重慶渝東部分地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學調查與藥敏試驗

袁 芳譚 波

（1.重慶市潼南區(qū)小渡鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶　402681；2.重慶市潼南區(qū)經形鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶　402672）

重慶渝東部分地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學調查與藥敏試驗

袁 芳1譚 波2

（1.重慶市潼南區(qū)小渡鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶402681；2.重慶市潼南區(qū)經形鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶402672）

1　材料與方法

1.1主要藥品和試劑

副豬嗜血桿菌正向間接血凝試劑盒，中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所產品；胰蛋白大豆培養(yǎng)基、嗜血桿菌屬培養(yǎng)用 V 因子試劑盒、微量生化發(fā)酵管、藥敏試紙盒，均為杭州天和微生物試劑有限公司產品。

1.2調查區(qū)域和待檢樣本

重慶市渝東地區(qū)云陽縣、梁平縣、萬州區(qū)3個區(qū)縣存欄30～200頭左右母豬的規(guī)模豬場 30～70 日齡仔豬。采用前腔靜脈采血方法收集血液樣本。分離病料來自疑似病仔豬跗關節(jié)液。

1.3試驗動物

購自重慶市種豬場榮昌縣石河麒豪分場健康正常的 6 頭體重12 kg/頭左右榮昌小公豬。

1.4臨床調查

采取描述流行病學調查法對 16個規(guī)模豬場副豬嗜血桿菌免疫、感染及防控措施等進行臨床調查；編號，登記，備用。同時，按 5個/區(qū)縣規(guī)模豬場對被調查的 3 個區(qū)縣共 15 個30～200 頭母豬的規(guī)模豬場進行電話采訪，編號并記錄調查結果，備用。

1.5渝東地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學檢測

1.5.1血液樣本采集和制備 按 3～6 個規(guī)模豬場/區(qū)縣、10～25個血樣/規(guī)模豬場、3～5 mL/頭仔豬對被采樣豬場的 30～70 日齡保育仔豬前腔靜脈采血，編號，靜置 15～30 min，4 ℃靜置傾斜過夜。取上層液體 5 000 r/min 離心 15 min，取上清液，編號4 ℃保存，備用。

1.5.2血清樣本的副豬嗜血桿菌血清學檢測 采用副豬嗜血桿菌正向間接血凝試驗診斷試劑盒。具體操作及判定標準參照魏光河等的報道。

1.6疑似菌株的分離和藥敏試驗

1.6.1培養(yǎng)基的制備 參照莎莎等制備胰蛋白大豆瓊脂（TSA）、胰蛋白大豆肉湯、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，無菌檢驗并4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6.2疑似菌株的分離鑒定 參照魏光河、莎莎等對副豬嗜血桿菌正向血凝試驗呈強陽性及陽性豬只的關節(jié)液樣品從顯微形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、生化反應、動物回歸試驗等作實驗室副豬嗜血桿菌分離鑒定。統(tǒng)計并記錄分離菌株數量，命名及編號，備用。

1.6.3分離菌株藥敏試驗 參照魏光河對疑似菌株作紙片擴散法藥敏試驗，重復1次，取其平均值作為試驗結果。結果判定標準參考杭州天和微生物試劑有限公司《藥敏實驗紙片法的抑菌范圍解釋標準》推薦的紙片擴散標準。

1.7渝東地區(qū)三區(qū)縣及各規(guī)模豬場副豬嗜血桿菌陽性率差異分析

采用 SPSS17.0.1 統(tǒng)計軟件對3 區(qū)縣副豬嗜血桿菌感染率作單因子方差分析，判定標準：P＞0.05，差異不顯著；P＜0.05，判定為差異顯著；P＜0.01，差異極顯著。

2　結果

（1）重慶渝東地區(qū)副豬嗜血桿菌病的臨床調查調查可知，三區(qū)縣養(yǎng)豬業(yè)集約化程度、養(yǎng)殖水平總體均偏低；青霉素類、四環(huán)素類、氯霉素、大環(huán)內酯類、喹諾酮類藥品及中草藥提取物注射液為該地區(qū)規(guī)模豬場使用頻率較高的藥品。

（2）渝東地區(qū)規(guī)?；i場副豬嗜血桿菌血清學調查結果 3 個區(qū)縣 16 個規(guī)模化豬場共制備 312份待檢血清樣本，副豬嗜血桿菌陽性及強陽性血清樣本60份，陽性率19.23%，規(guī)模豬場平均陽性率為1.2%。單因素方差分析可知，云陽縣、梁平縣、萬州區(qū)3區(qū)縣間及3區(qū)縣內各規(guī)模豬場間副豬嗜血桿菌血清學陽性率差異不顯著，P=0.08＞0.05。

（3）疑似副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥敏比較表1 重慶渝東地區(qū)規(guī)模豬場副豬嗜血桿菌臨床調查結果（單位：個）調查指標實地調查數量 個數 百分率 / % 電話采訪數量 個數 百分率 / % 被調查豬場總數 總百分率 / %規(guī)?！?00頭母豬。

3　討論

（1）整個被調查地區(qū)副豬嗜血桿菌陽性率平均為19.2%，初步說明該地區(qū)規(guī)模豬場副豬嗜血桿菌的感染總體偏低，這和該地區(qū)養(yǎng)豬水平較低下，還處于傳統(tǒng)養(yǎng)殖的散養(yǎng)至初步集約化發(fā)展的過渡階段，各種豬只的貿易相對較滯后，外源性疾病尤其以圓環(huán)病毒感染、豬繁殖與呼吸綜合征等免疫抑制性疾病相對較少有關。本文80.6%的自繁自養(yǎng)及種豬大部分購自本地區(qū)的臨床調查結果印證了該地區(qū)養(yǎng)豬水平較低。3區(qū)縣各規(guī)模豬場副豬嗜血桿菌陽性率差異不顯著P＞0.05，與3區(qū)縣75%的被調查豬場均為非標準化豬舍及粗放式養(yǎng)殖直接關。

（2）4份副豬嗜血桿菌血清學陽性關節(jié)液共分離鑒定出 3 株疑似副豬嗜血桿菌，75%的一致性證實了副豬嗜血桿菌正向血凝診斷試劑盒的靈敏和準確性。由于跗關節(jié)液的采集相對不易操作及應激較大，豬場負責人不配合采集工作是本次關節(jié)液樣本數相對較少的直接原因，沒能較全面反應和了解渝東3區(qū)縣副豬嗜血桿菌的實驗室診斷感染率為本次研究的不足。

（3）藥物使用頻率直接影響規(guī)模豬場副豬嗜血桿菌耐藥程度。3株疑似副豬嗜血桿菌分離菌株對第3代頭孢類藥物高度敏感；對四環(huán)素類、喹諾酮類及青霉素類明顯耐藥，這與本文臨床調查獲知四環(huán)素類、喹諾酮類及青霉類為該地區(qū)規(guī)模豬場高頻率使用藥品結果一致。該3株分離菌株與魏光河分離的重慶渝西株、徐成剛分離的廣東株藥敏譜各異，這與副豬嗜血桿菌血清型多、易耐藥等病原特點有關。