紫檀芪對腸缺血再灌注損傷的保護作用和機制研究

孫 洋 常 青 崔 嵐

紫檀芪對腸缺血再灌注損傷的保護作用和機制研究

孫 洋 常 青 崔 嵐

目的 本研究擬通過建立腸缺血再灌注動物模型，分析紫檀芪對腸缺血再灌注損傷的作用和相關機制。方法 選用雄性健康清潔級 Wistar大鼠，隨機分四組，造模通過無創(chuàng)小動脈夾夾閉腸系膜上動脈30 min，再灌注 24 h。取腸組織切片進行HE染色和光鏡觀察腸組織損傷。結果 應用紫檀芪預先作用，其腸組織結構損傷明顯減輕。結論 本研究證實紫檀芪預處理腸缺血再灌注可減輕腸組織的病理損傷，為治療藥物提供參考依據。為進一步深入研究對腸缺血再灌注損傷的保護作用和機制提出理論基礎。

紫檀芪；腸缺血再灌注；病理損傷

腸組織是對缺血性損傷最為敏感的內臟器官。腸缺血再灌注損傷在眾多臨床疾病或應激狀態(tài)過程中，尤其是大面積燒傷、腸套疊、嚴重創(chuàng)傷、重癥胰腺炎、休克以及小腸移植等外科手術病理生理過程中扮演著重要的角色［1-2］。紫檀芪具有多重保健作用和藥理作用，因此本研究擬通過建立腸缺血再灌注動物模型，應用紫檀芪進行相關干預，分析紫檀芪對腸缺血再灌注損傷的作用和相關機制。

1　資料與方法

1.1動物飼養(yǎng)與分組

選取清潔級 Wistar大鼠，24只，雄性，鼠齡6～8周，體重150～250 g，平均體重（180±30）g，以隨機數(shù)字表法將大鼠隨機分為4組，每組6只：第1組（Group I）（sham group）：假手術組；第2組（Group II）（Intestinal I/R）：大鼠腸缺血再灌注模型組；第3組（Group III）（Pterostilbene）：給予紫檀芪組；第4組（Group IV）（Pterostilbene+Intestinal I/R）：紫檀芪作用于大鼠腸缺血再灌注模型。

1.2建立大鼠腸缺血再灌注模型

在常規(guī)飼養(yǎng)適應和相關處理后，根據隨機分組結果，分別對第2組和第4組（在給予紫檀芪作用后）大鼠進行腸缺血再灌注模型制備。手術前，將實驗組大鼠禁食12 h，但可以進水。利用1 500 mg/kg安甲酸乙酯和10 mg/kg甲苯噻嗪注射 2～5 min后分別麻醉大鼠，應用加熱燈使整個手術操作過程大鼠體溫維持在37.5°C，利用聚維酮碘溶液對大鼠腹部手術區(qū)域消毒并刮毛，以大鼠的腹正中線為手術切口，充分暴露腹主動脈近端游離腸系膜動脈，利用無創(chuàng)小動脈夾夾閉腸系膜上動脈（SMA），用肉眼觀察SMA的變化，當夾閉后，分別觀察腸系膜動脈搏動，腸組織顏色以及腸蠕動三項指標，其中腸缺血模型成功標志包括腸系膜動脈搏動減弱乃至消失，腸組織顏色由粉紅色變得蒼白，腸蠕動減弱。

2　結果

2.1大鼠一般狀態(tài)觀察

觀察24 h，結果可見，各組大鼠均未出現(xiàn)死亡。第1組（Group I）假手術組大鼠毛色光滑，進食、睡眠略少，但活動受限受手術影響較??；第2組（Group II）：大鼠腸缺血再灌注模型組大鼠食欲降低，進食、飲水均減少，精神萎靡，活動較少，遲緩；第3組（Group III）給予紫檀芪組大鼠，毛色光滑，進食、睡眠正常，正常活動，各方面狀態(tài)優(yōu)于其他各組；第4組（Group IV）紫檀芪作用于大鼠腸缺血再灌注模型飲食、進食情況好于腸缺血再灌注模型組，精神狀態(tài)和活動量也優(yōu)于大鼠腸缺血再灌注模型組大鼠。

2.2各組大鼠腸組織組織學狀態(tài)觀察

結果顯示假手術組（Group I）大鼠腸系膜動脈搏動正常，腸蠕動正常，而腸組織顏色保持正常粉紅色。第2組（Group II）：大鼠腸缺血后可見腸系膜動脈搏動減弱乃至消失，腸組織顏色由粉紅色變得蒼白，腸蠕動減弱，而經過再灌注治療后，可見出現(xiàn)腸系膜動脈搏恢復搏動，腸組織顏色由淺白色重新恢復為粉紅色，腸蠕動增強，但出現(xiàn)腸壁充血水腫，腸脹氣，以及腸粘膜節(jié)段性改變。第3組（Group III）與假手術組一致，腸系膜動脈搏動正常，腸蠕動正常，而腸組織顏色保持正常粉紅色。第4組（Group IV）紫檀芪作用于大鼠腸缺血再灌注模型可見雖也有腸缺血再灌注的三個標志腸系膜動脈搏從搏動減弱到恢復搏動，腸蠕動減弱到增強，以及腸組織顏色由粉紅色變得蒼白再到粉紅色，但未見腸壁充血水腫，腸脹氣，以及腸黏膜節(jié)段性改變［3］。提示紫檀芪預處理對腸缺血再灌注損傷可能有一定的保護作用。

進一步通過HE染色并在光鏡下觀察各組大鼠腸組織病理學改變觀察。結果可見，假手術組（Group I）大鼠腸系膜組織結構正常，無病理改變，腸絨毛結構并未被破壞，并未發(fā)生黏膜出血、壞死、水腫。第2組（Group II）大鼠腸缺血再灌注損傷后，可見出現(xiàn)不同程度的固有層出現(xiàn)出血、壞死、水腫，固有層結構破壞，同時可見大量浸潤在周圍的中性粒細胞，導管擴張，絨毛尖端完全剝脫，隱窩層出現(xiàn)不同程度的損傷，嚴重者出現(xiàn)跨黏膜層壞死。第3組（Group III）與假手術組一致，腸系膜組織結構正常，無病理改變，腸絨毛結構并未被破壞，并未發(fā)生黏膜出血、壞死、水腫。第4組（Group IV）利用紫檀芪預先作用，然后再制備大鼠腸缺血再灌注模型，其腸組織結構損傷明顯減輕。僅見部分腸道絨毛尖端出現(xiàn)不同程度的上皮下空隙，上皮層與固有層中等程度的分離，部分可見固有層出血，但無壞死，水腫改變。

3　討論

在動脈瘤手術，體外循環(huán)，絞窄性疝，小腸移植等外科手術過程中，往往容易誘發(fā)腸缺血再灌注損傷。腸組織作為對缺血性損傷最為敏感的內臟器官中，在缺血再灌注過程中最易受到損傷，且往往造成嚴重后果。在缺血再灌注過程中，由于血流的中斷供應，導致腸道組織缺血性損傷，其他創(chuàng)傷如急性腸系膜動脈閉塞、腸套疊、休克等也容易發(fā)生腸缺血再灌注損傷［4-5］。當缺血部位由于再灌注而恢復血供，反而造成再次損傷，且損傷程度甚至高于初始的缺血性損傷。有報道認為經過腸缺血再灌注的損傷過程會造成腸的重吸收功能障礙［6］。腸缺血再灌注的病理過程認為包括活性氧、一氧化氮、炎癥因子、補體激活以及多形核中性粒細胞。然而，在腸缺血再灌注的病理過程中細胞水平的氧化還原平衡的失衡是最主要的惡化原因［7］。

在本實驗中，假手術組大鼠腸系膜組織結構正常，無病理改變，腸絨毛結構并未被破壞，并未發(fā)生黏膜出血、壞死、水腫。大鼠腸缺血再灌注損傷后，可見不同程度的固有層出血、壞死、水腫，固有層結構破壞，同時可見大量浸潤在周圍的中性粒細胞，導管擴張，絨毛尖端完全剝脫，隱窩層出現(xiàn)不同程度的損傷，嚴重者出現(xiàn)跨黏膜層壞死。紫檀芪單獨作用，腸系膜組織結構正常，無病理改變，腸絨毛結構并未被破壞，并未發(fā)生黏膜出血、壞死、水腫［8］。利用紫檀芪預先作用，然后再制備大鼠腸缺血再灌注模型，其腸組織結構損傷明顯減輕。僅見部分腸道絨毛尖端出現(xiàn)不同程度的上皮下空隙，上皮層與固有層中等程度的分離，部分可見固有層出血，但無壞死，水腫改變。以上結果提示利用紫檀芪進行預處理，可以有效降低大鼠腸缺血再灌注的病理損傷。而單獨給予正常大鼠紫檀芪對其腸黏膜結構無影響。說明紫檀芪可以保護腸組織免受缺血再灌注的病理損傷，而不影響其正常狀態(tài)。

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The Protective Effect and Mechanism of Pterostilbene on Intestinal Ischemia Reperfusion Injury

SUN Yang CHANG Qing CUI Lan Department of Anesthesia，Heilongjiang Hospital，Harbin Heilongjiang 150001，China

Objective This study was to establish an animal model of intestinal ischemia-reperfusion，to analyze the role of pterostilbene on intestinal ischemiareperfusion injury and its mechanism.Methods Healthy male Wistar rats of clean grade were randomly divided into four groups，casting small noninvasive artery by clamping the superior mesenteric artery 30 min，reperfusion 24 h.Taking intestinal tissue sections for HE staining and light microscopy of intestinal tissue damage.Results Apply the pterostilbene in advance，significantly reduced intestinal tissue structural damage.Conclusion This study demonstrated pterostilbene preconditioning can reduce intestinal ischemia-reperfusion injury in intestinal tissue pathology，and to provide a basis for treatment.For further study of the protective effect and mechanism of intestinal ischemia-reperfusion injury presented theoretical basis.

Pterostilbene，Intestinal ischemia-reperfusion，Pathological injury

R285.5

A

1674-9316（2016）20-0193-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.20.123

黑龍江省醫(yī)院麻醉科，黑龍江 哈爾濱 150001