在线观看日韩| 国产亚洲一区二区精品| 中文字幕av成人在线电影| 下体分泌物呈黄色| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品久久久久久av不卡| 伦精品一区二区三区| 成人特级av手机在线观看| 精品一区二区三卡| 各种免费的搞黄视频| 久久精品国产a三级三级三级| 国产一区二区在线观看日韩| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲国产精品成人久久小说| 在线天堂最新版资源| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 在线天堂最新版资源| 18禁在线无遮挡免费观看视频| www.av在线官网国产| 久久久精品94久久精品| 青春草视频在线免费观看| 一本色道久久久久久精品综合| 午夜精品国产一区二区电影 | 丝袜美腿在线中文| 99久久九九国产精品国产免费| 国产av国产精品国产| 久久鲁丝午夜福利片| 国产高清有码在线观看视频| 九色成人免费人妻av| 免费看日本二区| 国产真实伦视频高清在线观看| videossex国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 春色校园在线视频观看| 日本黄大片高清| 色婷婷久久久亚洲欧美| 熟女av电影| h日本视频在线播放| 青青草视频在线视频观看| 国产精品不卡视频一区二区| 久久ye,这里只有精品| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩av免费高清视频| 国产色爽女视频免费观看| 我的女老师完整版在线观看| av在线app专区| 一级毛片 在线播放| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 黄片无遮挡物在线观看| 一级黄片播放器| 亚洲精品,欧美精品| 国产亚洲一区二区精品| 黄片无遮挡物在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 只有这里有精品99| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产精品国产三级专区第一集| 最近的中文字幕免费完整| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲精品日本国产第一区| 国产精品久久久久久久电影| 最后的刺客免费高清国语| 全区人妻精品视频| 亚洲av免费高清在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 禁无遮挡网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费av观看视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 在线观看人妻少妇| 一本色道久久久久久精品综合| 国产一区有黄有色的免费视频| 美女国产视频在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲av男天堂| 最近最新中文字幕大全电影3| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产 一区 欧美 日韩| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产色婷婷99| 高清av免费在线| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 尾随美女入室| 最近中文字幕高清免费大全6| 网址你懂的国产日韩在线| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲欧美精品自产自拍| 人妻少妇偷人精品九色| 久久99精品国语久久久| 免费看日本二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 成人亚洲精品av一区二区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 97在线人人人人妻| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美变态另类bdsm刘玥| 午夜免费鲁丝| h日本视频在线播放| 能在线免费看毛片的网站| 免费观看av网站的网址| 乱系列少妇在线播放| 久久99精品国语久久久| 晚上一个人看的免费电影| 久久久久久伊人网av| 夜夜爽夜夜爽视频| 成人特级av手机在线观看| 人妻一区二区av| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美三级亚洲精品| 亚洲人与动物交配视频| 街头女战士在线观看网站| 免费黄色在线免费观看| 精品熟女少妇av免费看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产乱人视频| 干丝袜人妻中文字幕| 日韩精品有码人妻一区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品一区www在线观看| 只有这里有精品99| 99热6这里只有精品| 亚洲av日韩在线播放| 五月天丁香电影| freevideosex欧美| 欧美3d第一页| 草草在线视频免费看| 99热这里只有是精品50| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美人与善性xxx| 国产免费一区二区三区四区乱码| 三级国产精品欧美在线观看| 99热6这里只有精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 我的女老师完整版在线观看| 欧美潮喷喷水| 日韩成人av中文字幕在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 五月天丁香电影| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久精品久久久久久久性| av免费观看日本| 伊人久久国产一区二区| 高清av免费在线| 国产成人一区二区在线|