基質(zhì)金屬蛋白酶-7、糖類抗原19-9在胰腺癌與腫塊型胰腺炎中的表達及鑒別價值

曲義坤　夏偉濱　徐　劍　陳　剛

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院普外科，黑龍江　佳木斯　154002)

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基質(zhì)金屬蛋白酶-7、糖類抗原19-9在胰腺癌與腫塊型胰腺炎中的表達及鑒別價值

曲義坤夏偉濱徐劍陳剛1

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院普外科，黑龍江佳木斯154002)

目的探討基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-7及糖類抗原(CA)19-9在胰腺癌(PC)與腫塊型胰腺炎(MFP)組織及血清中的表達及鑒別意義。方法手術切除PC標本27例，MFP標本15例，胰腺正常組織30例作為對照組。免疫組織化學染色SP法檢測3組組織中MMP-7的表達，并用化學發(fā)光免疫法檢測術前血清CA19-9的含量。結(jié)果PC組、MFP組血清CA-199水平明顯高于對照組(P均<0.05)，但PC組與MFP組差異無統(tǒng)計學意義。PC組MMP-7陽性表達率明顯高于MFP組及對照組(P均<0.05)。結(jié)論CA19-9是診斷PC的敏感指標，但特異性不強，獨立鑒別PC與MFP的準確性不高。MMP-7可能在癌前病變MFP發(fā)展為PC中起重要作用，MMP-7有可能作為生物學指標來鑒別PC與MFP。

胰腺癌(PC)；腫塊型胰腺炎(MFP)；糖類抗原19-9；基質(zhì)金屬蛋白酶-7

胰腺癌(PC)是臨床最常見且惡性程度極高的腫瘤之一，居全球惡性腫瘤死因的第4位，消化系統(tǒng)惡性腫瘤的第2位〔1〕。美國癌癥協(xié)會(ACS)監(jiān)測與衛(wèi)生研究部指出，大多數(shù)癌癥死亡率逐年下降，而PC死亡率卻一直在上升，為致死性最強的癌癥之一，大多患者確診1年內(nèi)死亡，與該病一級預防、早期診斷、治療方面進展不足有關。慢性胰腺炎是PC的癌前病變之一〔2〕，尤以腫塊型為著。腫塊型胰腺炎(MFP)是慢性胰腺炎的特殊類型，最先于1973年由Bekeker描述，大多位于胰頭部，與PC的臨床表現(xiàn)相似，術前不易與PC鑒別〔3～5〕。本實驗通過檢測患者術前血清糖類抗原(CA)19-9和手術病理組織切片中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-7的表達，鑒別PC與MFP，提高PC的早期檢出率。

1　資料與方法

1.1一般資料2014年7月至2015年1月我院收治手術切除并明確PC組標本27例，男19例，女8例，年齡(61.4±4.2)歲，2006～2015年MFP組標本15例，男9例，女6例，年齡(59.8±9.5)歲。2010～2015年外傷及因其他病行胰十二指腸切除術的正常胰腺組織20例為對照組，男11例，女9例，年齡(60.4±7.5)歲。3組年齡、性別構(gòu)成無明顯差異。

1.2免疫學檢測①抽取各組手術前空腹靜脈血10 ml，室溫下靜置3～4 h，抗凝后以3 000 r/min離心10 min，留取血漿，采用化學發(fā)光免疫法檢測CA19-9的含量。②采用免疫組化鏈霉菌親生物素-過氧化物酶法檢測標本MMP-7表達水平。用已知胃癌陽性表達切片作為染色陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替Ⅰ抗(兔抗人MMP-7單克隆抗體)作為陰性對照。三組石蠟包埋標本組織切4 μm厚度，置于60℃烤箱中4 h，切片脫水、脫蠟、封閉及抗原修復。加入磷酸鹽緩沖液濕盒中4℃孵育過夜。室溫復溫20 min后PBS洗3×5 min，加入Ⅱ抗(IgG/Bio)37℃靜置30 min。PBS沖洗同上。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色3 min，蘇木精復染5～10 min。隨后脫水及封片。③采用CA19-9 測定試劑盒(直接化學發(fā)光法) 檢測血清CA19-9水平，>37 U/ml為陽性。

1.3結(jié)果判定采用雙人雙盲讀片，MMP-7蛋白表達在上皮細胞胞質(zhì)，以胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色作為陽性表達。首先將染色程度評分：計數(shù)細胞無著色計0分，淡黃色計1 分，棕黃色計2 分，棕褐色計3 分；再將陽性細胞所占百分比評分：0分為陰性，陽性細胞數(shù)≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩項評分相乘，<3分為陰性，≥3分為陽性。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗。

2　結(jié)　果

2.1各組血清CA19-9水平比較PC組〔(426.02±261.58)U/ml〕和MFP組CA19-9水平〔(327.68±160.40)U/ml顯著高于對照組〔(12.36±35.23)U/ml〕(P均<0.05)，PC組和MFP組無顯著差異。

2.2各組組織MMP-7的陽性表達PC組MMP-7陽性表達〔23例(85.2%)〕顯著高于MEP組〔6例(40.0%)〕(P=0.005)，而MEP組明顯高于對照組(0例)(P=0.003)，3組有顯著差異(χ2=33.853,P=0.000)。

3　討　論

MFP術中肉眼見多為胰頭部腫大，表面凹凸不平，質(zhì)地堅韌，常與周圍組織粘連，形態(tài)類似PC。MFP與PC鑒別診斷困難，但兩者預后大不相同。若有明確指標能區(qū)分MFP和PC，表明MFP即將或已發(fā)生惡變，則可為手術提供依據(jù)。如若表明MFP無惡變，或可行保留手術，減少術后并發(fā)癥，提高患者生活質(zhì)量。作為PC篩選腫瘤標志物最敏感指標的CA19-9，是一種黏蛋白類的腫瘤相關抗原，和Lewis血型成分密切相關。正常人于胰、膽管及胃結(jié)腸上皮細胞均能產(chǎn)生CA19-9，某些組織液也微量存在，但陽性表達大多見于惡性腫瘤。Kokhanenko等〔6〕對685例PC患者研究發(fā)現(xiàn)CA19-9的水平與PC的發(fā)展及預后密切相關。但后來研究發(fā)現(xiàn)，許多良性疾病患者血清CA19-9水平也明顯增高〔7，8〕，原因之一可能是正常人胰液及膽汁中有較高含量的CA19-9，當有結(jié)石、炎性因素的存在，影響胰液及膽汁的排泄，使膽管壁的通透性增加，最終導致血清CA19-9升高，臨床上出現(xiàn)假陽性。MFP的病理特點是胰腺腺泡細胞減少和纖維結(jié)締組織明顯增多，常伴有壞死、假性囊腫、鈣化、結(jié)石及胰管狹窄，可能導致血清CA19-9升高，而難以與PC鑒別。本研究結(jié)果提示MFP發(fā)病時一過性CA19-9升高。因此僅用血清CA19-9 作為鑒別PC和MFP的指標不能滿足臨床需要。

MMPs是Zn依賴性內(nèi)肽酶的一個重要家族，它是負責降解細胞外基質(zhì)(ECM)的主要類別。MMPs根據(jù)底物特異性和內(nèi)部同源性，公認被分成5類：膠原酶，明膠酶，基質(zhì)酶，膜型及其他MMPs。MMP-7對ECM具有最強的降解活性，包括彈力蛋白，明膠， Ⅳ型膠原，纖連蛋白，玻連蛋白，層黏連蛋白，巢蛋白，聚集蛋白聚糖和蛋白聚糖〔9〕。此外，它可以從細胞表面剔除非基質(zhì)底物，包括E-鈣黏蛋白，腫瘤壞死因子-α和Fas配體。它還能觸發(fā)MMP級聯(lián)的激活。迄今的研究發(fā)現(xiàn)MMP-7在多種惡性腫瘤中均檢測到，例如結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌等〔10,11〕。胡育新等〔12〕用免疫組化法檢測51例PC組織，結(jié)果發(fā)現(xiàn)68.6%有MMP-7表達，F(xiàn)ukushima等〔13〕用半定量RT-PCR法檢測11個PC細胞系和70例PC組織中MMP-7 mRNA的表達，70例PC組織中MMP-7 mRNA 的表達率為81.4%，而且與腫瘤大小、腫瘤浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關。通過以上研究表明，MMP-7的表達在PC的生長和進展中起重要作用。臨床數(shù)據(jù)和免疫組化分析表明MMP-7在慢性胰腺炎中發(fā)揮作用〔14〕。Crawford等〔15〕發(fā)現(xiàn)，MMP-7不僅在PC也在胰腺上皮內(nèi)瘤變和上皮化生中表達。MMP-7還通過對促凋亡分子Fas配體蛋白水解酶的釋放來調(diào)節(jié)胰腺腺泡細胞凋亡。Sri Manjari等〔16〕研究顯示，與健康體檢者相比，慢性胰腺炎患者MMP-7的GG基因型頻率增加。提示MMP-7可能在慢性胰腺炎發(fā)展為PC的病理多態(tài)性上有重要作用。本研究說明MMP-7可以提高PC、MFP鑒別的準確性。有膽汁阻塞或Lewis抗原陰性患者聯(lián)合檢測更有意義。

1Jemal A，Bray F，Center MM，etal.Global cancer statistics〔J〕.CA Cancer J Clin，2011；61(2)：69-90.

2Izbicki JR，Bloec C，Broering DC，etal.Extended drainage versus resection in surgery for chronic pancreatitis〔J〕.Ann Surg，1998；228(6)：771-9.

3羅婭紅，于韜，王洋，等.聯(lián)合應用CT、MRI增強掃描鑒別診斷PC與慢性胰腺炎〔J〕.磁共振成像，2011；2(1)：42-6.

4陳葉軍.15例胰頭部腫塊型慢性胰腺炎誤診為PCCT征象分析〔J〕.中外醫(yī)學研究，2012；20(1)：57-8.

5Leung TK，Lee CM，Wang FC，etal.Difficulty with diagnosis of malignant pancreatic neoplasms coexisting with chronic pancreatitis〔J〕.World J Gastroenterol，2005；32：5075-8.

6Kokhanenko NI，Ignashov AM，Varga EV，etal.Role of the tumor markers CA19-9 and carcinoembryonic antigen(CEA) in diagnosis，treatment and prognosis of pancreatic cancer〔J〕.Vopr Onkol，2001；47(3)：294-7.

7何思春，王永成，焦鑫.膽道結(jié)石患者血清糖類抗原CA19-9 升高的研究〔J〕.檢驗醫(yī)學與臨床，2010；7(1)：34-5.

8Horie Y,Matsui K,Shigoku A.Marked elevation of serum CA19-9 and stomach carcinoma〔J〕.Oncology，1998；55(5)：487-8.

9Egeblad M，Werb Z.New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression〔J〕.Nat Rev Cancer，2002；2(3)：161-74.

10王軍，張志勇，馮俊偉.AEG-1和MMP-7在結(jié)直腸癌中的表達及其意義〔J〕.中國老年學雜志，2014；34(7)：1784-5.

11韓艷春，張騫.乳腺癌中磷酸化 p38 和 MMP-7 的表達〔J〕.臨床與實驗病理學雜志，2014；30(7)：732-5.

12胡育新，李平，劉寶姝，等.PC組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-7(MMP-7) 的表達〔J〕.癌癥，2000；19(6)：521-3.

13Fukushima H，Yamamoto H，Itoh F，etal.Association of matrilysin mRNA expression with Kras mutations and progression in pancreatic ductal adenocarcinomas〔J〕.Carcinogenesis，2001；22(7)：1049-52.

14Sternlicht MD，Werb Z.How matrix metalloproteinases regulate cell behavior〔J〕.Annu Rev Cell Dev Biol，2001；17：463-516.

15Crawford HC，Scoggins CR，Washington MK，etal.Matrix metalloproteinase 7 is expressed by pancreatic cancer precursors and regulates acinar-to-ductal metaplasia in exocrine pancreas〔J〕.J Clin Invest，2002；109(11)：1437-44.

16Sri Manjari K，Jyothy A.Association of matrix metalloproteinase-7(-181A/G) promoter polymorphism in chronic pancreatitis〔J〕.Indian J Med Res，2014；140(5)：609-15.

〔2015-01-25修回〕

(編輯苑云杰)

佳木斯大學校級重點課題(No.Sz2013-006)

陳剛(1981-)，男，主治醫(yī)師，主要從事胰腺疾病研究。

曲義坤(1975-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事普外科腫瘤研究。

R735.5

A

1005-9202(2016)17-4236-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.049

1消化科