標(biāo)本類型對電化學(xué)發(fā)光法檢測心臟標(biāo)志物結(jié)果影響初探

段業(yè)芬

(四川省宜賓市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川宜賓 644000)

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標(biāo)本類型對電化學(xué)發(fā)光法檢測心臟標(biāo)志物結(jié)果影響初探

段業(yè)芬

(四川省宜賓市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川宜賓 644000)

摘要:目的探討不同抗凝劑對電化學(xué)發(fā)光法檢測心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、肌紅蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)質(zhì)量(CK-MBmass)、氨基末端B型鈉尿肽原(NT-proBNP)的影響。方法采用羅氏cobas e411電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀分別檢測29例住院患者血清、乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA-K2)抗凝血漿及肝素鋰抗凝血漿cTnT、Myo、CK-MBmass及NT-proBNP水平，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較各組心臟標(biāo)志物差異。結(jié)果肝素抗凝組與血清組4項(xiàng)結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t分別為-1.975、0.043、0.706、1.097，P>0.05)。EDTA-K2抗凝組與血清組cTnT結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為-1.208，P>0.05)，Myo、CK-MBmass及NT-proBNP結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為2.831、3.920、6.293，P<0.05)。結(jié)論肝素鋰抗凝血漿與無抗凝劑血清檢測心臟標(biāo)志物結(jié)果差別無臨床意義，能夠縮短心臟標(biāo)志物測定的樣品周轉(zhuǎn)時間(TAT)，是急診心臟標(biāo)志物檢測的首選。

關(guān)鍵詞:抗凝劑；電化學(xué)發(fā)光法；肌鈣蛋白T；肌紅蛋白；肌酸激酶同工酶MB型；氨基末端B型鈉尿肽原

心血管疾病是中國城市人群的常見疾病和死亡原因之一，而心臟標(biāo)志物的檢測是心血管疾病早期診斷和鑒別診斷的重要輔助手段之一。有研究結(jié)果表明，從起病到正確干預(yù)的時間與并發(fā)癥、生存率直接相關(guān)。例如急性心肌梗死(AMI)發(fā)病后1 h內(nèi)得到治療，死亡率約為1%；若6 h后才得到救治，死亡率將達(dá)到10%～12%[1]。這就要求臨床實(shí)驗(yàn)室迅速向臨床發(fā)出報(bào)告，從而提高診斷效率。縮短檢測周轉(zhuǎn)時間便成了實(shí)驗(yàn)室工作者研究的重點(diǎn)。臨床工作中，一般推薦使用血清標(biāo)本檢測心臟標(biāo)志物水平，但血清標(biāo)本的標(biāo)本前處理時間較長，不利于報(bào)告的迅速發(fā)出。使用血漿能有效縮短標(biāo)本預(yù)處理時間，但能否替代血清進(jìn)行心臟標(biāo)志物檢測尚需進(jìn)行研究，國內(nèi)外雖有抗凝劑對心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、肌紅蛋白(Myo)檢測影響的報(bào)道[2-8]，但各家結(jié)論不一致。對此，筆者檢測了29份血清、乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA-K2)抗凝血漿及肝素鋰抗凝血漿標(biāo)本，比較各組心臟標(biāo)志物含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇宜賓市第四人民醫(yī)院住院患者共29例，其中男20例，女9例，年齡28～80歲。所選患者心臟標(biāo)志物濃度涵蓋低中高水平。

1.2儀器與主要試劑羅氏cobas e411電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套cTnT、Myo、肌酸激酶同工酶(CK-MB)質(zhì)量(CK-MBmass)及氨基末端B型鈉尿肽原(NT-proBNP)原裝試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控物。嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。真空采血管為成都普什醫(yī)藥塑料包裝有限公司提供紫頭管(內(nèi)含EDTA-K2，批號1403016A)，綠頭管(內(nèi)含肝素鋰，批號1401023A)，紅頭管(無添加劑，批號1312018C)。

1.3方法收集受試者靜脈血6 mL，分別注入含EDTA-K2抗凝劑(EDTA組)、肝素鋰抗凝劑(肝素組)及無添加劑(血清組)的真空采血管中，每管約2 mL?？鼓龢?biāo)本混勻后2 260×g離心5 min分離血漿，無添加劑的標(biāo)本大約30 min血液凝固、血凝塊回縮后，同樣離心條件分離血清。立即上機(jī)測定cTnT、Myo、CK-MBmass及NT-proBNP水平。測定標(biāo)本前先做質(zhì)控，結(jié)果在控，確保儀器性能可靠。所有數(shù)據(jù)均重復(fù)平行測定2次取平均值。

2結(jié)果

2.1數(shù)據(jù)分布經(jīng)K-S檢驗(yàn)，EDTA抗凝組、肝素抗凝組及血清組的cTnT、Myo、CK-MBmass、NT-proBNP數(shù)據(jù)均為偏態(tài)分布(P<0.05)，結(jié)果見表1。各組數(shù)據(jù)取以10為底的對數(shù)后轉(zhuǎn)化為正態(tài)分布資料(P>0.05)，結(jié)果見表2。

2.2EDTA組與血清組心臟標(biāo)志物結(jié)果的比較與血清組比較，EDTA-K2抗凝組cTnT差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.208，P=0.237)；Myo、CK-MB mass和NT-proBNP 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為2.831、3.920、6.293，P<0.05)。計(jì)算Myo、CK-MB mass和NT-proBNP與血清偏差，CK-MB mass平均偏差為5.69%，最大偏差11.00%，Myo平均偏差為5.48%，最大偏差為9.70%，NT-proBNP平均偏差為5.08%，最大偏差為10.80%，均明顯超過羅氏試劑盒提供的日內(nèi)精密度。

2.3肝素組與血清組心臟標(biāo)志物結(jié)果的比較與血清組比較，肝素組cTnT、Myo、CK-MB mass和NT-proBNP差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為-1.957、0.043、0.706、1.097，P>0.05)。

表1　　cTnT、Myo、CK-MBmass及 NT-proBNP 測定結(jié)果[M(P25,P75)]

表2　　cTnT、Myo、CK-MBmass及 NT-proBNP 取對數(shù)后結(jié)果±s)

*:P<0.05,與血清組比較。

3討論

肝素抗凝血漿、EDTA抗凝血漿及血清均為羅氏心臟標(biāo)志物檢測試劑盒認(rèn)可的樣品類型，但并未說明三者間檢測有無差別。急診生化項(xiàng)目檢測中，EDTA由于其絡(luò)合鈣鎂，影響酶活性檢測[9]，一般不用于生化項(xiàng)目檢測。常使用肝素抗凝血漿或血清作為急診生化檢測標(biāo)本[10-12]。肝素抗凝血漿(一般選用肝素鋰)只需一管血即可進(jìn)行多項(xiàng)目檢測，且能縮短樣品周轉(zhuǎn)時間(TAT)，有利于心血管事件快速診斷。

本研究結(jié)果顯示，肝素抗凝血漿與血清檢測心臟標(biāo)志物結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可以使用肝素抗凝血漿代替血清進(jìn)行檢測。與國內(nèi)外多數(shù)報(bào)道相一致[2-4]，與黃婷等[5]在研究中指出肝素抗凝血漿檢測BNP的結(jié)果比EDTA抗凝血漿偏高的結(jié)論不一致，黃婷等采用的是ADVIA Centaur-XP全自動化學(xué)發(fā)光儀及其配套試劑，本實(shí)驗(yàn)以Roche cobas e411電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑為基礎(chǔ)，試劑成分差異可能照成結(jié)果的不同。也未出現(xiàn)陳望榮等[6]報(bào)道肝素抗凝管檢測CK-MB時出現(xiàn)負(fù)值的情況[7]，主要在于他們采用的是檢測CK-MB活性而非CK-MB的質(zhì)量，肝素帶有負(fù)電荷，CK-MB的活性部位中的氨基酸殘基容易與帶有負(fù)電荷的肝素結(jié)合失去活性而出現(xiàn)了負(fù)值。

本研究也表明EDTA-K2抗凝血漿與血清對電化學(xué)發(fā)光法檢測Myo、CK-MB mass和NT-proBNP結(jié)果有較大的差異，而檢測cTnT差異小。這與Daves等[2]報(bào)道EDTA抗凝血漿可作為血清替代標(biāo)本檢測cTnT的觀點(diǎn)一致，與Dupuy等[4]結(jié)論不一致，這可能由于采用檢測心臟標(biāo)志物的方法不同造成結(jié)論相悖。本實(shí)驗(yàn)說明，EDTA-K2抗凝血漿不適合代替血清檢測心臟標(biāo)志物，如實(shí)際工作中需要采用EDTA-K2抗凝血漿檢測，必須制訂其自身的參考區(qū)間。

本試驗(yàn)初步探明了肝素抗凝血漿、EDTA抗凝血漿以及血清檢測心臟標(biāo)志物結(jié)果的差別，但由于心臟標(biāo)志物檢測所需費(fèi)用高，本實(shí)驗(yàn)選擇的樣本量偏少，同時抗凝劑量對心臟標(biāo)志物檢測的影響也有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，肝素抗凝標(biāo)本與EDTA抗凝標(biāo)本及血清標(biāo)本相比，能縮短TAT，減少患者抽血數(shù)量，另外還可以減少溶血，減少樣品放置造成的誤差，心臟標(biāo)志物檢測結(jié)果與血清差異無臨床意義，是急診心臟標(biāo)志物檢測首選標(biāo)本類型。

參考文獻(xiàn)

[1]朱永輝，粟勇．急性心肌梗死心肌損傷生化標(biāo)志物檢測進(jìn)展[J]．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，31(9)：995-997．

[2]Daves M,Trevisan D,Cemin R.Different collection tubes in cardiac biomarkers detection[J].J Clin Lab Anal,2008,22(6):391-394.

[3]汪桂華，孫長江．血漿與血清標(biāo)本對心肌肌鈣蛋白檢測的影響[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(17)：1844-1845．

[4]Dupuy AM,Terrier N,Dubois M,et al.Heparin plasma sampling as an alternative to EDTA for BNP determination on the Access-Beckman Coulter--effect of storage at -20 degrees C[J].Clin Lab,2006,52(7/8):393-397.

[5]黃婷，張寶華．抗凝劑類型、標(biāo)本存放的時間及溫度對B型鈉尿肽檢測的影響[J]．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(6)：658-659．

[7]胡記妹，楊綠舜，鄭定容．三種真空管中CK-MB濃度的檢測結(jié)果比較[J]．現(xiàn)代醫(yī)院，2009，9(1)：60-61．

[8]王偉佳，張秀明，溫冬梅，等．不同抗凝劑,樣本放置時間及保存溫度對B型利鈉肽和氨基末端B型利鈉肽原檢測的影響[J]．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012，27(2)：83-87．

[9]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M]．3版．南京：東南大學(xué)出版社，2006：122-123．

[10]杜國有，顧向明．血清與肝素鋰抗凝血漿急診生化項(xiàng)目的結(jié)果比較[J]．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，27(11)：1050．

[11]胡軍紅，楊同朝，陸玲，等．不同類型采血管對4種酶活性測定影響的研究[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(7)：831-832．

[12]杜麗新，李鳳蓮，李書清，等．不同抗凝劑對血糖檢測結(jié)果的影響[J]．山西醫(yī)藥雜志，2013，42(2)：218-219．

·論著·

Primary investigation on effect of different sample types on detection results

of electrochemiluminescence for detecting heart markers

DuanYefen

(DepartmentofClinicalLaboratory,YibinMunicipalFourthPeople′sHospital,Yibin,Sichuan644000,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the effect of different anticoagulants on the results of the electrochemiluminescence method for detecting cardiac troponin T(cTnT),myoglobin(Myo),creatine kinase isoenzyme mass (CK-MBmass) and N-terminal pro-type natriuretic peptide (NT-proBNP).Methods The levels of cTnT,Myo,CK-MB mass and NT-proBNP in serum,EDTA-K2anticoagulation plasma and heparin lithium anticoagulation plasma from 29 patients were measured by the Roche cobas e411 electrochemiluminescence immunity analyzer.ResultsThe results of cTnT,CK-MBmass,Myo and NT-proBNP had no statistical differences between the heparin lithium anticoagulation plasma group and the serum group (t=-1.975,0.043,0.706,1.097,P>0.05).The results of cTnT had no statistical difference between the EDTA-K2anticoagulation plasma group and serum group,however the results of CK-MBmass,Myo and NT-proBNP showed statistically significant differences (t=2.831,3.920,6.293,P<0.05).ConclusionThe detection results of heart markers levels have no clinical difference between the heparin lithium anticoagulation plasma and non-anticoagulant serum,which can shorten the turn-around time(TAT) of heart markers detection and is the first choice for emergent heart markers detection.

Key words:anticoagulant;electrochemiluminescence;troponin T;creatine kinase isoenzyme mass;N-terminal pro-type natriuretic peptide

作者簡介：何恒兵，男，主管檢驗(yàn)技師，主要從事臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)的研究。

收稿日期：(2015-08-08)

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.035A

文章編號：1673-4130(2015)24-3591-03