雛鵝大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析

許英民（黑龍江省鐵力市獸醫(yī)專家門診黑龍江伊春152500）

雛鵝大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析

許英民
（黑龍江省鐵力市獸醫(yī)專家門診黑龍江伊春152500）

雛鵝致病性大腸桿菌是雛鵝的一種常見病，以危害7～45日齡的雛鵝，給養(yǎng)鵝業(yè)造成極大的經(jīng)濟損失。臨床上表現(xiàn)為精神沉郁，羽毛松亂，怕冷，扎堆，不斷尖叫，下痢，糞便惡臭，帶白色黏液或混有血絲等。通過對大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性的分析，可找出敏感菌株進行治療。

雛鵝；大腸桿菌；分離鑒定；耐藥性分析

doi：10.3969/j.issn.1008-4754.2016.7.037

雛鵝大腸桿菌病是雛鵝感染致病性大腸桿菌引起的一種急性、或慢性細菌性傳染病。雛鵝感染大腸桿菌后，一般日齡在7～45日齡，主要發(fā)生急性敗血癥、氣囊炎、心包炎、肝周炎、眼炎等。大腸桿菌病的病原是由某種血清型的大腸桿菌所致，雛鵝有O1、O2、O6等血清型。

黑龍江省鐵力市林業(yè)局某林業(yè)經(jīng)營所張某養(yǎng)鵝場，飼養(yǎng)雛鵝2 000只，雛鵝患有精神不振，腹瀉，糞便帶黏液，并有血絲，雛鵝扎堆等臨床癥狀，但是用藥物治療效果不大，出現(xiàn)死亡。據(jù)不完全統(tǒng)計，該病的發(fā)病率為24% ～38%，死亡率在10%～20%給養(yǎng)鵝業(yè)造成極大的經(jīng)濟損失。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1病料黑龍江省鐵力市林業(yè)局某林業(yè)經(jīng)營所張某飼養(yǎng)的15日齡雛鵝，發(fā)病后死亡22只，張某送檢的8只雛鵝，具有典型的大腸桿菌病癥狀，無菌條件下采集死亡雛鵝的心血、肝臟、脾臟及小腸內容物作為分離材料。

1.1.2培養(yǎng)基普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，均購自北京奧博星生物技術有限公司，哈爾濱生物技術分公司。

1.1.3生化試劑各種糖發(fā)酵管、尿素酶試劑、甘露醇、硫化氫試劑等，均購自北京天壇藥物生物試劑有限公司，某生物試劑商店。

1.1.4藥敏紙片購自杭州天和微生物試劑有限公司，下屬的某試劑商店。

1.1.5試驗動物選自黑龍江省鐵力市農場某養(yǎng)兔場，健康易感染試驗兔。

1.2方法

1.2.1臨床癥狀及病理解剖觀察觀察發(fā)病及死亡雛鵝的臨床癥狀，并進行解剖死亡雛鵝，觀察病死雛鵝病理變化特征。

1.2.2涂片鏡檢無菌采取病死雛鵝的肝臟、脾臟、心血和淋巴結，分別進行革蘭氏染色，用1 000倍顯微鏡進行鏡檢，觀察結果。

1.2.3細菌分離與培養(yǎng)在無菌條件下，取死亡雛鵝的心血、肝臟、脾臟分別劃線接種于普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，在37.0℃恒溫箱培養(yǎng)24 h；從麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上選擇均勻、典型、紅色優(yōu)勢菌落，接種于肉湯培養(yǎng)基上，在37.0℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h，進行純化備用。

1.2.4生化試驗根據(jù)細菌的培養(yǎng)特征、染色形態(tài)特征，挑取單個菌落接種于大腸桿菌微量生化鑒定管，置于37.0℃恒溫箱中，培養(yǎng)24 h，觀察結果。

1.2.5動物回歸試驗將所分離到的細菌菌株培養(yǎng)物，進行調節(jié)菌液濃度為40×108、20×108、10× 108、5×108、1×108CFU/mL，在各頸部皮下注射健康試驗兔3只，進行觀察，并做好記錄。

1.2.6藥敏試驗用常規(guī)紙片法做藥敏試驗，挑取適量的細菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細菌涂布到營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上。將含有定量抗菌素藥物的試紙片貼在已接種細菌的瓊脂培養(yǎng)基表面上，37.0℃恒溫箱中，培養(yǎng)24 h。抑菌環(huán)的大小可看出細菌對藥物的敏感程度。

2　結果

2.1臨床癥狀觀察

雛鵝到15 d之后，即出現(xiàn)精神不振，食欲減退，羽毛蓬亂無光澤，怕冷擠成一堆。表現(xiàn)為下痢，糞便稀薄，有一股難聞的氣味，帶白色黏液或混有血絲、血塊和氣泡，一般呈青綠色或灰白色。肛門周圍污穢，羽毛沾滿糞便，干固后使排便受阻，渴欲增加。喘氣、呼吸困難，最后衰竭而死亡。

2.2剖檢變化

心包腔積液，心包液常見有纖維素性滲出物，心包膜渾濁、不透明、增厚，呈灰白色，嚴重病例心包膜與心外膜粘連。有些病例心外膜粗糙，附著纖維素性滲出物。氣囊膜增厚、混濁，表面附著纖維素性或黃白色干酪樣滲出物。滲出物有時還會成片狀填滿氣囊。肝臟呈不同程度腫大，肝被膜表面有一層不同程度的纖維素性薄膜覆蓋，薄膜易于剝離。肝表面可見到邊緣不整齊、暗灰白色、不突出的小壞死點。有的病例可見肺充血、出血、水腫。腸系膜淋巴結腫大呈淡紅色，小腸黏膜脫落伴有出血，以十二指腸最為嚴重。結腸、回腸、空腸內充滿顆粒狀物的水樣內容物。

2.3涂片鏡檢

將肝臟、脾臟、心血、淋巴結進行涂片，鏡檢，可見到革蘭氏染色陰性，兩端鈍圓，單個散在或成雙排列的球桿菌，未見有芽孢和莢膜。

2.4培養(yǎng)特性

分離菌株培養(yǎng)物在普通瓊脂平板上生長良好，形成圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊、直徑約1～3 mm的灰白色、半透明菌落；在37.0℃恒溫箱中，培養(yǎng)24 h后的肉湯培養(yǎng)基呈均勻渾濁，管底有少量白色沉淀物；在麥康凱平皿上長出直徑1～2 mm紅色透明菌落，對單個菌落和肉湯培養(yǎng)物涂片，進行染色，鏡檢，均可見到與病料涂片所見到一致的細菌。

2.5生化試驗

所分離的菌落在麥康凱培養(yǎng)基上為鮮桃紅色或微紅色菌落中心呈深桃紅色，圓形、扁平、邊緣整齊，表面光滑，濕潤；分離細菌在大腸桿菌顯色平板上為紫色，該菌初步鑒定為大腸桿菌。生化試驗表現(xiàn)為：M.R.試驗陽性，V-P試驗陰性，分離菌能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、甘露醇、鼠李糖、山梨醇，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；不分解側金盞花醇和肌醇；能產(chǎn)生靛基質，均不產(chǎn)生硫化氫，尿素酶陰性。符合上述生化反應，分離菌株被鑒定為大腸桿菌。

2.6動物回歸試驗

將分離菌株的純化培養(yǎng)物調節(jié)菌液濃度，各頸部皮下注射健康試驗兔5只，1.0 mL/只，結果為：40×108cfu/mL，死亡兔5只；20×108cfu/mL，死亡兔 4只；10×108cfu/mL，死亡兔2只；5× 108cfu/mL，死亡兔1只；1×108cfu/mL，死亡兔1只。

從上述表明，試驗兔攻毒后均出現(xiàn)精神不振、食欲減退，并發(fā)生不同程度的腹瀉等。解剖與檢查死亡及發(fā)病試驗兔，表現(xiàn)出典型大腸桿菌病的臨床癥狀及病理變化，并能從試驗兔體內分離到攻毒菌株。

2.7藥敏試驗

對所分離到的菌株進行常規(guī)紙片法藥敏試驗，其結果該菌對注射頭孢噻呋、氟苯尼考、復方阿莫西林高敏，對強力霉素、氨芐青霉素中敏，對環(huán)丙沙星、慶大霉素、林可霉素耐藥。

3　分析與討論

大腸桿菌廣泛存在自然界，大腸桿菌是動物腸道中最常見的一種細菌病之一，大腸桿菌屬于有致病力的血清型，一般約占10%～18%。當育雛舍內環(huán)境衛(wèi)生條件不良、舍內和地面潮濕、育雛舍內通風不好、有害氣體增多、飼養(yǎng)密度過大非常擁擠等因素都能誘發(fā)本病的傳播和蔓延。

初生雛鵝感染是由于種蛋被感染，種蛋非常臟，消毒不嚴，孵化室不夠衛(wèi)生等原因都會感染。因此，應注意育雛期間的保溫及飼養(yǎng)密度，改善飼養(yǎng)環(huán)境，加強通風換氣，降低灰塵，經(jīng)常清除糞便，可大大減少有害氣體的含量（如：氨氣。對環(huán)境、育雛舍、孵化室、孵化器要經(jīng)常清掃和消毒）。用具，如：食槽、飲水器經(jīng)常用0.2%過氧乙酸或0.3%百毒殺進行噴霧消毒。

在雛鵝群中，一旦發(fā)現(xiàn)有發(fā)病或死亡的雛鵝時，應立即進行細菌的分離、藥敏試驗，可找出該菌較感染的幾種藥物，加入到飼料和飲水中，對控制疾病將會起到最理想的效果。

“這個育雛舍已有好幾年不用了”，據(jù)調查和養(yǎng)殖戶張某的介紹，在育雛前進行1次噴霧消毒，用的是來蘇兒，進行噴霧，但并未完全進行消毒，未按要求進行徹底的消毒。而在有疫情時也未對雛鵝進行隔離，在原位治療，死亡雛鵝到處亂扔，或讓狗吃，也不遠離鵝場進行深埋或焚燒，使大腸桿菌的病原菌進行擴散、傳播和蔓延，此次暴發(fā)給養(yǎng)鵝場造成很大的經(jīng)濟損失。■（編輯：趙曉松）

［1］蔡寶祥，家畜傳染病學（第四版）［M］.北京：中國農業(yè)出版社，2001.

［2］甘肅農業(yè)大學，獸醫(yī)微生物實習指導［M］.北京：中國農業(yè)出版社，1988.

［3］東北農業(yè)大學，獸醫(yī)臨床診斷學［M］.北京：中國農業(yè)出版社，2001.

［4］楊宏禹，一株大腸桿菌YT株的分離鑒定［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2015（6）：54-56.

［5］安麗英，獸醫(yī)實驗診斷［M］.北京：中國農業(yè)大學出版社，2000.