雞病毒性關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展

王興和

（內(nèi)蒙古通遼市科爾沁區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心內(nèi)蒙古通遼028000）

雞病毒性關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展

王興和

（內(nèi)蒙古通遼市科爾沁區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心內(nèi)蒙古通遼028000）

雞病毒性關(guān)節(jié)炎是由禽呼腸孤病毒引起的一種病毒性傳染病。在雞群中可通過垂直傳播和水平傳播這兩種途徑進(jìn)行傳播。該病毒主要以侵害趾關(guān)節(jié)、跗關(guān)節(jié)和肌腱為特征，通常導(dǎo)致病雞呈現(xiàn)跛行、跗關(guān)節(jié)腫脹等臨床癥狀。剖檢病雞可見到腓腸肌腱出血、壞死或斷裂，脛骨干增厚等剖檢癥狀?？筛鶕?jù)臨床癥狀、剖檢結(jié)果、結(jié)合實驗室檢查對該病進(jìn)行確診。本文將從病原學(xué)、流行病學(xué)、診斷方法和預(yù)防等幾個方面進(jìn)行綜述。

雞病毒性關(guān)節(jié)炎；禽呼腸孤病毒；研究進(jìn)展

雞病毒性關(guān)節(jié)炎（Avian Virus Arthritis,AVA）主要是由禽呼腸孤病毒（Avian reovirus,ARV）引起雞的一種急性或慢性傳染病，肉用雞型多發(fā)，肉兼蛋型雞也有發(fā)生。該病毒主要侵害雞的趾關(guān)節(jié)、脛跖關(guān)節(jié)及其肌腱，引起關(guān)節(jié)滑膜炎或腱鞘炎等，因此該病也被稱為病毒性腱鞘炎。病雞呈現(xiàn)跛行、蹲坐、不愿走動，生長速度減慢或生長停止,當(dāng)與其它病原混合感染時會加劇其它病原的感染,給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。

1　病原學(xué)

1.1病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)和理化特性

禽呼腸孤病毒是呼腸孤病毒科（Reoviridae）正呼腸孤病毒屬（Orthoreovi）的成員。該病毒是一種RNA病毒，沒有囊膜但有雙層的衣殼結(jié)構(gòu)，通常人們檢測到的病毒粒子直徑在73～80 nm之間，其中75 nm較為多見，當(dāng)其感染細(xì)胞后可以在胞漿內(nèi)看到病毒呈晶格狀排列，在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制可形成包涵體。該病毒基因組可以分為三個大片段（L1、L2、L3）、三個中片段（M1、M2、M3）和四個小片段（S1、S2、S3、S4）三組總共10個節(jié)段，這些節(jié)段至少可以編碼11個原始的翻譯產(chǎn)物，它們屬于λ、σ、μ這三種類型[2]。其中ARV S組的S1基因含有3個重疊的開放閱讀框，能夠編碼非結(jié)構(gòu)蛋白P10、P17和結(jié)構(gòu)蛋白SigmaC[3]。

ARV對熱具有很強(qiáng)的抵抗力，60℃能夠存活8～10h、56℃能夠存活22～24h、37℃15～16周、22℃48～51周、4℃可以存活3年以上、-63℃可以保存10年以上[4]。氯化鎂能夠增強(qiáng)病毒對熱的穩(wěn)定性，但濃度過大會使病毒失去活性，該病毒對乙醚不敏感，對低濃度的來蘇兒、甲醛有抵抗力，但對2%～3%的氫氧化鈉溶液和70%的酒精相對較敏感。

1.2病毒血清學(xué)和培養(yǎng)特性

禽呼腸孤病毒各毒株之間存在大量的交叉反應(yīng)，因此有些群不能作為獨(dú)立的血清型，病毒通常以抗原亞型存在。國外對ARV雞源分離株的抗原關(guān)系方面有較多的研究，wood等[5]對來自日本、法國和美國的ARV的抗原相關(guān)性進(jìn)行了統(tǒng)計，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了11個血清型，各血清型毒株之間存在共同的群特異抗原，可進(jìn)行大量的交叉反應(yīng)。國內(nèi)對ARV雞源分離株的抗原關(guān)系研究較少，梁英[6]通過血清學(xué)中和試驗測定了國內(nèi)四株禽呼腸孤病毒株（YB、YH、CL、S1133）的血清學(xué)相關(guān)性，結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)各毒株之間都存在一定的抗原相關(guān)性。

ARV適合在雞胚內(nèi)生長，可以通過絨毛尿囊膜和卵黃囊進(jìn)行接種。初次分離將病毒接種到5～7日齡SPF雞胚的卵黃囊內(nèi)，一般在接種后3～5 d雞胚死亡，胚體呈現(xiàn)淺紫紅色，內(nèi)臟器官充血或出血。此外，該病毒可在原代雞胚細(xì)胞、肝、脾、腎和巨噬細(xì)胞中增殖，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞拉網(wǎng)、細(xì)胞融合等病變[7]。目前已被證實，ARV還可以在許多細(xì)胞系上增殖，如猴腎細(xì)胞（Vero）、乳地鼠腎細(xì)胞（BHK-21/13）、豬腎細(xì)胞（PK）和貓腎細(xì)胞（CRFK）等[8]。

2　流行病學(xué)

雞病毒性關(guān)節(jié)炎病毒在自然界分布廣泛，能夠從多種鳥類體內(nèi)分離得到。但家雞和火雞是目前所知道的能被ARV引起關(guān)節(jié)炎的動物。病毒在雞群的傳播是依靠垂直傳播和水平傳播這兩種方式，其中水平傳播是該病傳播的主要途徑，主要是由直接或間接接觸引起的。該病傳播迅速，一年四季均可發(fā)生，一般呈散發(fā)或地方性流行。2011年趙圓圓等[9]應(yīng)用ELISA方法對采自安徽省的205份雞血請進(jìn)行ARV抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肉雞陽性率為55.88%，蛋雞陽性率為92.23%。2014年靳繼惠等[10]應(yīng)用ELISA標(biāo)準(zhǔn)試劑盒首次大批量地對全國19個省市的17 058份雞血清樣品進(jìn)行了ARV抗體檢測，共檢出ARV抗體陽性血清15 680份，陽性率為92.83%?？梢姡覈鄶?shù)雞群都存在ARV的感染。

病毒感染雞只后首先在呼吸道和消化道內(nèi)進(jìn)行復(fù)制進(jìn)入血液，一段時間后出現(xiàn)毒血癥，隨后向各組織器官擴(kuò)散，但以關(guān)節(jié)腱鞘和消化道內(nèi)含毒量最高。該病毒在肉雞中傳播較為迅速，由于墊料等原因在籠養(yǎng)的蛋雞中傳播較慢。一日齡雛雞最易感，隨著日齡的增大易感性逐漸下降，16周齡以后易感性顯著降低[11]。青年肉雞感染呼腸孤病毒可引起關(guān)節(jié)炎，生長速度減慢，生產(chǎn)性能下降，但往往不會引起死亡。

3　診斷方法

3.1臨床診斷

雞病毒性關(guān)節(jié)炎的臨床癥狀與很多細(xì)菌引起疾病的癥狀相似，如大腸桿菌、沙門氏菌等都可引起關(guān)節(jié)腫脹和消化系統(tǒng)疾病。所以根據(jù)臨床癥狀，病理變化及趾部的腫脹情況只能做出粗略的診斷，如需確診需要依靠試驗室先進(jìn)的診斷技術(shù)。

3.2實驗室診斷

3.2.1病原分離鑒定根據(jù)臨床癥狀，取含病毒較多的組織，進(jìn)行剪碎，研磨，加入生理鹽水，離心后用取上清液，在雞胚的卵黃囊上培養(yǎng)。如果所取病料中病毒含量較高，雞胚將在接種后3～5 d內(nèi)死亡，雞胚皮下充血，呈紫紅色。病原的分離鑒定方法準(zhǔn)確可靠，通?？梢宰鳛榇_診的依據(jù)，但該方法操作較為繁瑣，需要花費(fèi)大量的時間。

3.2.2瓊脂擴(kuò)散試驗瓊脂擴(kuò)散試驗是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在含有電解質(zhì)的半固體凝膠中進(jìn)行自由擴(kuò)散，當(dāng)抗原與相應(yīng)抗體比例合適時，在相遇處產(chǎn)生白色沉淀。瓊脂擴(kuò)散試驗敏感性差，但操作簡單。陳士友等[12]應(yīng)用此技術(shù)對南京某雞場雞群ARV抗體的分布進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，瓊脂擴(kuò)散試驗不適宜檢測低濃度的抗體，但在檢測雞群群抗體水平時易于推廣應(yīng)用。

3.2.3酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）酶聯(lián)免疫吸附試驗因具有快速、敏感、簡便和易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，所以目前廣泛應(yīng)用于臨床診斷和血清學(xué)鑒定等方面。用ELISA方法對呼腸弧病毒抗體進(jìn)行檢測時，多用于檢測群體呼腸弧病毒的抗體水平。伊春紅[13]應(yīng)用純化的σB和σC蛋白作為包被抗原建立了ELISA檢測方法，能夠準(zhǔn)確地檢測到抗體的產(chǎn)生及消長規(guī)律，可以用于ARV的臨床診斷和免疫監(jiān)測。謝志勤等[14]用克隆的雜交瘤細(xì)胞株制備ARV的單克隆抗體，并用此抗體作為包被抗體，成功建立了雙抗夾心ELISA檢測方法，檢測敏感性達(dá)到5× 10-5ug/uL的病毒量并證明與其它病毒沒有交叉反應(yīng)?？梢姂?yīng)用ELISA檢測方法能夠?qū)崿F(xiàn)對ARV快速、敏感、特異性的檢測。

3.2.4免疫熒光技術(shù)目前免疫熒光技術(shù)被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、獸醫(yī)學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域，它是利用抗原與抗體相結(jié)合的原理，通過熒光素對抗原或抗體進(jìn)行特殊標(biāo)記形成熒光標(biāo)記物，再用制成的熒光標(biāo)記物作為分子探針對被測物內(nèi)的相應(yīng)抗原或抗體進(jìn)行檢測、定性及定位。1990年肖成蕊等使用此方法對人工感染ARV的雞進(jìn)行了一系列檢測，最終發(fā)現(xiàn)脾臟和肝臟是使用本方法進(jìn)行檢測的首選器官，檢出率高達(dá)100%。謝志勤等[15]利用自制的特異性抗ARV結(jié)構(gòu)蛋白σ3的熒光標(biāo)記IgG抗體檢測接種疑似ARV感染的病料，檢出的陽性樣品與病毒分離結(jié)果一致。研究表明，應(yīng)用免疫熒光檢測技術(shù)可以對ARV感染的臨床樣品進(jìn)行準(zhǔn)確地檢測。

3.2.5熒光定量 RT-PCR診斷方法 熒光定量RT-PCR方法由于靈敏度高、重復(fù)性好、已被大量應(yīng)用于疾病的早期診斷。曹琛福等[16]根據(jù)ARV S1基因設(shè)計引物和探針，建立了雞病性關(guān)節(jié)炎實時熒光RT-PCR檢測方法，檢測到核酸最低濃度為0.1023 pg/uL，要比普通的RT-PCR檢測靈敏度高2個數(shù)量級。李天芝等[17]也根據(jù)ARV S1基因保守序列設(shè)計引物，建立了ARV SYBR Green I熒光定量RT-PCR檢測方法，為快速檢測ARV提供了一種新的方法。研究表明，可廣泛應(yīng)用實時熒光RT-PCR方法對ARV進(jìn)行快速、敏感地檢測。

3.2.6其他檢測方法針對雞病毒性關(guān)節(jié)炎疾病的診斷還有很多其他的檢測方法如：基于納米材料電化學(xué)免疫傳感器檢測技術(shù)、基于熒光顯色的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)、地高辛探針技術(shù)等，都能夠?qū)崿F(xiàn)對雞病毒性關(guān)節(jié)炎的快速診斷。

4　預(yù)防

禽呼腸弧病毒在世界范圍內(nèi)分布廣泛，且耐受性強(qiáng)，在日常的光照、溫度下能夠存活較長的時間，并對一些常用的消毒劑具有一定的抵抗力，如1%來蘇兒、過氧乙酸等，但用70%乙醇、0.5%碘液可殺滅本病毒。由于該病毒即可垂直傳播又可水平傳播，使得控制該病毒在雞群中的傳播變得十分困難。雞場最好采取全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式，嚴(yán)禁從該病多發(fā)地區(qū)引進(jìn)種雞和購買種蛋。對該病毒感染的雞場應(yīng)該進(jìn)行徹底的清理和消毒，將感染此病毒的雞進(jìn)行隔離，將其排泄物無害化處理。

目前疫苗免疫對預(yù)防雞病毒性關(guān)節(jié)炎效果顯著，1日齡左右的雛雞對呼腸弧病毒最易感染，而且抵抗力較弱，至2周齡時仔雞開始建立自己相關(guān)的抵抗力，所以應(yīng)該早期對雞進(jìn)行免疫接種。我國現(xiàn)在已經(jīng)研制成ND、IBD和雞病毒性關(guān)節(jié)炎三聯(lián)苗，接種10 d后產(chǎn)生免疫力，保護(hù)率可達(dá)90%～100%[18]。經(jīng)過臨床實驗發(fā)現(xiàn)馬立克疫苗可以對呼腸孤病毒疫苗產(chǎn)生干擾作用，這兩種疫苗應(yīng)間隔使用。由于ARV可以垂直傳播，所以一定要對開產(chǎn)母雞做好免疫接種。

結(jié)語:目前雞群中呼腸孤病毒感染較為普遍，被感染的雞只會出現(xiàn)多種不同的臨床癥狀。通過肉眼和初步的臨床診斷無法做出確診，必須結(jié)合相應(yīng)的實驗室診斷技術(shù)。目前對感染的雞只尚無有效的治療方法和有效的治療藥物，但可以通過加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善飼養(yǎng)條件,加強(qiáng)免疫防制來預(yù)防呼腸孤病毒對雞群的感染。■（編輯：趙曉松）

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Research Progress of Avian Viral Arthritis in Chicken

Wang Xinghe
(Inner Mongolia Tongliao City Horqin District Animal Disease Prevention and Control Center,TongLiao,Inner Mongolia,028000)

Chicken viral arthritis is a viral infectious disease caused by avian reovirus.In the flocks can be spread through the vertical and horizontal spread of these two channels.The virus is mainly characterized by invasion of the toe joint,tarsal joint and tendon,which usually leads to clinical symptoms such as limping and swelling of tarsal joint.Autopsy of chickens can be seen in gastrocnemius tendon hemorrhage,necrosis or fracture,tibial shaft thickening and other autopsy symptoms.Can be based on clinical symptoms,autopsy results, combined with laboratory tests to confirm the disease.This article will be from the etiology,epidemiology,diagnostic methods and prevention of several aspects of the review.

Avian Virus Arthritis;Avian Reovirus;Research Progress

10.3969/j.issn.1008-4754.2016.11.048