芻議血液進行核酸檢測的重要性

時玲玲河南省焦作市中心血站獻血辦，河南焦作　454000

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芻議血液進行核酸檢測的重要性

時玲玲
河南省焦作市中心血站獻血辦，河南焦作454000

［摘要］改革開放帶了的不僅僅是科技的發(fā)展和經(jīng)濟的進步，而且還帶來了一些新型的病毒，例如HIV病毒，乙肝病毒等，特別是HIV病毒，即艾滋病患者攜帶的病毒，到現(xiàn)在為止，依然沒有辦法治愈艾滋病，沾染了HIV就相當于宣告了死亡，HIV的傳播途徑中，有一項是血液傳播，而且，每年因為血液接觸而患上艾滋病的不再少數(shù)，所以對血液進行核算檢測是十分重要的。為了分析血液進行核酸檢測的重要性，該院對2015年上半年未進行核酸檢測和下半年進行核算建成進行對比，并得出結(jié)果對無償獻血者進行的核酸檢測，不但降低了輸血的風險，而且降低了血液浪費。下面首先介紹我血戰(zhàn)所做的研究與所得到的結(jié)果，其次介紹血液核酸檢測的一般方法，最后介紹核酸檢測的優(yōu)點。

［關(guān)鍵詞］血液；核酸檢測；重要性

核酸檢測已經(jīng)成為發(fā)達國家和發(fā)展中國家獻血者傳染病篩查的重要內(nèi)容，核酸檢測主要是通過對某些病毒的DNA進行檢測，以鑒定血液中是否存在這些病毒。核酸檢測可以有效地縮短病毒特異抗原和抗體免疫測定的“窗口期”，從而減少輸血風險，提高輸血安全。所謂窗口期是指人感染病毒后到外周血液中能夠檢測中該病毒抗體的這段時間。核酸檢測一般檢測的病毒有：（1）乙肝病毒，乙肝核酸檢測不僅可以縮短乙肝病毒感染的窗口期，而且還可以減少乙肝病毒攜帶者以及乙肝病毒變異的漏診率；（2）丙肝病毒，核酸檢測既可以將感染的檢測的窗口期，還可以減少免疫靜默感染的漏檢；（3）人類免疫缺陷病毒，即HIV病毒，可以縮短HIV感染檢測的窗口期［1］。

1　該血站血液核酸檢測中實踐與效果

國內(nèi)血站血液檢測大部分采用ELISA檢測方法，由于該方法本身的局限性，使臨床輸血傳播風險依舊存在。2010年我國部分血站開始核酸檢測試點，2012年原衛(wèi)生部頒布血站技術(shù)標準，將核酸檢測（NAT）納入血液檢測項目，開啟了我國血液NAT檢測時代。NAT可明顯縮短病毒檢測的“窗口期”，由于NAT檢測與ELLSA檢測組成的檢測系統(tǒng)可優(yōu)勢互補，提高了血液篩查的質(zhì)量，降低了輸血殘余風險，但由于核酸檢測代價高，使部分血站不愿意進行核酸檢測。該血站于2015年7月在省內(nèi)率先進行核算檢測，先將該站的研究結(jié)果匯報：通過研究對比得出，上半年不合格人數(shù)占上半年采血量的1%，下半年不合格人數(shù)占下半年采血量的0.5%，下半年不合格人數(shù)只占全年不合格人數(shù)的34%，充分說明進行核酸檢測后：①減少了血液浪費，保證了獻血隊伍。②縮短了窗口期，阻斷部分因ELLSA檢測“窗口期”漏檢而導致的輸血傳染病發(fā)生，從而降低輸血傳播性疾病風險，血液安全得到了大幅度的提升。③避免了假陽性的的出現(xiàn)，因獻血者得知自己如果是陽性病人時，由于對傳染病的認識不夠，會造成生活，工作，家庭面臨著巨大的壓力［2］。④從目前國內(nèi)部分血站的檢測數(shù)據(jù)看：HBV、HCV和HIV檢測的窗口期縮短，并且檢出了一定數(shù)量上ELISA試劑陰性的陽性樣品，從理論上分析可以在一定程度上減少輸血傳播疾病的風險。⑤目前該省已進行集中化檢測，該站接受來自省內(nèi)附近地市如安陽、濮陽、濟源、鶴壁的血樣，大大降低了血液檢測成本［3］。

2　血液核酸檢測的一般方法

2.1聚合酶連反應擴增方法

聚合酶連反應，即PCR，它是一種在體外模擬人體內(nèi)DNA的復制過程，從而擴增核酸的數(shù)量，最早使用電泳的方式擴增核酸，這種電泳方式不與外界隔離，所以目標核酸容易被污染，這種方式基本已經(jīng)被淘汰了。目前臨床上最常使用的是，利用熒光定量PCR，不僅可以用于各種傳染病的診斷，還可以對疾病治療之后的效果進行評估。利用熒光標記探針，然后與目標核酸雜交，就可以在PCR增值擴張之后，找到目標核酸，減少其他污染的核酸帶來的干擾，這樣就提高了核酸檢測的靈敏度和特異度［4］。

2.2轉(zhuǎn)錄介導法

這種方法包括TMA和核酸序列依賴擴增系統(tǒng)，TMA是利用一種特殊的逆轉(zhuǎn)錄酶和一種RNA多聚酶，在一定的溫度下，對RNA和DNA進行擴增的方法，其原理是：在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以病毒的核酸為模板，轉(zhuǎn)錄出另一條核酸，然后利用逆轉(zhuǎn)錄酶的功能將，原來模板與轉(zhuǎn)錄的核酸分離降解，然后利用RNA多聚酶，轉(zhuǎn)錄出多個RNA。核酸序列依賴擴增系統(tǒng)與TMA基本上相同，只不過是在核酸提取以及增值產(chǎn)物的方法上有所不同。這兩種方法相比較PCR來說，更加簡單，因為它需要的溫度是恒定的，所以反應過程簡單，效率相對較高［5］。

TMA與PCR有一些不同之處，主要表現(xiàn)在：第一，TMA是一種等溫的增值，它不需要PCR擴張技術(shù)中解鏈、退火、延伸三個過程中所需要的不同溫度；第二，TMA的技術(shù)產(chǎn)物是核酸即RNA，而PCR的產(chǎn)物是核糖核酸，即DNA；第三，TMA模擬的是DNA轉(zhuǎn)錄RNA的過程，而PCR模擬DNA復制為DNA的過程。兩種方法各有各的優(yōu)點，國內(nèi)大多都使用熒光標記PCR的技術(shù)，但是仍然有一些漏檢，所以學者還需要在血液篩查的技術(shù)上多做研究［6］。

3　核酸檢測的優(yōu)點

核酸檢測是直接將病毒的核酸做檢測的一系列技術(shù)的合稱，它的方法比較復雜，需要用到物理、化學、生物等多門學科的理論知識，通過把某種核酸增值，或?qū)⒑怂崴鶖y帶的信號放大，讓含量極少的核酸，變成可以直視的、形象的表現(xiàn)，從而判斷樣本中是否存在該種病毒［7］。

3.1提高檢出率，從而使輸血更加安全

國內(nèi)外做過大量的核酸檢測的研究，基本可以證明，核酸檢測可以減少各種原因?qū)е碌牟《韭z，從而使采集到的血液更加安全，也不會污染其他血液［8］。

3.2可以減少疾病再次傳播

核酸檢測的結(jié)果與第三代酶免檢測相結(jié)合可以反映出獻血者是否感染傳染病，以及獻血者的感染狀況，通過對核酸檢測陽性的獻血者，進一步檢查，追蹤尋訪，可以發(fā)現(xiàn)一些處于窗口期的獻血者，不僅保障血液的安全性，而且可以提醒獻血者及早就醫(yī)，降低獻血者因為不知情而傳染給他人的風險［9］。

3.3檢測模式更加優(yōu)化

核酸檢測可以使血液檢測的模式更加優(yōu)化，提高了檢測的檢出率，防止攜帶病毒的獻血者的血液污染其他質(zhì)量合格的血液，核酸檢測可以取代一些其他的血液檢測，例如可以取代2次第三代酶免檢測中的一次，或許也能取代谷丙轉(zhuǎn)氨酶的檢測。所以說核酸檢測可以將血站血液檢測的過程簡化，而不耽誤檢測的準確度，可以減少浪費，提高血站的工作效率。

3.4對輸血的風險進行評估

因為核酸檢測的高靈敏性，可以彌補第三代酶免檢測中的漏洞，能夠?qū)⒌谌该鈾z測漏檢的樣本重新檢測出來，并且通過計算機計算，可以得出我國經(jīng)過輸血傳播疾病的殘余風險，核酸檢測獲得的參與風險數(shù)據(jù)，可以作為金標準檢測或校正數(shù)學模型推算出來的參與風險的準確性，這樣也可以促進數(shù)學模型的進化。

雖然說核酸檢測有很多的優(yōu)點，但也有很多因素影響血液核酸檢測的結(jié)果。在檢測過程中要注意：第一，我國乙肝病毒的患者和攜帶者都比較多，所以，應該十分重視乙肝病毒的核酸檢測；第二，要重視核酸檢測工作的管理，在選擇篩選的試劑時，一定要選擇靈敏度和特異度都比較高的的試劑，尤其是乙肝病毒的篩選，一定要比其他病毒的篩選更加靈敏；第三，有的時候，為了降低檢測的成本，會將樣本混合檢測，這種檢測雖然降低成本，但是一旦其中有一個樣本有病毒，那么整個血液都會被浪費掉，所以要減少混合樣本的數(shù)量［10］。

4　結(jié)語

傳染病中有很大一部分都是通過血液傳播的。所以輸血的安全性是全世界都在關(guān)注的焦點，核酸檢測是一種檢測出獻血者是否攜帶病毒的有效的方式之一。該血站研究結(jié)果表明，核酸檢測可明顯縮短病毒檢測的“窗口期”，由于NAT檢測與ELLSA檢測組成的檢測系統(tǒng)可優(yōu)勢互補，提高了血液篩查的質(zhì)量，降低了輸血殘余風險。核酸檢測的方法最常見的為聚合酶連反應擴增方法以及轉(zhuǎn)錄介導法，兩種方法目的一致，但是，過程有一些不同。核酸檢測具有提高檢出率，從而使輸血更加安全、可以減少疾病再次傳播、檢測模式更加優(yōu)化、對輸血的風險進行評估等優(yōu)點，但是因為血液核酸檢測的特殊性，我們在檢測血液核酸時，也應關(guān)注其影響因素把不利因素隆到最低。

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Discussion on the Importance of Nucleic Acid Detection in Blood

SHI Ling-ling
Henan Province Jiaozuo City Blood Donation Office，Jiaozuo，Henan Province，454000 China

［Abstract］With the policy of reform and opening to the outside world is not only the progress of science and technology and the development of economy，but also bring some new virus，like HIV，hepatitis B virus，especially HIV，the AIDS patients carrying the virus，up to now，still do not have the means to cure AIDS，was infected with the HIV is a declaration of death，the routes of HIV transmission，is a blood borne，and the annual because of exposure to blood from AIDS is no longer a few，so the blood were accounting detection is very important.The importance of nucleic acid detection in order to analyze the blood，our hospital to 2015 half a year without nucleic acid detection and the second half of the accounting built were compared，and the result﹕nucleic acid detection of unpaid blood donors，not only reduces the risk of blood transfusion，and reduces the waste of liquid blood.Below introduces my bloody research and the obtained results，followed by the introduction of the general method of nucleic acid blood tests，finally introduces the advantages of nucleic acid detection.

［Key words］Blood；Nucleic acid detection；Importance

［中圖分類號］R450

［文獻標識碼］A

［文章編號］1672-5654（2016）03（a）-0107-03

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.07.107

［作者簡介］時玲玲（1980.6-），女，河南原陽人，本科，護師，主要從事輸血招募工作。

收稿日期：（2016-01-05）