骨折斷端血與靜脈血提取的富血小板血漿中TGF及PDGF含量比較

赫蘭學馬震卓丁雪峰李建杰

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骨折斷端血與靜脈血提取的富血小板血漿中TGF及PDGF含量比較

赫蘭學1馬震卓2丁雪峰3李建杰3

【摘要】目的 分析骨折斷端血與靜脈血提取的富血小板血漿中TGF及PDGF含量。方法 將11只大白兔作為實驗對象，取骨折斷端血，為實驗組，隨機抽取7只采取靜脈血作為對照組。相同方法提取PRP，比較兩組PRP中的PDGF及TGF-β含量。結(jié)果 骨折斷端血提取的PRP中的TGF與PDGF均高于靜脈血提取PRP中的TGF與PDGF濃度。結(jié)論 從骨折斷端血中提取的PRP中的PDGF及TGF-β含量高于靜脈血PRP。

【關(guān)鍵詞】兔；骨折愈合；富血小板血漿

為比較骨折斷端血與靜脈血提取的富血小板血漿中TGF及PDGF含量，本研究選取大白兔展開動物實驗，分析如下。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

1.1.1 實驗動物 新西蘭大白兔。

1.1.2 主要實驗試劑 兔PDGF抗體，兔TGF-β抗體，兔PDGF-ELISA試劑盒，兔TGF-β-ELISA試劑盒（美國進口），即用型免疫組織化學SP試劑盒。

1.2 研究方法

1.2.1 實驗 選用7～8月齡健康雄性新西蘭大白兔11只（3 000±400 g），隨機選取7只抽取靜脈血做為對照組。

（1）實驗方法：固定實驗室及設(shè)備，同一術(shù)者，同一檢驗員。①對照組（靜脈血）：分別從選取的7只兔耳緣靜脈中抽取靜脈血標本3 ml，離心分離富血小板血漿。分離方法：離心力200 g，第一次離心10 min，之后移液注射器抽去分界面2 mm以下紅細胞，再次相同離心力相同時間離心后，抽去上3/4液體，所剩余為PRP。②實驗組（斷端血）：將11只實驗兔靜脈麻醉后，在兔右股骨髁上制造閉合性骨折。骨折1 h候后，麻醉狀態(tài)下手術(shù)暴露股骨髁上骨折斷端，采用枸櫞酸鈉做為抗凝劑，收集并留取骨折斷端積血3 ml，同法離心，提取PRP。（2）術(shù)后處理：對兩組PRP標本應用ELISA試劑盒分別檢測兔血小板衍生生長因子（PDGF）及兔轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包分析數(shù)據(jù)，以（±s）表示計量資料并行t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

骨折斷端血提取的PRP中的TGF與PDGF含量（0.248 773± 0.035 300）、（0.288 518±0.023 600），均高于靜脈血提取PRP中的（0.154 614±0.020 440）、（0.138 814±0.010 386）（P＜0.05）。

3 討論

TGF-β是一種趨化因子，可以刺激前成骨細胞及成骨細胞的分裂增殖，同時抑制破骨細胞增殖，進而抑制骨吸收。在骨折早期，血小板脫顆粒，釋放大量的TGF-β，誘導成骨細胞活化增殖，使骨膜增生，促進膜內(nèi)成骨，加速成骨細胞產(chǎn)生I型膠原，分泌骨聯(lián)結(jié)素，合成骨橋蛋白，在此過程中TGF-β發(fā)揮了強大的趨化作用［1］。TGF-β可以增強間充質(zhì)干細胞遷移、擴散與分化，化學趨化骨細胞，促使產(chǎn)生細胞外基質(zhì)，加速形成軟骨，軟骨化骨后形成骨痂組織，增加骨組織強度［2］。

PDGF可以促使成骨細胞分泌較多護骨素（OPG），OPG可以減少破骨細胞生成，從而抑制骨吸收，使骨量增加［3］。PDGF在組織中可以促細胞有絲分裂，還具有化學趨化性，可以刺激成纖維細胞、成骨細胞及血管內(nèi)皮細胞等的有絲分裂、遷移，增殖，從而促進組織蛋白合成，加快修復創(chuàng)傷［4］。

PRP有較高濃度的血小板和多種生長因子，在臨床工作中用來促進創(chuàng)面及創(chuàng)口愈合，促進骨修復等［5］。骨折斷端血腫由動、靜脈血及骨髓血組成，血腫激化，部分血小板脫顆粒。生長因子從纖維蛋白結(jié)構(gòu)中釋放，通過化學鍵同血小板結(jié)合，從而使生長因子延長作用的時間［6］。秦立武等［7］應用PRP治療股骨頸骨折，通過向早中期閉合復位空心釘內(nèi)固定的股骨頸骨折端注射PRP，誘導骨折斷端新血管生成，使骨折斷端血運重建加速，從而促進骨折愈合，降低骨折不愈合及股骨頭缺血壞死等風險的。王善正等［8］通過研究證明，兔骨髓間充質(zhì)干細胞在富血小板血漿的誘導下可以向成軟骨細胞方向分化。

實驗通過對比靜脈血提取PRP與骨折斷端血提取的PRP中能促進骨生長的生長因子（TGF、PDGF）含量研究，證明了利用骨折斷端血提取PRP如果回植骨折斷端，可獲得更多的生長因子，更有利用骨折愈合，促進骨早期修復。

參考文獻

［1］ 王天祥，鄒高峰，王秋旭，等.富血小板血漿PDGF-AB、TGF-β1含量與血小板計數(shù)的關(guān)系［J］.山東醫(yī)藥，2012，52（45）：61-63．

［2］ 黃敏紅，黎洪棉，梁至潔，等.自體富血小板纖維蛋白復合脂肪干細胞對自體脂肪組織移植存活的影響［J］.中華實驗外科雜志，2015，32（12）：3010-3015．

［3］ 孫金環(huán)，郭良微，周晉，等.富血小板血漿復合脫鈣牙本質(zhì)基質(zhì)修復頜骨缺損的實驗研究［J］.臨床口腔醫(yī)學雜志，2015（12）：734-739．

［4］ 付維力，李棋，李箭.富血小板血漿制備技術(shù)及其組分的研究進展［J］.中國修復重建外科雜志，2014（12）：1560-1564．

［5］ 弓長麗，楊廣民.肝硬化患者凝血酶原時間及血小板的檢驗分析［J］.中國繼續(xù)醫(yī)學教育，2015，7（17）：21-22．

［6］ 楊世茂，王明國，李靜，等.富血小板纖維蛋白與富血小板血漿體外釋放生長因子的比較及其對脂肪干細胞增殖分化的影響［J］．華西口腔醫(yī)學雜志，2012，30（6）： 641-644，649．

［7］ 秦立武，姜紅江，黃相杰，等.富血小板血漿聯(lián)合空心釘治療股骨頸骨折的療效觀察［J］.中國骨與關(guān)節(jié)損傷雜志，2014，29（12）：1250-1251．

［8］ 王善正，王宸，芮云峰.自體激活富血小板血漿干預兔骨髓間充質(zhì)干細胞體外成軟骨分化的研究［J］．中國組織工程研究，2013 （1）： 1-8．

Comparison of TGF and PDGF Levels in Platelet Rich Plasma Extracted From the Blood and Venous Blood of Fracture

HAO Lanxue1MA Zhenzhuo2DING Xuefeng3LI Jianjie31 Spinal Surgery，Central Hospital of Jilin City，Jilin Jilin 132001，China，2 Radiology Department，General Hospital of Jilin Chemical Group Company，Jilin Jilin 132021，China，3 Clinical Laboratory，General Hospital of Jilin Chemical Group Company，Jilin Jilin 132021，China

【Abstract】Objective To analysis of fracture end and venous blood from the blood platelet rich plasma TGF and PDGF content.Methods 11 big white rabbit as experimental object，take the blood of fracture end，as the experimental group，7 venous blood was taken as the control group randomly.The same method to extract the PRP，compare two groups of PDGF and TGF-beta content in PRP.Results The extraction of TGF PRP of fracture end blood and PDGF were higher than in venous blood extract concentration of PRP TGF and PDGF.Conclusion Extracted from the fracture end blood PRP PDGF and TGF-beta content is higher than that of venous blood in PRP．

【Key words】Rabbit，F(xiàn)racture healing，Platelet rich plasma

【中圖分類號】R683

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）07-0065-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．07．050

作者單位：1 吉林市中心醫(yī)院脊柱外科，吉林 吉林 132001 ；2 吉化集團公司總醫(yī)院放射科，吉林 吉林 132021 3 吉化集團公司總醫(yī)院檢驗科，吉林 吉林 132021