混合生物物證DNA檢驗(yàn)鑒定2例

馬曉穎 伊 鵬 穆勇民

1.山東省臨沂市公安局羅莊分局刑警大隊(duì)，山東 臨沂 276017；2.山東省臨沂市公安局刑科所，山東 臨沂 276000

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混合生物物證DNA檢驗(yàn)鑒定2例

馬曉穎1伊 鵬2穆勇民1

1.山東省臨沂市公安局羅莊分局刑警大隊(duì)，山東 臨沂 276017；2.山東省臨沂市公安局刑科所，山東 臨沂 276000

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、科學(xué)技術(shù)手段的發(fā)達(dá)，越來越多的刑事案件加入對(duì)混合物物證中DNA檢驗(yàn)定檢的使用。醫(yī)務(wù)人員通過受害人身上可以混合物物證的提取，通過專業(yè)的技術(shù)手段進(jìn)行深入，主要通過生物檢材的提取、檢驗(yàn)和分析三和步驟，取得物證的DNA分型，并最終確定犯罪嫌疑人。本文選取近年來發(fā)生的強(qiáng)奸案件，分別介紹生物物證DNA檢驗(yàn)鑒定的案件中發(fā)揮的作用，和混合生物物證檢材的處理以及應(yīng)用過程中的相關(guān)注意事項(xiàng)，細(xì)述混合生物物證DNA檢驗(yàn)鑒定在案件中的使用及最終結(jié)果，從技術(shù)的角度闡述其在此類案件中的重要性。

強(qiáng)奸案；混合生物無證；提??；檢驗(yàn)

公安案件中，現(xiàn)場(chǎng)物證常出現(xiàn)兩個(gè)以上個(gè)體的樣本源，即混合生物物證?；旌衔镒C會(huì)出現(xiàn)在任何案件中，并以強(qiáng)奸案和碎尸案居多。通常，警務(wù)人員在案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)會(huì)尋到可疑的皮屑或體液證物，而這類證物又往往來源于兩個(gè)以上個(gè)體身上。因此，混合物物證中DNA的判定技術(shù)對(duì)于案件偵破至關(guān)重要。對(duì)混合生物物證進(jìn)行DNA檢測(cè)鑒定，通過生物樣本的提取、檢驗(yàn)和進(jìn)一步分析，將促進(jìn)案件的有效偵破，是當(dāng)前此類案件中使用較廣泛的技術(shù)手法之一。

一、案件資料

(一)案件

2014年5月8日，XX城區(qū)派出所接到報(bào)案，一名環(huán)衛(wèi)工人在西郊的一片廢棄廠房發(fā)現(xiàn)一名死尸。公安人員到達(dá)案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)，這是一名女性尸體，年齡在20-25歲之間，尸體衣物凌亂，被遺棄的背包中未發(fā)現(xiàn)其他重要資料。經(jīng)鑒定，死者死因?yàn)轭i部強(qiáng)力扼壓致使的機(jī)械性窒息死亡?，F(xiàn)場(chǎng)有死者與嫌疑人搏斗的痕跡，且現(xiàn)場(chǎng)很像強(qiáng)奸殺人案。法醫(yī)的進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，死者陰道外側(cè)有殘留精液，且指甲內(nèi)檢測(cè)出不屬于死者的皮屑物和血跡。死者指甲內(nèi)提取的生物物證需要進(jìn)行多類型體液的確證試驗(yàn)，因?yàn)檠E與皮屑尚不能確定屬于個(gè)體。皮屑物與血液經(jīng)進(jìn)一步檢測(cè)，結(jié)果顯示部分屬于死者本人，部分與精液和血液屬于同一男性。檢驗(yàn)結(jié)果確定后，公安人員立即進(jìn)行下一步嫌疑人搜查活動(dòng)，并于案發(fā)后兩天抓捕犯罪嫌疑人。在對(duì)死者身上混合物物證的分析與嫌疑人進(jìn)行對(duì)比，通過相同的DNA分型最終確定罪犯。

(二)DNA檢驗(yàn)

兩起案件均出現(xiàn)混合物物證：一是死者指甲內(nèi)部殘留皮屑物和血跡，且陰道提取出男性精液。DNA的提取主要采用棉簽類易于沾取或附著證物且不會(huì)致使其遭到破壞的工具進(jìn)行。在證物提取過將其放置在密封的材料袋或材料盒中，并禁止不關(guān)人等的隨意觸碰。證物帶至研究所后小心取出，將棉簽沾取物證的部分棉纖維取出，加入200μL的骨骼孵育液、15μL的蛋白酶K在56度的環(huán)境下進(jìn)行孵育。隨后，用硅珠法進(jìn)行DNA的提取，提取模板濃縮成10μl的DNA溶液。接下來，擴(kuò)增和電泳檢測(cè)方面，國(guó)內(nèi)常規(guī)方式是通過Identifile試劑盒，來擴(kuò)增各提取模板的DNA。隨后，用3130基因分析儀進(jìn)行擴(kuò)增物的檢測(cè)。當(dāng)擴(kuò)增物的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)時(shí)，將檢測(cè)結(jié)果放置到GeneMspperID V3.2軟件中，進(jìn)行分型結(jié)果的比對(duì)。

二、討論

上述案件中，提取的死者指甲內(nèi)混合血液、皮脂屑這類生物檢材，不能簡(jiǎn)單將其是為死者個(gè)體，相關(guān)檢案人員必須對(duì)存在可以性的載體進(jìn)行取樣，盡可能將死者的貼身衣服、指甲附著皮屑、用過的衛(wèi)生紙團(tuán)等容易沾染罪犯精斑或皮脂的載體進(jìn)行逐一排查，并進(jìn)行多類型體液確證試驗(yàn)。另外，DNA工作者在樣本提取前應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。強(qiáng)奸案件中，當(dāng)嫌疑人射精量偏少或本身為少精患者時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)女子上皮細(xì)胞遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過男子精子細(xì)胞的狀態(tài)，此時(shí)應(yīng)采用差異裂解法且兩步均涂片鏡檢，再經(jīng)精子數(shù)量與上皮細(xì)胞數(shù)量的對(duì)比，來選取合適的檢材用量、酶用量以及消化時(shí)間和需要洗滌的次數(shù)。其中，熱循環(huán)參數(shù)和模板DNA量等因素都將影響PCR反映的結(jié)果。另外，混合生物物證的結(jié)果擴(kuò)增還應(yīng)重視每一個(gè)個(gè)體DNA在檢材中的實(shí)際比例，當(dāng)混合DNA分型男性成分偏多時(shí)應(yīng)進(jìn)一步稀釋、濃縮DNA提取液，及成梯度擴(kuò)增等方法。

混合DNA結(jié)果分析：第一，仔細(xì)觀察案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)，并積極詢問受害者或知情者，通過現(xiàn)場(chǎng)偵查和信息提示，推斷案件中作案人數(shù)；第二，混合DNA的提取時(shí)應(yīng)盡可能純潔，排除污染物。檢測(cè)時(shí)更要注意污染物、牽涉鋒、Stutter鋒、非特異性擴(kuò)增或染色體畸變等特殊情況的發(fā)生。第三，判斷樣本是否為混合物物證，通過等位基因的基因數(shù)目較多的基因座來判斷，原理是個(gè)體間的重復(fù)率偏小。一般來說，兩個(gè)體混合斑圖譜中，Amelegen基因座中X、Y等位基因鋒面積表現(xiàn)出不同的平衡關(guān)系和峰值高低，能夠提示樣本的性別成分。另外，單一男性DNA分型結(jié)果與多部位提取、梯度擴(kuò)增獲取的混合DNA分型對(duì)比分析，能夠進(jìn)行另一DNA分型結(jié)果的獲取。

當(dāng)前，越來越多的刑事案件加入對(duì)混合物物證中DNA檢驗(yàn)定檢的使用。要求相關(guān)法醫(yī)人員在受害者身上，仔細(xì)尋找相關(guān)易于檢測(cè)且易于解釋單一檢材的樣本。因此，混合物物證DNA檢驗(yàn)鑒定的發(fā)展任重而道遠(yuǎn)，需要相關(guān)人員進(jìn)一步提高認(rèn)識(shí)并加以重視。硅珠法提取DNA，能夠有效地去除PCR，從而得到更加純凈的樣本信息。純凈樣本后通過Microcon100濃縮提高模板的質(zhì)量水平，確保擦拭物的混合物物證獲取清晰的DNA分型譜帶?；A(chǔ)研究上，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)進(jìn)行深入探析，不斷探索新型區(qū)分不同個(gè)體的排他性片段，以研發(fā)更新穎的選擇性提取試劑盒。當(dāng)前，我國(guó)進(jìn)行單細(xì)胞DNA檢測(cè)所使用的技術(shù)，在之前的面別混合檢材領(lǐng)域取得不小的進(jìn)步，并即將在不遠(yuǎn)的將來實(shí)現(xiàn)輕松進(jìn)行混合生物物證DNA檢驗(yàn)的鑒定。

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馬曉穎(1974-)，女，回族，山東青州人，四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院本科，山東省臨沂市公安局羅莊分局刑警大隊(duì)，法醫(yī)師，研究方向：物證檢驗(yàn)；伊鵬，男，漢族，山東蒙陰人，山東省臨沂市公安局刑科所；穆勇民，男，漢族，山東德州人，山東省臨沂市公安局羅莊分局刑警大隊(duì)。