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    黃金百香果莖尖組織培養(yǎng)體系與脫毒苗生產(chǎn)

    2023-12-27 02:35:26
    世界熱帶農(nóng)業(yè)信息 2023年11期
    關(guān)鍵詞:煉苗細(xì)胞分裂百香果

    百香果發(fā)展前景較好,且在市場(chǎng)中擁有較高價(jià)值,但是,中國(guó)缺少優(yōu)質(zhì)的百香果幼苗,品種相對(duì)較為單一,導(dǎo)致種植后產(chǎn)量較差,甚至?xí)驗(yàn)榭共⌒暂^差影響百香果質(zhì)量。當(dāng)前,在種植百香果過程中,90%以上幼苗都是利用無性繁殖種植,但在無性繁殖過程中,很容易出現(xiàn)幼苗差異較大、品種容易退化,甚至?xí)驗(yàn)椴∠x害降低百香果質(zhì)量等。在百香果產(chǎn)業(yè)發(fā)展過程中,頻繁的跨地區(qū)轉(zhuǎn)移容易傳播各種病害[1]。百香果幼苗上存在大量病毒,百香果幼苗組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)逐漸成為去除病毒害最有效的辦法,它可以在短時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)優(yōu)質(zhì)幼苗,有效克服繁殖效率低及速度慢等問題。

    1材料與方法

    1.1材料

    結(jié)合黃金百香果幼苗發(fā)育的不同階段及內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),選取出不同階段的培養(yǎng)材料,具體如表1所示。

    1.2組織培養(yǎng)方法

    1.2.1消毒處理流程

    當(dāng)黃金百香果生長(zhǎng)最茂盛時(shí),需要用其主莖頂端的芽或主莖上帶有側(cè)生芽的部分作為培養(yǎng)材料,取得百香果新長(zhǎng)出的枝梢大約30 cm,保留該部分頂端的芽及側(cè)生芽,余下的部分需要截取成1~2 cm左右的小段。在培育前,需要對(duì)截取的小段用水沖洗3~5次,再使用蒸餾水沖洗,將沖洗好的莖段放在無菌環(huán)境下,再次使用無菌水進(jìn)行2遍沖洗。隨后使用濃度為75%酒精進(jìn)行消毒處理,使用時(shí)間為60 s左右,再利用無菌水進(jìn)行消毒洗滌[2]。在上述處理過程中,還需要在消毒試劑中額外加入3滴表面活性劑。并且還需要在消毒過程中不斷搖晃試劑瓶,使消毒劑可以與材料進(jìn)行充分接觸。消毒處理完成后,還需要使用無菌水對(duì)其進(jìn)行沖水5次左右,每次大約5 min,全部完成后,需要使用濾紙將表面水分吸干。利用解剖鏡取得百香果主莖段上的莖尖部位,大約取得1 mm大小作為培養(yǎng)材料,并將其放到初代培養(yǎng)基中。

    1.2.2組織培養(yǎng)與繁殖

    在初代培養(yǎng)階段,按照表1來進(jìn)行消毒培養(yǎng)后,需要取得20個(gè)左右并且大小一致的莖尖。在培育35 d后,需要在每瓶中放入2個(gè)莖尖,此時(shí)需要處理60個(gè)左右的莖尖,還需要再培養(yǎng)30 d左右,通過觀察培養(yǎng)情況,選擇最優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)組合。在繼代培養(yǎng)階段,當(dāng)莖尖長(zhǎng)到10 cm左右時(shí),需要對(duì)其進(jìn)行切段處理,每段1 cm左右。將取得的材料接種到6-BA+萘乙酸基本培養(yǎng)基中進(jìn)行再次培養(yǎng),需要培養(yǎng)5次左右,每次時(shí)間間隔大致為2個(gè)月,觀察繁殖情況[3]。

    在生根培養(yǎng)階段,需要挑選長(zhǎng)勢(shì)較好并且相對(duì)健康的育苗進(jìn)行生根處理,將長(zhǎng)度在3 cm左右的芽尖從根基處進(jìn)行切除,將切除好的材料放入到不同濃度的萘乙酸之中,并且還需要配合吲哚丁酸來進(jìn)行組織培養(yǎng),此階段需要培育25 d。當(dāng)以上工作全部完成后,等到培養(yǎng)的育苗根部長(zhǎng)到3 cm左右時(shí),培養(yǎng)7 d左右。將培養(yǎng)的育苗放入專門容器內(nèi),土壤主要以腐殖土為主,在保證土壤透氣性的同時(shí),還需要讓其具有一定的保水能力。這樣育苗不僅可以生長(zhǎng)得更加茂盛,也可以保證育苗成活率。接種后半個(gè)月,還需計(jì)算育苗污染情況及存活情況,具體公式如下:育苗污染率=育苗污染的數(shù)量/育苗總數(shù)量×100%;育苗褐化率=育苗褐化的數(shù)量/育苗總數(shù)量×100%;育苗存活率=(育苗總數(shù)量—育苗污染的數(shù)量-育苗褐化的數(shù)量)/育苗總數(shù)量×100%。利用SPSS進(jìn)行處理及分析,準(zhǔn)確了解黃金百香果莖尖組織培養(yǎng)具體情況[4]。

    1.3脫毒苗生產(chǎn)

    在脫毒苗生產(chǎn)過程中,需要先對(duì)其進(jìn)行病毒檢測(cè),育苗以每株為單位進(jìn)行擴(kuò)散性繁殖,當(dāng)育苗數(shù)量達(dá)到50~100株時(shí),隨機(jī)選取5個(gè)樣本,每個(gè)樣本中選擇5株進(jìn)行病毒檢測(cè),通常使用的方法是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、血清學(xué)鑒定方法及指定植物鑒定。通過檢測(cè)后,選擇脫毒后的育苗進(jìn)行后續(xù)繁殖,并且保證每批育苗都要進(jìn)行檢測(cè),以此來控制育苗質(zhì)量[5]。在對(duì)黃金百香果莖尖進(jìn)行脫毒生產(chǎn)時(shí),需要將溫度控制在25℃左右、相對(duì)濕度控制在80%左右、光照強(qiáng)度控制在4 000~40 000 LX,并且還需要每天對(duì)其進(jìn)行12 h左右的照射。由于培養(yǎng)空間過大,光照充足,無須進(jìn)行煉苗處理,可直接在溫室內(nèi)進(jìn)行移植,育苗成活率可以達(dá)到99.99%以上。夏季與冬季光照強(qiáng)度不同,夏季中午光照可以達(dá)到45 000 LX以上,冬季中午光照可以達(dá)到12 000 LX以上,除了利用遮陽幕進(jìn)行調(diào)節(jié)外,還可以利用架子層進(jìn)行調(diào)節(jié)。這樣既可以完成脫毒苗生產(chǎn),也可以使育苗茂盛[6]。

    2結(jié)果與分析

    2.1不同消毒時(shí)間對(duì)黃金百香果莖尖的影響

    需要對(duì)黃金百香果莖尖設(shè)置不同的消毒時(shí)間,從而分析莖尖出芽率的具體情況,如表2所示。由表2可以看出,對(duì)黃金百香果莖尖消毒15 min,兩種方法出芽率分別為96%和100%,消毒15 min比消毒5 min、10 min及20 min效果要好。隨著消毒時(shí)間不斷增加,對(duì)植物內(nèi)部細(xì)胞的殺傷力也在不斷增強(qiáng),一旦消毒時(shí)間超過15 min,不僅不會(huì)增加植物存活率,反而會(huì)呈現(xiàn)出降低趨勢(shì)。而消毒時(shí)間不足,則無法完全消除病毒害,甚至?xí)俅紊L(zhǎng),導(dǎo)致植物出現(xiàn)壞死。

    2.2不同植物激素對(duì)莖尖生芽的影響

    莖尖組織培養(yǎng)及脫毒苗選擇的細(xì)胞分裂素為6-BA。為了驗(yàn)證該細(xì)胞分裂素效果,選擇三種不同的細(xì)胞分裂素進(jìn)行對(duì)比分析,其中育苗A使用細(xì)胞分裂素6-BA,育苗B使用細(xì)胞分裂素是激動(dòng)素(簡(jiǎn)稱KT),育苗C則使用玉米素(簡(jiǎn)稱ZT)。將三種育苗放置在同一環(huán)境下,使用的分裂素濃度也是完全相同的,以此來觀察出芽情況,具體如圖1所示。由圖1可以看出,使用激動(dòng)素來刺激植物生長(zhǎng),經(jīng)過30 d,黃金百香果出芽率也只有41.3%;使用玉米素來刺激植物生長(zhǎng),經(jīng)過30 d,黃金百香果出芽率可以達(dá)到62.5%。而使用6-BA來刺激植物生長(zhǎng),當(dāng)培育5 d時(shí),出芽率就能夠達(dá)到57.5%;當(dāng)培育30 d后,黃金百香果出芽率可以達(dá)到97.8%,可使用6-BA細(xì)胞分裂素來刺激植物生長(zhǎng)。

    2.3煉苗移植對(duì)黃金百香果莖尖的影響

    煉苗是黃金百香果莖尖育苗中正常生根中必不可少的環(huán)節(jié)。本文驗(yàn)證了不同煉苗移植技術(shù)下黃金百香果莖尖成活概率,如圖2所示。

    由圖2可以看出,使用傳統(tǒng)移植技術(shù)30 d后,黃金百香果存活率只有41.5%。而使用本文移植技術(shù)10 d后,黃金百香果存活率就可以達(dá)到62.5%;經(jīng)過30 d后,黃金百香果存活率可以達(dá)到90%以上。在煉苗移植過程中,需要特別注意的是,將育苗生成根莖培養(yǎng)至3~5下約1個(gè)星期左右,再將放育苗培養(yǎng)瓶蓋子打開,在自然光線再次培養(yǎng)2~3 d。完成這一步驟后,將育苗用鑷子輕輕取出,放入濃度為0.1%的多菌靈殺菌劑中浸泡大約5 min左右,隨后將其取出后用清水沖洗3~5次左右,將根部位置的試劑沖洗干凈后栽入土中。土壤中表層土壤、椰糠及蛭石粉比例大約為椰糠表層土壤和蛭石粉用量的總和,對(duì)其進(jìn)行定期澆水,并且將其放入到避光空間內(nèi)。等搭配移植后15~20 d,就會(huì)長(zhǎng)出新的根莖與枝葉,讓其成活概率始終保持在90%以上。

    綜上所述,利用黃金百香果莖尖組織培養(yǎng)法可以有效避免育苗品質(zhì)退化及提高黃金百香果產(chǎn)量。用黃金百香果莖尖進(jìn)行統(tǒng)一育苗培養(yǎng),可以提高黃金百香果繁殖率。例如每次接種的百香果莖尖為10個(gè),并且從上一年6月開始進(jìn)行培養(yǎng)至此年年底,隨后再對(duì)其進(jìn)行移植、繁殖及生產(chǎn)等步驟,可以培養(yǎng)出6萬株無毒育苗。而使用傳統(tǒng)的繁殖技術(shù),能夠存活的育苗大致為600株左右。

    參考文獻(xiàn)

    [1]趙家桔,李莉萍,張如蓮,等.百香果莖尖組織培養(yǎng)體系的建立[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2020,40(11):75-80.

    [2]黃艷花,黃遠(yuǎn)光,歐善生,等.百香果莖基腐病病原菌鑒定及其生物學(xué)特性[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2022,35(1):105-112.

    [3]劉潔云,吳艷艷,牟海飛,等.黃百香果花粉離體培養(yǎng)基篩選及貯藏試驗(yàn)[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2021,34(8):1 699-1 704.

    [4]蔡昭艷,王小媚,邱文武,等.培養(yǎng)基pH值及蔗糖、硼酸、PEG-4000對(duì)百香果花粉體外萌發(fā)的影響[J].分子植物育種,2021,19(21):7 274-7 281.

    [5]湛年勇,陸榮生,明鳳恩,等.百香果廢棄物與平菇廢菌渣結(jié)合對(duì)紫靈芝生長(zhǎng)與品質(zhì)的影響[J].園藝與種苗,2020,40(4):1-3,8.

    [6]朱元芳,徐永清,陳芾葳,等.EM菌生物有機(jī)肥對(duì)馬鈴薯脫毒苗生產(chǎn)微型薯的影響[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2020,59(20):46-50.

    (廣西玉林農(nóng)業(yè)學(xué)校梁明驊)

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