豬戊型肝炎研究進(jìn)展

王安航，崔克

（1.海南省動物疫病預(yù)防控制中心海南?？?71100；2.海南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)檢驗檢測預(yù)警防控中心海南?？?71100）

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豬戊型肝炎研究進(jìn)展

王安航1，崔克2*

（1.海南省動物疫病預(yù)防控制中心海南?？?71100；2.海南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)檢驗檢測預(yù)警防控中心海南海口571100）

摘要：豬戊型肝炎是重要的人獸共患病，近年發(fā)病率逐漸升高，對畜牧業(yè)發(fā)展和公共衛(wèi)生安全造成巨大的威脅。本文對其病原學(xué)、流行病學(xué)情況、檢測技術(shù)，免疫及預(yù)防等方面的研究進(jìn)展作一綜述，為豬戊型肝炎的防控提供參考。

關(guān)鍵詞：豬戊型肝炎；預(yù)控；人獸共患病

豬戊型肝炎由戊型肝炎病毒引起，該病毒通過糞口途徑傳播，可感染人、豬、黑猩猩等多種動物，且可引起人的高病死率，同時豬的感染機(jī)率較高，為一種重要的人獸共患傳染病。 開展豬戊型肝炎的研究，對畜牧業(yè)發(fā)展、畜產(chǎn)品質(zhì)量安全、公共衛(wèi)生安全有重要的意義。

1病原

1982年，前蘇聯(lián)學(xué)者采用免疫電鏡技術(shù)發(fā)現(xiàn)一種新型病毒，當(dāng)時稱為經(jīng)腸道傳播的非甲非乙型肝炎病毒。1989年在東京國際會議上，該病毒被命名為戊型肝炎病毒。1990年，Reyes等對戊型肝炎病毒的基因組進(jìn)行了序列分析。1997年，美國學(xué)者自豬體內(nèi)分離到戊型肝炎病毒，并證實與人類的戊型肝炎病毒在基因序列上有很高的同序性，可感染黑猩猩和恒河猴，表明戊型肝炎病毒可跨種間傳播，為豬戊型肝炎的病原。

豬戊型肝炎病毒粒子為直徑是27～34 nm的球形顆粒，無囊膜，表面有纖突。該病毒有兩種形態(tài)：一種為內(nèi)部致密，含有全部基因的全病毒顆粒，另一種為內(nèi)部透亮，含有部分基因的不完全病毒顆粒。豬戊型肝炎病毒對外界抵抗力不強(qiáng)，高鹽、氯化銫及氯仿均可破壞其穩(wěn)定性，煮沸5 min可滅活病毒。戊型肝炎病毒分為8個基因型，但只存在一個血清型。其中，豬戊型肝炎病毒屬于基因Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型，為目前重要的人獸共患病病原?；颌裥陀?006年在柬埔寨的豬群中發(fā)現(xiàn)［1］，基因Ⅲ型同樣于2006年在上海的豬群中發(fā)現(xiàn)［2］，且研究表明，其基因序列與美國流行的US1、US2毒株同源性較高?；颌粜蜑槲覈i戊型肝炎病毒的主要基因型，于1993年在我國人群中首先被發(fā)現(xiàn)。而目前我國境內(nèi)存在戊型肝炎病毒的I、III、IV3個基因型。

豬戊型肝炎病毒是單股正鏈RNA病毒，基因組全長約7.2 kb，全基因組結(jié)構(gòu)包含ORF1、ORF2、ORF3 3個互相重疊開放閱讀框，同時還有5＇端非編碼區(qū)及3＇端含polyA尾的非編碼區(qū)。

ORF1長約5 kb，主要編碼病毒甲基轉(zhuǎn)移酶、RNA依賴的RNA聚合酶、解螺旋酶等非結(jié)構(gòu)蛋白，與病毒復(fù)制有關(guān)，并且含有12個抗原表位。ORF1基因序列變化較大，并且高變區(qū)的核苷酸長度會因毒株不同而不同，同時ORF1存在3個高度保守的序列，分別為GDD、GVPGSGKS和DEAP序列，RNA依賴性的RNA聚合酶與GDD序列有關(guān)，RNA依賴性NTP酶的激活則依賴GVPGSGKS和DEAP序列。ORF1編碼的病毒甲基轉(zhuǎn)移酶表明豬戊型肝炎病毒基因具存5'帽子結(jié)構(gòu)，而研究表明，該5'帽子結(jié)構(gòu)是病毒保持復(fù)制能力和侵襲能力所必須的。

ORF2長約2 kb，編碼病毒結(jié)構(gòu)蛋白。由于其核苷酸形成較強(qiáng)的RNA次級結(jié)構(gòu)，故基因序列較保守，其中與ORF3重疊的核苷酸序列是病毒基因中最保守的部分。但是ORF2編碼的氨基酸序列變異性較大，所以其在病毒粒子逃避免疫和形成過程中發(fā)揮作用。目前研究表明，ORF2表達(dá)的蛋白上至少有9個抗原活性區(qū)，且在390-470 aa這一活性區(qū)中至少有5個抗原表位，結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，同時除少數(shù)幾個活性區(qū)分布在N端，大部分位于C端2/3區(qū)域。另有研究表明，C端2/3區(qū)域抗原表位的抗原性與其高級結(jié)構(gòu)有關(guān)，由于蛋白肽鏈的折疊，C端的抗原表位被遮蓋，如果切去N端部分蛋白肽鏈，則C端抗原表位抗原性會很好。

ORF3編碼含122/123個氨基酸的磷酸化蛋白，目前確定有3個抗原表位，該磷酸化蛋白可與宿主細(xì)胞骨架結(jié)合，并且是促分裂原活化蛋白激酶超家族的底物，可被磷酸化［3］。該蛋白參與豬戊型病毒肝炎的組裝、侵襲宿主細(xì)胞及在細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，同時刺激機(jī)體IgM，并且與病毒的基因型分型有關(guān)。

2流行病學(xué)情況

豬戊型肝炎病毒可感染豬、牛、雞、犬、鼠及靈長類等動物，主要途徑為口徑傳播，也可通過口鼻接觸，異種器官移植的方式傳播。研究表明，病毒可在肝臟、腸及淋巴結(jié)等器官中復(fù)制，絕大部分通過糞便排出體外，其他動物通過接觸含有病毒的糞便又會感染，形成大面積感染的循環(huán)。

豬戊型肝炎在公共衛(wèi)生上有重大意義，目前各國均對其流行情況開展了研究。日本檢測了25個豬場的2 500頭豬的血清抗體，平均陽性率達(dá)到58%，表明豬戊型肝炎在日本國內(nèi)的豬群普遍流行。英國則證實了其豬群中豬戊型肝炎抗體陽性率為85.5%。印度尼西亞的研究表明，豬群中抗體陽性率可達(dá)89%。在我國，葛勝祥、王葉春、葉安菊等對各地豬群開展了豬戊型肝炎血清抗體的調(diào)查，發(fā)現(xiàn)平均陽性率在83%左右，并且散養(yǎng)豬陽性率較高。美國對其本土37個豬場開展豬戊型肝炎的流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示，抗體陽性率達(dá)54%，病原陽性率達(dá)35%。同時我國和其他國家也開展了病毒學(xué)調(diào)查，其中日本在調(diào)查的樣本中，病原學(xué)陽性率達(dá)15%，泰國達(dá)到38%，墨西哥達(dá)到30%，美國達(dá)到43%，我國在浙江、河南、北京等地區(qū)也不同程度的在樣品中檢測到豬戊型肝炎病毒。

研究發(fā)現(xiàn)，豬場工作人員特別是豬場獸醫(yī)體內(nèi)豬戊型肝炎抗體陽性率高于一般人群1.5倍左右。另外，董世娟等根據(jù)豬戊型肝炎的流行病學(xué)資料，建立了灰色系統(tǒng)GM（1，1）模型，以預(yù)測其流行趨勢，結(jié)果表明，該模型科學(xué)、簡單、較準(zhǔn)確的預(yù)測豬戊型肝炎的流行情況，為該病的流行病學(xué)調(diào)查提供了新的方法及科學(xué)的參考依據(jù)［4］。

3檢測技術(shù)

豬感染豬戊型肝炎后，不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀，呈隱性經(jīng)過，診斷該病主要依靠實驗室檢測。目前，血清學(xué)檢測技術(shù)主要是間接ELISA，用以檢測豬戊型肝炎病毒IgA、IgG和IgM抗體，其中對IgG抗體的檢測較常用，對IgA抗體的檢測可用于確切診斷，對IgM抗體的檢測可區(qū)分既往感染和新近感染。如韋獻(xiàn)飛等采用ORF2和ORF3編碼蛋白為抗原，劉濤等采用ORF3編碼蛋白為抗原，盛慧明等依據(jù)ORF2編碼的氨基酸序列采用多聚抗原肽技術(shù)合成肽段作為抗原以及趙凱等利用ORF1和ORF2、ORF3編碼蛋白建立的ELISA方法，均具備較高的特異性和敏感性，取得了很好的效果。病原學(xué)檢測技術(shù)主要是RT-PCR方法，Inoue等根據(jù)ORF2/ ORF3重疊區(qū)的序列設(shè)計引物，建立了可同時檢測4種豬戊型肝炎病毒基因型的RT-PCR方法，具有較高的靈敏度。趙晨燕等根據(jù)ORF3保守序列建立了實時熒光RT-PCR方法，敏感性比常規(guī)RT-PCR提高1～2個數(shù)量級。邱蜜蜜等根據(jù)ORF2保守區(qū)序列，利用Taqman探針法建立了熒光定量RT-PCR方法，為豬戊型肝炎病毒的快速定量檢測奠定了基礎(chǔ)［5］。

4免疫和預(yù)防

盡管各國學(xué)者對豬戊型肝炎開展了大量的研究，對于該病仍無有效的治療方法，而采用疫苗進(jìn)行主動免疫是預(yù)防該病最經(jīng)濟(jì)、有效可行的手段。目前，豬戊型肝炎病毒沒有合適的體外增殖細(xì)胞，阻礙了滅活疫苗和弱毒疫苗的開發(fā)。隨著細(xì)胞生物學(xué)、基因工程技術(shù)的發(fā)展，基因工程疫苗方面的研究有了很大進(jìn)展，Tuteja等研究了細(xì)胞因子對豬戊型肝炎DNA疫苗的協(xié)同作用，為核酸疫苗的開發(fā)打下了良好的基礎(chǔ)。肖愛歡等采用ORF2的3個抗原片段，分別構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒，結(jié)果表明，3個重組質(zhì)粒均表達(dá)目的蛋白，并具有良好的抗原性。而李斌、蘇乾蓮等在此基礎(chǔ)上，構(gòu)建了3個真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后，目的蛋白得到高效表達(dá)，也具有良好的抗原性，為研制豬戊型肝炎疫苗打下了良好的基礎(chǔ)［6，7］。但是，目前仍沒有商品化的豬戊型肝炎疫苗用于實際生產(chǎn)。

總之，豬戊型肝炎作為人類重要的人獸共患病，其公共衛(wèi)生意義非常重要。鑒于目前狀況，預(yù)防的關(guān)鍵宜采取如下的綜合性措施，首先開展豬戊型肝炎病毒的病原學(xué)和致病機(jī)制研究，建立檢測方法，開展監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查，掌握其發(fā)病規(guī)律，提高預(yù)警預(yù)報工作；其次開發(fā)有效的疫苗，加強(qiáng)該病與其他動物疫病致病關(guān)系的研究，提高整體豬群的免疫水平；第三加強(qiáng)對動物性食品和外來動物疫病的檢疫，注重對生豬及環(huán)境的消毒滅源工作，有效控制傳染源。隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，相信肯定能有效控制該病，確保養(yǎng)豬業(yè)和公共衛(wèi)生安全。（編輯：趙曉松）

參考文獻(xiàn)：

［1］Banks M，Heath G S，Grierson S S，et al.DP King，Evidence for the presence of hepatitis E virus in pigs in the United Kingdom［J］.Vet Rec，2004，154（8）：223-228.

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［4］董世娟，黃芳芬，施標(biāo)，等.應(yīng)用灰色系統(tǒng)GM（1，1）模型預(yù)測豬場中戊型肝炎的流行趨勢［J］.上海農(nóng)業(yè)學(xué)技，2012，28（4）：59-61.

［5］邱蜜密，孟軻音，丁壯，等.豬戊型肝炎病毒實時熒光定量PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2010，30（4）：449-452.

［6］李斌，蘇乾蓮，趙武，等.三個豬戊型肝炎病毒ORF2基因連續(xù)片段核酸疫苗的構(gòu)建［J］.中國獸醫(yī)科學(xué)，2013，43（10）：1059-1066.

［7］蘇乾蓮，李斌，趙武，等.應(yīng)用實施熒光定量RT-PCR檢測豬HEV ORF2基因3個連續(xù)片段的真核表達(dá)水平［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2014，34（11）：1709-1715.

doi：10.3969/j.issn.1008-4754.2016.6.045

作者簡介：王安航（1989-），男，海南陵水人，主要從事動物疫病防控和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工作。

*通訊作者：崔克（1977-），男，山東安丘人，高級獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防控和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工作。電子郵箱：gzck020@163.com。

Progress of Swine Hepatitis E

Wang Anhang1，Cui Ke2*
（1.Hainan Animal Disease Prevention and Control Center，Haikou，571100；2.Modern Agricultural Inspection，Testing&Control center of Hainan Province，Haikou，571100）

Abstract：Swine Hepatitis E is an important zoonotical disease.Incidence of Swine Hepatitis E is continiously rising in recent years，this disease seriously threatens development of livestoke and public health security.In order to help swine hepatitis E control，the paper reviewed the progress in sdudy of Swine Hepatitis E etiology、epidemiology、detection technology、immunity and prevention。

Keyword：Swine Hepatitis E；Prevention and Control；Amphixenosis