五種甘肅道地中藥對(duì)衰老模型小鼠皮膚的抗衰老作用研究

王昱

(隴南師范高等專(zhuān)科學(xué)校生化系， 甘肅 成縣 742500)

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五種甘肅道地中藥對(duì)衰老模型小鼠皮膚的抗衰老作用研究

王昱

(隴南師范高等專(zhuān)科學(xué)校生化系， 甘肅 成縣 742500)

【目的】 研究5種甘肅道地中藥抗皮膚衰老作用的差異.【方法】 用D-半乳糖處理體外培養(yǎng)的小鼠皮膚成纖維細(xì)胞，分別用紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏的水煎液干預(yù)后，試劑盒法檢測(cè)皮膚成纖維細(xì)胞脂褐素(lipofuscin,LF)、羥脯氨酸(hydroxyproline,HYP)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性，ELISA法檢測(cè)Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，Western-blot檢測(cè)Bax蛋白的表達(dá)情況.【結(jié)果】 與正常組相比，模型組小鼠皮膚成纖維細(xì)胞LF、MDA、Ⅲ型膠原蛋白含量、細(xì)胞凋亡及Bax蛋白表達(dá)顯著增加，Ⅰ型膠原蛋白和HYP含量、細(xì)胞增殖能力及SOD、GSH-Px 活性均顯著降低.與模型組比較，各中藥組小鼠皮膚成纖維細(xì)胞LF、MDA、Ⅲ型膠原蛋白含量、細(xì)胞凋亡及Bax蛋白表達(dá)呈降低趨勢(shì)，Ⅰ型膠原蛋白和HYP含量、細(xì)胞增殖能力及SOD、GSH-Px活性均呈增高趨勢(shì)，其中紋黨組和紅芪組上述指標(biāo)改變更為明顯.【結(jié)論】 紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏的水煎液可通過(guò)促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞增殖、提高抗氧化能力和抑制皮膚細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗皮膚衰老的作用，紋黨和紅芪對(duì)皮膚的調(diào)節(jié)作用優(yōu)于當(dāng)歸、大黃和半夏.

道地中藥；皮膚成纖維細(xì)胞；氧化損傷；細(xì)胞凋亡；小鼠

人體衰老是一個(gè)全方位、多因素、系統(tǒng)的退行性過(guò)程，成為心血管疾病、癌癥等許多疾病的危險(xiǎn)因素，嚴(yán)重危害健康，影響生活質(zhì)量，但其發(fā)生機(jī)制目前還不十分清楚[1].皮膚成纖維細(xì)胞是真皮內(nèi)主要的修復(fù)細(xì)胞和創(chuàng)傷愈合的關(guān)鍵與基礎(chǔ)，是皮膚老化過(guò)程中重要的效應(yīng)細(xì)胞，也是分泌膠原蛋白的主要細(xì)胞，其正常的增殖、生長(zhǎng)對(duì)于維持皮膚正常的結(jié)構(gòu)和生理功能具有重要意義[2-3].中醫(yī)藥獨(dú)特的理論體系為人們提供了一條有別于其他藥物防治衰老的新治療途徑.由于中藥具有活性成分多、作用靶點(diǎn)多、給藥途徑多、不良反應(yīng)小等特點(diǎn)使其具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，在抗衰老的研究中顯示出巨大的優(yōu)勢(shì)和潛力，其藥理學(xué)功能有延緩衰老、抗氧化、調(diào)節(jié)體液免疫、促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖、影響免疫器官的功能等[4-5].

甘肅省隴南地區(qū)的土壤、水質(zhì)、氣候、雨量等自然條件很適合中藥材的生長(zhǎng)，是中國(guó)主要中藥材產(chǎn)地之一，如文縣的紋黨、武都的紅芪、宕昌的當(dāng)歸、禮縣的大黃和西和的半夏等道地中藥材品種優(yōu)良、療效突出.已有文獻(xiàn)報(bào)道，紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏有延緩衰老、抗氧化、抗病毒、提高機(jī)體免疫力等功能[6-10].本研究旨在分析比較紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏對(duì)衰老模型小鼠皮膚影響的差異，以期為進(jìn)一步指導(dǎo)臨床合理用藥奠定基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

甘肅武都產(chǎn)紅芪、宕昌產(chǎn)當(dāng)歸、文縣產(chǎn)紋黨、禮縣產(chǎn)大黃、西和產(chǎn)半夏(由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)李唯教授鑒定)，D-半乳糖(北京優(yōu)尼康生物科技)，刀豆蛋白 A(ConA)和四甲基偶氮唑鹽(MTT)(美國(guó)Sigma 公司)，DMSO(上海碧云天生物技術(shù)公司)，脂褐素(LF)和羥脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所)，Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、兔抗Bax蛋白抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM(美國(guó)Gibco公司)，β-actin抗體、HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG(上海碧云天生物技術(shù)研究所)，0.45 μm 硝酸纖維膜(Solarbio公司).二氧化碳培養(yǎng)箱(日本 Sanyo公司)；FACS420型流式細(xì)胞儀(美國(guó)B-D公司生產(chǎn))，SpectraMax M5型酶標(biāo)儀(Molecular Devices,美國(guó))，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(ELx800，美國(guó)BioTek公司)，高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)(TGL-16M，Beckman美國(guó))等.出生4 d清潔級(jí)昆明小鼠(蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK(甘)2009-0004)，體質(zhì)量(3±1)g.

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 中藥水煎劑溶液的制備 稱(chēng)取中藥50 g置砂鍋中，加10倍量水浸泡過(guò)夜，加熱至沸，改用文火煎30 min，趁熱濾過(guò)，濾渣另加8倍量水，同法煎煮30 min、濾過(guò)，合并2次濾液于燒杯中[11]，水浴濃縮后放涼至室溫，100 mL容量瓶定容，倒入輸液瓶中，蓋薄膜，壓膠塞和鋁蓋，高壓滅菌(表壓0.7 kg/cm2、115 ℃、30 min)，取出放涼稀釋為1 g/kg溶液備用.

1.2.2 小鼠皮膚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和給藥 參照文獻(xiàn)[12-13]，取小鼠背部皮膚，去除皮下脂肪，放入盛有無(wú)血清HBSS液(Hanks平衡鹽緩沖溶液)的培養(yǎng)皿中沖洗，用眼科剪剪成1 mm3左右的碎塊，0.25%胰蛋白酶和0.01%的EDTA消化液30 min，4 ℃消化3 h；分離表皮和真皮層，將真皮剪成0.5 mm3左右的小組織塊，貼附于含DMEM培養(yǎng)液的玻璃壁表面，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育，2～3 d換液1次，待細(xì)胞融合后，正常傳代.將第4代成纖維細(xì)胞按1.0×106/瓶接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，當(dāng)細(xì)胞至亞融合狀態(tài)時(shí)，分別加入0(正常組)、D-半乳糖40 g/L(模型組)、紅芪6 mg/mL+D-半乳糖40 g/L(紅芪組)、當(dāng)歸6 mg/mL+D-半乳糖40 g/L(當(dāng)歸組)、紋黨6 mg/mL+D-半乳糖40 g/L(紋黨組)、大黃6 mg/mL+D-半乳糖40 g/L(大黃組)和半夏6 mg/mL+D-半乳糖40 g/L(半夏組)，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞備用.

1.2.3 皮膚細(xì)胞LF、HYP含量及抗氧化能力的測(cè)定 向給藥后收集的細(xì)胞中加入適量的IP細(xì)胞裂解液，冰上作用30 min使細(xì)胞完全裂解，離心取上清液，嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)測(cè)定細(xì)胞中LF、HYP、MDA含量及SOD、GSH-Px活性.

1.2.4 膠原蛋白含量的測(cè)定 同1.2.3法取上清液，按照ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，檢測(cè)Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白的含量.

1.2.5 細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 將收集的成纖維細(xì)胞于預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)中，用彎頭吸管反復(fù)吹打成單細(xì)胞懸液，離心 5 min(3 000 r/min)，棄上清液，用75%乙醇固定、4 ℃過(guò)夜，再用PBS洗滌離心、重新懸浮，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/mL，加入碘化丙啶(PI)100 μL和RNA酶50 μg，37 ℃孵育30 min后，用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞的凋亡情況.

1.2.6 成纖維細(xì)胞增殖能力的測(cè)定 將成纖維細(xì)胞懸液加入 96孔培養(yǎng)板，每孔100 μL，每個(gè)樣本設(shè)8個(gè)復(fù)孔，其中4孔每孔加100 μL Con A(終濃度為 5 mg/L)，另外4孔作為對(duì)照，于37 ℃ 5% CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)68 h，每孔加10 μL MTT(濃度為5 g/L)，在振蕩器上振蕩混勻，繼續(xù)培養(yǎng)4 h.細(xì)胞培養(yǎng)終止后，棄上清，每孔加入100 μL DMSO，振蕩混勻，靜置數(shù)分鐘，測(cè)定每孔的D570nm值.

1.2.7 Western-blot各組蛋白質(zhì)表達(dá) 按照常規(guī)方法提取細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)定總蛋白濃度.定量后稀釋好的樣品經(jīng)過(guò)SDS-PAGE凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜、封閉(5%脫脂奶粉，用TBST稀釋).將膜取出，加一抗Bax蛋白(濃度為1∶1 000)，4 ℃冰箱過(guò)夜，充分洗滌，加偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的二抗(濃度為1∶5 000)，室溫下作用1 h，洗膜后加ECL發(fā)光液，以β-actin作為內(nèi)參照，運(yùn)用Image Lab軟件進(jìn)行曝光成像，采用Quantity one軟件分析條帶灰度值，試驗(yàn)重復(fù)3次.

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 成纖維細(xì)胞脂褐素(LF)、羥脯氨酸(HYP)含量的比較

與正常組相比，模型組成纖維細(xì)胞LF的含量顯著增加，HYP的含量顯著降低(P<0.01).紋黨組、紅芪組成纖維細(xì)胞LF的含量顯著低于模型組，HYP的含量顯著高于模型組(P<0.05)，紋黨組成纖維細(xì)胞LF和HYP的含量與紅芪組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，當(dāng)歸組、大黃組和半夏組間成纖維細(xì)胞LF和HYP的含量與模型組相比，無(wú)顯著差異(P>0.05，圖1).

同列數(shù)據(jù)標(biāo)有不同大寫(xiě)字母者表示組間差異極顯著(P<0.01)，標(biāo)有不同小寫(xiě)字母者表示組間差異顯著(P<0.05).圖1 五種中藥對(duì)成纖維細(xì)胞LF、HYP含量的影響Fig.1 Effects of five kinds of Chinese herbs on the contents of LF and HYP in fibroblast cells

2.2 細(xì)胞增殖能力的比較

與正常組相比，模型組成纖維細(xì)胞增殖能力極顯著降低(P<0.01).紋黨組、紅芪組和當(dāng)歸組成纖維細(xì)胞增殖能力極顯著高于模型組(P<0.05，P<0.01)，紋黨組成纖維細(xì)胞增殖能力與紅芪組和當(dāng)歸組差異顯著(P<0.05)，紅芪組成纖維細(xì)胞增殖能力與當(dāng)歸組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，大黃組和半夏組成纖維細(xì)胞增殖能力與模型組相比，無(wú)顯著差異(P>0.05，圖2).

圖2 五種中藥對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響Fig.2 Effects of five kinds of Chinese herbs on the ability of cell proliferation

2.3 細(xì)胞抗氧化能力的比較

與正常組相比，模型組成纖維細(xì)胞SOD、GSH-Px活性顯著降低，MDA含量顯著增加(P<0.01).各給藥組成纖維細(xì)胞SOD、GSH-Px活性均高于模型組，MDA含量均低于模型組，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05).紋黨組和紅芪組成纖維細(xì)胞SOD、GSH-Px、MDA水平與當(dāng)歸組、大黃組和半夏組差異顯著(P<0.05)，紋黨組和紅芪組間無(wú)差異(P>0.05)，當(dāng)歸組、大黃組和半夏組間無(wú)顯著性差異(P>0.05，圖3).

圖3 五種中藥對(duì)細(xì)胞SOD、GSH-Px、MDA水平的影響Fig.3 Effect of five kinds of Chinese herbs on levels of SOD,GSH-Px and MDA

2.4 Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量的比較

與正常組相比，模型組成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白含量極顯著降低(P<0.01)，Ⅲ型膠原蛋白含量顯著升高(P<0.05).與模型組相比，各給藥組成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白含量均呈升高趨勢(shì)，Ⅲ型膠原蛋白含量均呈降低趨勢(shì).紋黨組和紅芪組成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白含量顯著高于模型組，Ⅲ型膠原蛋白含量顯著低于模型組(P<0.05)，紋黨組和紅芪組間無(wú)顯著差異(P>0.05).其余各給藥組成纖維細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量與模型組相比，無(wú)顯著差異(P>0.05，圖4).

圖4 五種中藥對(duì)Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量的影響Fig.4 Effects of five kinds of Chinese herbs on contents of typeⅠand type Ⅲ collagen

2.5 成纖維細(xì)胞凋亡的比較

與正常組相比，模型組成纖維細(xì)胞的凋亡率顯著升高(P<0.01).與模型組相比，各給藥組成纖維細(xì)胞的凋亡率均呈降低趨勢(shì).紋黨組、紅芪組和當(dāng)歸組成纖維細(xì)胞的凋亡率顯著低于模型組，差異具有顯著性(P<0.05，P<0.01)，紋黨組成纖維細(xì)胞的凋亡率與紅芪組和當(dāng)歸組相比差異極顯著(P<0.05)，紅芪組成纖維細(xì)胞的凋亡率與當(dāng)歸組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，大黃組和半夏組成纖維細(xì)胞的凋亡率與模型組相比，無(wú)顯著差異(P>0.05，圖5).

圖5 五種中藥對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響Fig.5 Effects of five kinds of Chinese herbs on apoptosis rate

2.6 Western-blot蛋白質(zhì)表達(dá)的比較

與正常組比較，模型組成纖維細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)明顯增加，差異極顯著(P<0.01).各給藥組與模型組比較，紋黨組、紅芪組和當(dāng)歸組成纖維細(xì)胞Bax蛋白的表達(dá)降低明顯(P<0.05，P<0.01).紋黨組成纖維細(xì)胞Bax蛋白的表達(dá)顯著低于紅芪組和當(dāng)歸組(P<0.05)，紅芪組和當(dāng)歸組間無(wú)顯著差異(P>0.05).大黃組和半夏組成纖維細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)與模型組比較均無(wú)明顯差異(P>0.05，圖6).Bax蛋白積分吸光度值與β-actin積分吸光度值的比值見(jiàn)圖7.

1：正常組；2：模型組；3：紋黨組；4：紅芪組；5：當(dāng)歸組；6：大黃組；7：半夏組.圖6 成纖維細(xì)胞Bax蛋白印跡分析Fig.6 The Western-blot result of Bax protein in fibroblast cells

圖7 五種中藥對(duì)成纖維細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)的影響Fig.7 Effects of five kinds of Chinese herbs on expression of Bax protein in fibroblast cells

3 討論

衰老是機(jī)體的生理功能逐漸下降，組織器官逐步發(fā)生退行性改變，并最終走向死亡的過(guò)程.據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃、半夏及其有效提取物能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)、增強(qiáng)抗氧化能力等，具有抗衰老、降血糖、抗腫瘤等生理功能[6-10].為了更好區(qū)別紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏藥理作用，試驗(yàn)從促進(jìn)細(xì)胞增殖力、抗氧化及抑制皮膚細(xì)胞凋亡等相關(guān)指標(biāo)著手，探討紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏水提物對(duì)衰老皮膚成纖維細(xì)胞的影響.

皮膚衰老的特征是失去彈性和柔軟性，出現(xiàn)皺紋、干燥角化、色素過(guò)量沉積等.自由基學(xué)說(shuō)認(rèn)為機(jī)體氧化-抗氧化平衡障礙與衰老的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)[14]，體內(nèi)如SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性降低，清除自由基能力下降，脂質(zhì)過(guò)氧化終產(chǎn)物MDA增多，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死[15]，從而引起皮膚的衰老.研究表明[16]，隨著年齡增加，體內(nèi)MDA含量增高，SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性降低，且SOD、GSH-Px活性與物種壽命呈正相關(guān).MDA是活潑的交聯(lián)劑，可與蛋白質(zhì)、肽類(lèi)、脂類(lèi)結(jié)合，在衰老的細(xì)胞中形成LF，出現(xiàn)黃褐色老年斑.LF為黃褐色不規(guī)則小體，是溶酶體作用后剩下不再能被消化的物質(zhì)而形成的殘余體，其含量隨年齡增長(zhǎng)而增多，是衰老的重要指征之一[17].

皮膚是否保持光滑細(xì)嫩主要取決于真皮下的膠原蛋白.膠原蛋白作為細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，主要包括Ⅰ型膠原蛋白(約85%)、Ⅲ型膠原蛋白(約10%)及其他類(lèi)型的膠原蛋白(約5%).Ⅰ型膠原在真皮中聚集成束，交織成網(wǎng)，賦予皮膚機(jī)械性與充盈感，維持皮膚張力；Ⅲ型膠原是一種幼稚的膠原纖維，是構(gòu)成真皮中網(wǎng)狀纖維的主要成分.當(dāng)皮膚衰老時(shí)，Ⅰ型膠原蛋白越來(lái)越少，Ⅲ型膠原蛋白逐漸增多，真皮中膠原整體由Ⅰ型向Ⅲ型膠原轉(zhuǎn)變[18].HYP是膠原纖維與膠原蛋白中的一種重要而且含量穩(wěn)定的氨基酸，約占其總量13.4%，機(jī)體內(nèi)自由基大量增加可引起膠原蛋白交聯(lián)、老化，失去彈性[19].

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組小鼠皮膚成纖維細(xì)胞LF、MDA、Ⅲ型膠原蛋白含量、細(xì)胞凋亡率及Bax蛋白表達(dá)顯著增加，Ⅰ型膠原蛋白和HYP含量、細(xì)胞增殖能力及SOD、GSH-Px 活性均顯著降低.中藥紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏可降低皮膚成纖維細(xì)胞LF、MDA、Ⅲ型膠原蛋白含量、細(xì)胞凋亡率及Bax蛋白的表達(dá)，增加Ⅰ型膠原蛋白和HYP含量、提高細(xì)胞增殖能力及SOD、GSH-Px的活性，其中紋黨組、紅芪組皮膚成纖維細(xì)胞的上述指標(biāo)與模型組間差異顯著，提示這5種道地中藥在促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞增殖、抗脂質(zhì)過(guò)氧化和清除氧自由基及抑制皮膚細(xì)胞凋亡的作用方面具有相似的藥理作用，而紋黨、紅芪在延緩小鼠皮膚的衰老方面優(yōu)于當(dāng)歸、大黃和半夏.多糖類(lèi)成分是近年來(lái)中藥天然藥物研究領(lǐng)域中倍受關(guān)注的一類(lèi)重要成分，其藥理作用廣泛，獨(dú)特的生物活性和低毒特點(diǎn)在臨床應(yīng)用中具有極大的潛力[20].多糖也是中藥紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏的重要活性成分之一，其在藥理學(xué)方面的研究已有大量報(bào)道[6-10].紅芪、黃芪和當(dāng)歸等中藥的水提物對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)均有廣泛的作用[21-22].但紋黨、紅芪、當(dāng)歸、大黃和半夏的主要活性成分各異，生物學(xué)效應(yīng)也不盡相同，抗衰老機(jī)制是否相同？還需進(jìn)一步研究.

綜上所述，紋黨、紅芪等水煎液對(duì)衰老模型小鼠的皮膚均有不同程度調(diào)整作用，尤以紋黨、紅芪作用為甚.這種作用可能與皮膚成纖維細(xì)胞的抗氧化酶活性、細(xì)胞增殖力、細(xì)胞凋亡等變化有關(guān).據(jù)此，在治療臨床皮膚衰老進(jìn)程時(shí)可以?xún)?yōu)選紋黨和紅芪，也為道地中藥復(fù)方的開(kāi)發(fā)提供了試驗(yàn)依據(jù).

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(責(zé)任編輯 李辛)

Anti-aging action of five Gansu genuine traditional Chinese medicines on the skin of aging model mice

WANG Yu

(Department of Biology and Chemistry,Longnan Teachers College,Chengxian 742500,China)

【Objective】 To research the difference in anti-aging effect of five kinds of Gansu genuine Chinese herbal medicines on skin of the aging model mice.【Method】 The mice skin fibroblast cells cultured in vitro induced by D-galactose were treated with the water decoction ofCodonopsispilosula,Astragaliradix,Angelicasinensis,RheumpalmatumandPinelliaternateto measure the content of lipofuscin (LF),hydroxyproline (HYP) and malondialdehyde (MDA),activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) by commercial kit.The contents of typeⅠand type Ⅲ collagen and cell proliferation was determined by ELISA and MTT method,respectively.The apoptosis rate and expression of Bax protein was detected by flow cytometry and Western blot,respectively.【Result】 Compared with normal control group,the levels of LF,MDA,type Ⅲ collagen,cell apoptosis and Bax protein expression in skin fibroblast cells markedly increased in aging model group,but the content of typeⅠcollagen and HYP,cell proliferation and activities of SOD、GSH-Px reduced significantly.Compared with model group,the levels of LF,MDA,type Ⅲ collagen,cell apoptosis and Bax protein expression in skin fibroblast cells showed decreasing trend,however,the content of typeⅠcollagen and HYP,cell proliferation and activities of SOD、GSH-Px tended to increase in herb groups and the above indexes changed more significant in theCodonopsispilosulagroup andAstragaliradixgroup.【Conclusion】 The water decoction ofCodonopsispilosula,Astragaliradix,Angelicasinensis,RheumpalmatumandPinelliaternatacould exert antiaging effect on aging in skin fibroblast cells by enhancing cell proliferation,antioxidant capacity and inhibiting apoptosis.CodonopsispilosulaandAstragaliradixhad better regulation effects on skin thanAngelicasinensis,RheumpalmatumandPinelliaternata.

genuine traditional Chinese medicines;skin fibroblast cells;oxidative damage;apoptosis;mouse

王昱(1973-)，男，教授，碩士，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物藥理研究.E-mail:gswangyu@126.com

甘肅省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(1107RJZK243);甘肅省高等學(xué)?？蒲匈Y助項(xiàng)目(2015B-148).

2015-10-12；

2016-04-08

R 28

A

1003-4315(2016)06-0011-06