進(jìn)化工程選育乙醇發(fā)酵酵母菌株研究進(jìn)展

柳洋，湯曉玉，劉義，任小利，4，丁文武*

（1.西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川成都610039；2.四川大學(xué)水利水電學(xué)院，四川成都610065；3.農(nóng)業(yè)部沼氣科學(xué)研究所，四川成都610041；4.四川省質(zhì)量技術(shù)審查評(píng)價(jià)中心，四川成都610031）

進(jìn)化工程選育乙醇發(fā)酵酵母菌株研究進(jìn)展

柳洋1，2，湯曉玉3，劉義1，任小利1，4，丁文武1*

（1.西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川成都610039；2.四川大學(xué)水利水電學(xué)院，四川成都610065；3.農(nóng)業(yè)部沼氣科學(xué)研究所，四川成都610041；4.四川省質(zhì)量技術(shù)審查評(píng)價(jià)中心，四川成都610031）

優(yōu)良的酵母菌能夠增強(qiáng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率、提高生產(chǎn)效率，因此選育性能優(yōu)良的酵母菌一直是乙醇發(fā)酵中非常重要的工作；該文對(duì)利用進(jìn)化工程選育釀酒酵母菌的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，并展望了其研究趨勢(shì)，以便為這一領(lǐng)域的進(jìn)一步深入研究提供參考和借鑒。

進(jìn)化工程；酵母菌；乙醇；選育

酵母菌種是乙醇發(fā)酵工藝中最為關(guān)鍵的因素之一，優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)的酵母菌能夠增強(qiáng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率、提高生產(chǎn)效率，因此選育性能優(yōu)良的酵母菌是貫徹乙醇發(fā)酵始終而又十分重要的工作。

隨著能源危機(jī)的日益加深，尋找可替代化石能源的可再生能源是世界各國(guó)科研工作者所面臨的重要任務(wù)之一[1-2]。在眾多研究中，燃料乙醇被認(rèn)為是最有可能替代化石能源的可再生能源之一，但是在一些復(fù)雜發(fā)酵環(huán)境或者特殊的發(fā)酵工藝中，并不能利用普通酵母菌來(lái)進(jìn)行發(fā)酵（如纖維素乙醇發(fā)酵）。由于酵母菌并不能直接利用纖維素產(chǎn)生乙醇，因此許多研究便開(kāi)始利用各種科技手段來(lái)篩選能夠直接發(fā)酵纖維素或者纖維素分解產(chǎn)物產(chǎn)乙醇的酵母菌；但是由于纖維素的分解產(chǎn)物非常復(fù)雜，從而形成了特殊的環(huán)境壓力而導(dǎo)致酵母菌對(duì)纖維素產(chǎn)物的利用率非常低，因此在尚未弄清酵母菌株為應(yīng)對(duì)這種環(huán)境壓力而發(fā)生的有關(guān)分子方面變化的情況下，利用進(jìn)化工程被認(rèn)為是篩選適合特殊發(fā)酵環(huán)境的酵母菌的有效手段之一。

本文將對(duì)近年來(lái)利用進(jìn)化工程篩選酵母菌的研究情況進(jìn)行總結(jié)和探討，以使研究者更為方便地了解這一領(lǐng)域的研究進(jìn)展，并為其研究提供參考和借鑒。

1 進(jìn)化工程選育酵母菌的研究現(xiàn)狀

進(jìn)化工程是為了獲得某個(gè)既定表型菌株，在一系列選擇措施的基礎(chǔ)上進(jìn)行的連續(xù)進(jìn)化措施[1]，即通過(guò)模擬自然進(jìn)化中的生物變異和選擇過(guò)程，在人工提供選擇壓力的條件下使微生物進(jìn)化，然后從進(jìn)化的菌群中篩選出性狀優(yōu)良的菌株的方法[2]。

由于揭示潛在的表型提高機(jī)制變得空前簡(jiǎn)單，新生代的序列測(cè)定使得進(jìn)化工程再次得到飛速發(fā)展，也使得發(fā)酵工藝通過(guò)發(fā)酵條件和額外的選擇循環(huán)次數(shù)得到了進(jìn)一步的提高；進(jìn)化工程的發(fā)展前景也激發(fā)了新選擇方案的發(fā)展，如產(chǎn)量選擇、微流法選擇胞外代謝產(chǎn)物等，這些無(wú)疑都將在不久的將來(lái)進(jìn)一步得到發(fā)展和提高；此外，最近的研究結(jié)果也證實(shí)了一種觀點(diǎn)—代謝工程無(wú)法證實(shí)選擇發(fā)現(xiàn)機(jī)制，也正是如此，未來(lái)進(jìn)化工程將會(huì)變得越來(lái)越重要[3]。目前，生物工程中主要是利用進(jìn)化工程對(duì)菌株進(jìn)行改進(jìn)，以擴(kuò)大其底物利用范圍、提高產(chǎn)品生產(chǎn)能力或者提高菌株對(duì)環(huán)境壓力的耐受性以提高其特定環(huán)境下的發(fā)酵性能。

1.1 進(jìn)化工程選育發(fā)酵戊糖類的酵母菌

由于釀酒酵母菌不能以戊糖作為發(fā)酵底物來(lái)生產(chǎn)乙醇，但是以纖維素生產(chǎn)乙醇具有巨大的發(fā)展前景和優(yōu)勢(shì)，這使得人們不斷尋找或構(gòu)建能夠利用木糖發(fā)酵的微生物，目前雖然已經(jīng)成功構(gòu)建了利用木糖的釀酒酵母菌，但是經(jīng)過(guò)改造重組得到的菌株轉(zhuǎn)化木糖的能力較低，由于酵母菌代謝木糖的機(jī)理尚未弄清，研究者便開(kāi)始設(shè)計(jì)利用進(jìn)化工程來(lái)選育木糖或乳糖代謝能力強(qiáng)、乙醇產(chǎn)量高的進(jìn)化菌株[4-13]。

目前這一方向的研究也基本分為兩類，一是注重菌株發(fā)酵能力的提高，通過(guò)各種進(jìn)化措施提高菌株的底物利用能力、細(xì)胞量以及產(chǎn)乙醇能力，而對(duì)菌株發(fā)生適應(yīng)性進(jìn)化的機(jī)理卻并未進(jìn)一步深入研究[4-6]，這類研究大都是集中在利用進(jìn)化工程選育菌株的早期；DEMEKE M M等[4]經(jīng)過(guò)多輪復(fù)雜D-木糖培養(yǎng)基的進(jìn)化工程選育了一株突變菌株，該菌株完全消耗35 g/L的D-木糖需要17 h，消耗速率為1.1 g/（h·g）干細(xì)胞，能夠生產(chǎn)比母本菌株多32%的乙醇。LIU E等[5]通過(guò)脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）重組技術(shù)、化學(xué)突變以及適應(yīng)性進(jìn)化構(gòu)建了一株酵母菌，以希望找到能夠有效利用木糖發(fā)酵產(chǎn)乙醇的菌株，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建出的菌株的生長(zhǎng)密度、木糖利用率以及產(chǎn)乙醇能力都有了很大的提高；ZHOU H等[6]以進(jìn)化工程為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)了經(jīng)過(guò)一系列間歇有氧、無(wú)氧培養(yǎng)以及木糖限制恒化器培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)，得到一株生長(zhǎng)速率（0.203±0.006）h-1、木糖消耗速率1.866 g/（L·h）、乙醇轉(zhuǎn)化率0.41 g/g的酵母菌株。

第二類是通過(guò)一定進(jìn)化方案使得酵母菌有了性能提高，得到進(jìn)化菌株后，又對(duì)酵母菌的進(jìn)化機(jī)理做了進(jìn)一步的研究[7-13]。HONGA K K等[7]利用一個(gè)水準(zhǔn)系統(tǒng)檢測(cè)酵母菌利用半乳糖的代謝變化，這種代謝變化是由于酵母菌因適應(yīng)性進(jìn)化而提高的比生長(zhǎng)速率以及與此相關(guān)的表型特征的變化而導(dǎo)致的，從而篩選得到了3株比生長(zhǎng)速率和比半乳糖吸收率都較高的進(jìn)化菌株，與工程菌和參照菌相比，進(jìn)化菌株的半乳糖中間代謝路線與它們相似，盡管在進(jìn)化菌株中存貯的碳水化合物有所提高且一個(gè)進(jìn)化菌株的麥角固醇的生物合成也發(fā)生了變化；CADIéRE A等[8]在前期研究的基礎(chǔ)上，繼續(xù)利用進(jìn)化工程增大磷酸戊糖途徑的通量以增強(qiáng)葡萄糖的消耗能力，基于葡萄糖的13C代謝路徑分析，進(jìn)化菌株的碳通量已經(jīng)從葡萄糖酵解轉(zhuǎn)換到磷酸戊糖酵解途徑上了，并且與原菌株相比，通過(guò)磷酸戊糖的通量由原來(lái)的11%提高到了17%；LEE K S等[9]通過(guò)反代謝工程將寬基因組干擾圖庫(kù)引入酵母菌中，然后用3種不同的富集方法得到了能夠快速發(fā)酵半乳糖的轉(zhuǎn)化菌株，并對(duì)能夠迅速提高酵母菌性能的編碼基因做了分析；SANCHEZ R G等[10]利用進(jìn)化工程對(duì)攜帶外來(lái)基因的重組釀酒酵母菌進(jìn)行選育，以提高其利用木糖和阿拉伯糖的利用率；經(jīng)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)化菌株在無(wú)氧和有氧條件下均表現(xiàn)出了較高的木糖和阿拉伯糖利用率，這也是第一次以分子機(jī)制為特征對(duì)進(jìn)化工程提高混合五碳糖利用率的報(bào)道；WISSELINK H W等[11]也在前期研究基礎(chǔ)上，在利用代謝工程和進(jìn)化工程篩選出阿拉伯糖發(fā)酵菌株后，對(duì)進(jìn)化菌株在代謝組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)以及代謝途徑等方面做了深入分析研究。SCALCINATI G等[12]構(gòu)建了一株能夠表達(dá)來(lái)自于畢赤酵母的木糖還原酶、木糖醇脫氫酶以及木糖激酶的酵母菌株，并用定向進(jìn)化手段來(lái)提高木糖的利用率，該菌株能夠消耗木糖并快速生長(zhǎng)卻只產(chǎn)生細(xì)胞和幾乎可極少的副產(chǎn)物，通過(guò)對(duì)該酵母的轉(zhuǎn)錄圖譜的研究發(fā)現(xiàn)，酵母呼吸機(jī)制中的乙酸途徑得到了加強(qiáng)；RIN K S等[13]通過(guò)合理的代謝和反代謝工程，選育出能夠快速有效發(fā)酵木糖的酵母菌，然后通過(guò)幾輪關(guān)于木糖次代培養(yǎng)物的培養(yǎng)，選育出進(jìn)化菌株，該菌株能夠縮短遲滯期強(qiáng)化木糖發(fā)酵，通過(guò)對(duì)進(jìn)化菌株的基因組序列分析發(fā)現(xiàn)，PHO13發(fā)生了突變，失去了Pho13p的相關(guān)作用。

由于底物的多樣性以及發(fā)酵環(huán)境的不同，酵母菌的進(jìn)化也不同，因此其進(jìn)化機(jī)理的研究也極為復(fù)雜，研究者在這方面研究也多種多樣，但是，從目前的研究來(lái)看，主要集中在以下三個(gè)方面：（1）胞內(nèi)代謝產(chǎn)物的變化，借以推斷菌株代謝路線的變化；（2）通過(guò)進(jìn)化菌株和原始菌株的基因序列分析，借以分析進(jìn)化菌種中基因的變化；（3）通過(guò)分析進(jìn)化菌株的轉(zhuǎn)錄圖譜，分析菌株中轉(zhuǎn)錄基因表達(dá)及相關(guān)作用的變化。

1.2 進(jìn)化工程選育耐環(huán)境壓力的酵母菌

酵母菌在發(fā)酵過(guò)程中面臨這種各種各樣的環(huán)境壓力，這些環(huán)境壓力由各種各樣的因素共同構(gòu)成（如發(fā)酵副產(chǎn)物、重金屬），此外目前作為發(fā)酵底物的纖維素水解產(chǎn)物也包含著許多副產(chǎn)物（如乙酸、呋喃及其衍生物等），都是對(duì)酵母菌產(chǎn)生抑制的重要因素，酵母菌在這些抑制因素構(gòu)成的發(fā)酵環(huán)境中，必然會(huì)發(fā)生一系列不同的進(jìn)化以適應(yīng)發(fā)酵環(huán)境[14]。

GILBERT A等[14]在恒濁器中利用進(jìn)化工程通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)器中的生物量的方法，當(dāng)發(fā)現(xiàn)適應(yīng)性菌群代替原有菌群時(shí)則進(jìn)行取樣篩選，從而分離出2株能耐10 g/L乙酸的釀酒酵母菌；CAKAR Z P等[15]采用了培養(yǎng)過(guò)程中逐步加大選擇壓力以及恒定溫和的選擇壓力的兩種方法，在試管中以分批培養(yǎng)的方法對(duì)菌株進(jìn)行進(jìn)化培養(yǎng)，獲得了能夠抵抗多重環(huán)境壓力的進(jìn)化株，其對(duì)氧化、凍融、高溫和乙醇等不利條件的耐受性，分別是出發(fā)菌株的1429、102、89和62倍；YANG J等[16]利用整體轉(zhuǎn)錄機(jī)制工程（global transcriptional machinery engineering，gTME）構(gòu)建了能夠耐乙醇的酵母菌，在20%的葡萄糖發(fā)酵液的24 h實(shí)驗(yàn)中，所篩選出的兩個(gè)菌株的生長(zhǎng)情況很好，能夠生產(chǎn)出比原來(lái)菌株多25%的乙醇，其比產(chǎn)率分別是0.31 g/g和0.39 g/g，產(chǎn)率分別是2.6 g/（L·h）和3.2 g/（L·h），證明了利用gTME選育出的耐乙醇的菌株可以提高乙醇的生產(chǎn)；HONGA M E等[17]利用反代謝工程辨別能夠提高釀酒酵母菌耐乙醇的內(nèi)源基因，對(duì)鑒別出的基因進(jìn)行了詳細(xì)的研究，揭示了有助于理解和設(shè)計(jì)代謝工程潛在耐乙醇表型的目標(biāo)基因；WRIGHT J等[18]也利用了進(jìn)化工程選育了能夠耐乙酸的木糖發(fā)酵菌株，經(jīng)過(guò)400代的選育，相繼連續(xù)的間歇培養(yǎng)物和連續(xù)培養(yǎng)物能夠在pH值為4的條件下，耐受乙酸質(zhì)量濃度分別達(dá)到6 g/L和5 g/L，木糖消耗速率提高了75%，達(dá)到了1.7 g/（L·h）；ZELLE R M等[19]在研究中指出缺乏丙酮酸羧化酶的酵母菌不能利用葡萄糖，除非在培養(yǎng)液中加入C4成分，但是，經(jīng)過(guò)進(jìn)化工程后的突變株卻能夠在以葡萄糖為唯一碳源的情況下利用葡萄糖，因此在研究中ZELLE R M利用突變株和參照株研究了磷酸烯醇丙酮酸羧激酶能否取代丙酮酸羧化酶所空缺的作用以及取代的條件；WENGER J W等[20]在研究中發(fā)現(xiàn)酵母菌在其他限碳環(huán)境而無(wú)論是有氧還是無(wú)氧條件下進(jìn)化時(shí)，在需氧葡萄糖限制時(shí)表現(xiàn)出了很少見(jiàn)的“權(quán)衡”（trade-offs）現(xiàn)象；ADAMOGM等[21]也利用了實(shí)驗(yàn)室進(jìn)化來(lái)提高酵母菌耐銅金屬的能力，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，酵母菌的耐CuSO4的能力達(dá)到了2.5 g/L，并且發(fā)現(xiàn)了耐銅金屬不同的機(jī)制，包括銅吸收的控制、氧化應(yīng)激反應(yīng)的酶水平的變化以及結(jié)合銅蛋白質(zhì)組的變化等。Kü?üKG?ZE G等[22]利用進(jìn)化工程在鎳壓力水平漸增條件下，選育了能夠抵抗參照菌株致死量5.3 mmol/L NiCl2的高抵抗鎳的突變酵母菌株，而且突變株還可以交叉抵抗鐵、鈷、鋅以及錳等，積累抵抗量比參照菌株抵抗鎳量的兩倍還多，通過(guò)全基因組分析，在菌株中發(fā)現(xiàn)了有關(guān)于鐵穩(wěn)態(tài)、壓力響應(yīng)以及氧化損傷等640個(gè)等增量調(diào)節(jié)基因，說(shuō)明鎳抵抗機(jī)制同樣可以響應(yīng)常規(guī)壓力，抵抗鐵、鈷以及氧化損傷等環(huán)境壓力；纖維素生物材料在水解過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生多種糖類以及抑制因子；ALMARIO M P等[23]利用進(jìn)化工程設(shè)計(jì)了實(shí)時(shí)可見(jiàn)進(jìn)化法，分離出強(qiáng)適應(yīng)纖維素生物材料水解產(chǎn)物的突變菌株，并揭示了酵母菌適應(yīng)該水解產(chǎn)物的分子機(jī)制，研究顯示最佳突變株的相對(duì)適應(yīng)系數(shù)高于其母本菌株的57%，而且突變菌株對(duì)不同的抑制因子表現(xiàn)出了不同的抵抗機(jī)制，某些菌株的葡萄糖的吸收率也有所增加，顯示出菌株對(duì)復(fù)雜纖維素水解產(chǎn)物的適應(yīng)本性，其轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析顯示出一些突變菌株抵抗復(fù)雜水解產(chǎn)物的不同機(jī)制，以及菌株對(duì)氧化壓力和耐水解產(chǎn)物的交叉適應(yīng)性；GUADALUPE-MEDINA V等[24]利用進(jìn)化工程選育出缺乏三磷酸降解酶、減少醋酸鹽生成的酵母菌，加強(qiáng)了無(wú)氧高糖濃度條件下菌株的生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，突變株的甘油生成量比參照菌株大約少10%，而乙醇得率從79%上升至92%，基因分析顯示，增強(qiáng)好氧條件下的滲透耐力，需要一個(gè)主要的染色體突變以及一個(gè)在生成質(zhì)粒中的厭氧生長(zhǎng)基因。ALKIM C等[25]利用利用經(jīng)典的遺傳和基因組寬轉(zhuǎn)錄子，分析了以進(jìn)化工程選育出的酵母菌抗鈷表型的特征；KOPPRAM R等[26]利用進(jìn)化工程在間歇培養(yǎng)基和恒化器培養(yǎng)基中，選育出3株能夠忍耐云松水解產(chǎn)物抑制因子的進(jìn)化菌株，與母本菌株相比，進(jìn)化菌株的比生長(zhǎng)速率提高了2倍，遲滯期下降為原來(lái)的一半，發(fā)酵糖的時(shí)間也有所縮短。

此外，有學(xué)者也利用進(jìn)化工程選育了適合反復(fù)真空發(fā)酵的釀酒酵母菌，并利用蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)對(duì)選育出的酵母的適應(yīng)性進(jìn)化做了詳細(xì)分析，取得非常豐碩的研究成果[28-30]，四川大學(xué)肖澤儀課題組也膜生物反應(yīng)器乙醇發(fā)酵過(guò)程中副產(chǎn)物對(duì)發(fā)酵的影響，以利用進(jìn)化工程選育適合膜生物反應(yīng)器乙醇發(fā)酵的酵母菌，取得了顯著成果[33-34]。

針對(duì)響應(yīng)發(fā)酵環(huán)境壓力的進(jìn)化酵母菌，研究?jī)?nèi)容也基本可分為兩類：一類是針對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物乙醇或副產(chǎn)物乙酸以及纖維素水解產(chǎn)物等對(duì)酵母菌產(chǎn)生的抑制，通過(guò)一定的進(jìn)化措施提高酵母菌株的耐乙醇或乙酸抑制作用的能力[18，23-24，26-36]；另一類是針對(duì)發(fā)酵液中的重金屬如銅、鈷、鎳等形成的環(huán)境壓力，設(shè)計(jì)一定的實(shí)驗(yàn)方案，逐漸對(duì)酵母菌實(shí)行馴化，提高酵母菌耐重金屬毒性的能力[21-22，25]，除此還有針對(duì)一些特殊的發(fā)酵環(huán)境而進(jìn)行研究的，如酵母菌面臨的氧化、凍融、高溫等環(huán)境[15]。

以上研究所進(jìn)行的內(nèi)容和采取的手段也多種多樣，但總結(jié)起來(lái)可以歸納為以下幾個(gè)方面：（1）細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物的研究，借以研究代謝路徑的變化，（2）是關(guān)鍵酶等蛋白質(zhì)的研究，借以分析細(xì)胞為應(yīng)對(duì)環(huán)境壓力在關(guān)鍵酶方面的變化，（3）是對(duì)細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵基因的分析研究，借以分析細(xì)胞在進(jìn)化過(guò)程中，為適應(yīng)環(huán)境壓力而發(fā)生的基因變化，在這些研究中，基本上都運(yùn)用了生物化學(xué)和分子生物學(xué)的知識(shí)，以代謝組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)等技術(shù)方法進(jìn)行研究。

2 總結(jié)與展望

通過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道可以看到，經(jīng)過(guò)研究者多年的努力，利用進(jìn)化工程選育適合一定發(fā)酵環(huán)境的酵母菌這一領(lǐng)域有了很大的進(jìn)展，也都取得了較好的研究結(jié)果，所獲得的菌株其性能都得到了一定程度的提高，同時(shí)，對(duì)進(jìn)化菌株性能的進(jìn)一步研究，分別在基因、關(guān)鍵酶或代謝途徑都取得了一定的進(jìn)展，但是這些研究仍然不夠深入，所得結(jié)果往往是初步探索，尤其是在耐環(huán)境壓力的分子機(jī)制上的探索，是近年來(lái)隨著相應(yīng)的研究技術(shù)的增強(qiáng)才逐步開(kāi)始快速發(fā)展的，因此需要進(jìn)一步加強(qiáng)深入，且需要將酵母的表型性能與分子機(jī)理相關(guān)聯(lián)，并需要借鑒和比較前人的研究結(jié)果，以便從更深的層次上認(rèn)識(shí)細(xì)胞耐環(huán)境壓力的機(jī)制，從而為有針對(duì)性的菌株選育和發(fā)酵工藝改進(jìn)奠定基礎(chǔ)。

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Research progress on breeding of yeast strains for alcoholic fermentation by evolutionary engineering

LIU Yang1,2,TANG Xiaoyu3,LIU Yi1,REN Xiaoli1,4,DING Wenwu1*
(1.College of Food and Bioengineering,Xihua University,Chengdu 610039,China; 2.College of Water Resource and Hydropower,Sichuan University,Chengdu 610065,China; 3.Biogas Institute of Ministry of Agriculture,Chengdu 610041,China; 4.Sichuan Quality and Technical Examination Center,Chengdu 610031,China)

Ethanol productivity and yield could be elevated with super yeast strains during ethanol fermentation,so super yeast strains breeding is always conducted as a very important work in the ethanol fermentation industry all the time.The research progress of the yeast breading by evolutionary engineering were summarized in the article.The trend of the aspect was also discussed to provide references for the researchers in the field.

evolutionary engineering;yeast;ethanol;breeding

TS201.3

0254-5071（2016）11-0026-05

10.11882/j.issn.0254-5071.2016.11.005

2016-07-14

四川省教育廳項(xiàng)目（15ZB0126）；四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（15205613）；西華大學(xué)校重點(diǎn)科研基金項(xiàng)目（z1420523）；四川省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放項(xiàng)目（szjjz015-001）；西華大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項(xiàng)目（05030153）

柳洋（1995-），男，碩士研究生，研究方向?yàn)榭稍偕茉撮_(kāi)發(fā)。

*通訊作者：丁文武（1980-），男，副教授，博士，研究方向?yàn)槲⑸锇l(fā)酵與生物質(zhì)能源轉(zhuǎn)化。