H9與HepG-2體外共培養(yǎng)上清對(duì)HepG-2增殖遷移及凋亡的影響①

何雪梅　鄭良棟　張　婷　劉夢(mèng)楠　馮　濤

(重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，重慶400000)

·基礎(chǔ)免疫學(xué)·

H9與HepG-2體外共培養(yǎng)上清對(duì)HepG-2增殖遷移及凋亡的影響①

何雪梅鄭良棟張婷劉夢(mèng)楠馮濤

(重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，重慶400000)

[摘要]目的：研究胚胎干細(xì)胞H9與肝癌細(xì)胞株HepG-2共培養(yǎng)上清對(duì)肝癌細(xì)胞HepG-2增殖、遷移及凋亡的影響，并探討其可能機(jī)制。方法：體外共培養(yǎng)H9與HepG-2，于不同時(shí)間即12、24、36、48 h取得上清，并把不同濃度上清即20%、40%、60%、80%作用于HepG-2細(xì)胞，于倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和形態(tài)變化；用MTS法檢測(cè)不同濃度上清分別作用HepG-2細(xì)胞24、48 h后細(xì)胞的增殖情況；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況；用Hochest33258染色檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況；Transwell小室法檢測(cè)上清對(duì)細(xì)胞侵襲遷移的影響。結(jié)果：不同濃度的共培養(yǎng)上清液均對(duì)HepG-2細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用，并且40%濃度及以上的濃度能明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡，主要是早期和晚期凋亡，小室法也看出，上清對(duì)肝癌細(xì)胞的侵襲和遷移也具有明顯的抑制作用,同時(shí)，上清對(duì)正常的肝細(xì)胞L02無明顯的作用。結(jié)論：胚胎干細(xì)胞與肝癌細(xì)胞HepG-2共培養(yǎng)上清能夠在體外明顯抑制肝癌細(xì)胞HepG-2的增殖、遷移和侵襲，并且促進(jìn)其凋亡，并且具有濃度依賴性，共培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，抑制效果越好。說明此上清具有一定的抗腫瘤效應(yīng)。

[關(guān)鍵詞]共培養(yǎng)上清;肝癌細(xì)胞HepG-2;胚胎干細(xì)胞H9;細(xì)胞增殖;細(xì)胞凋亡

原發(fā)性肝癌(Primary carcinoma of liver)，以下簡(jiǎn)稱肝癌，是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一。腫瘤的發(fā)生，一是由基因決定，二是取決于機(jī)體的免疫功能，免疫力下降或者免疫功能失調(diào)會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[1，2]。從發(fā)生學(xué)角度來看，腫瘤細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞在細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)和分化等方面都有許多共同特點(diǎn)，尤其是它們都具有驚人的分裂和受原癌基因調(diào)控的能力，同時(shí)在腫瘤侵襲與胚胎著床過程中也有著近似的侵入方式及相關(guān)酶解蛋白分子的參與[3-6]，最早在2004年，Lightfoot等[7]報(bào)道鼠胚胎干細(xì)胞可以在體外抑制胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng),國(guó)內(nèi)董偉等[8]證明，在小鼠Lewis肺癌模型中接種胚胎干細(xì)胞能顯著緩解機(jī)體的免疫抑制狀態(tài)，誘導(dǎo)抗腫瘤免疫的產(chǎn)生，對(duì)實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展具有顯著的抑制作用[9]。張弘等[10]報(bào)道人胚胎干細(xì)胞對(duì)卵巢癌生長(zhǎng)的抑制作用，研究發(fā)現(xiàn)人胚胎干細(xì)胞對(duì)卵巢癌細(xì)胞的體內(nèi)外生長(zhǎng)有抑制作用。后曉南等[11]應(yīng)用胚胎干細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞在體外共培養(yǎng)體系，觀察小鼠囊胚與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)行為，人肺癌細(xì)胞株A549對(duì)囊胚體外脫帶、貼附及擴(kuò)展的能力無顯著性影響。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展還與周圍微環(huán)境密切相關(guān)，腫瘤細(xì)胞向周圍微環(huán)境中分泌或接受微環(huán)境的分子信號(hào)，直接影響腫瘤細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)和侵襲，因而微環(huán)境也是腫瘤治療的重要因素。盡管腫瘤的微環(huán)境一直被認(rèn)為是阻礙腫瘤治療的因素，但也不能否認(rèn)特定的環(huán)境因素也有可能具有潛在的治療腫瘤的作用[12]，近來有關(guān)胚胎干細(xì)胞影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為的研究為治療腫瘤提供了一種新的思路。本課題在總結(jié)前人研究工作的基礎(chǔ)上，研究HepG-2肝癌細(xì)胞在體外刺激胚胎干細(xì)胞時(shí)，胚胎干細(xì)胞做出的一定的抗腫瘤作用，在細(xì)胞和分子水平探索其抗腫瘤作用的具體機(jī)制。通過建立胚胎干細(xì)胞-HepG-2肝癌細(xì)胞體外接觸式共培養(yǎng)體系，觀察和檢測(cè)胚胎干細(xì)胞與HepG-2肝癌細(xì)胞之間的相互作用，及胚胎干細(xì)胞對(duì)HepG-2肝癌細(xì)胞的直接抑制作用?；谝陨涎芯课覀兿Ｍㄟ^胚胎干細(xì)胞與癌細(xì)胞株共培養(yǎng)來研究其抗癌效應(yīng)，并且進(jìn)一步探究其抗癌效應(yīng)的機(jī)制，為腫瘤的治療找到一種新的生物治療方法。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1主要試劑高糖DMEM培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基(無丙酮酸鈉)，胎牛血清(FBS)購(gòu)自Gibco公司，胰蛋白酶購(gòu)于美國(guó)Hyclone公司，磷酸鹽緩沖液(PBS)、 二甲基亞砜(DMSO)由重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)研究所提供。MTS購(gòu)于重慶榮達(dá)生物技術(shù)有限公司；引物由上海生工生物工程技術(shù)有限公司合成；Hochest33258購(gòu)于碧云天生物技術(shù)公司： PSeasy培養(yǎng)基，干細(xì)胞傳代工作液EDTA、Matrial膠，購(gòu)于北京賽貝生物試劑公司。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)或進(jìn)口分析純?cè)噭?/p>

1.1.2主要儀器培養(yǎng)箱，熒光倒置顯微鏡：Olympus，日本。超凈工作臺(tái)：SW-GY-IC標(biāo)準(zhǔn)型，蘇州凈化設(shè)備廠。CO2培養(yǎng)箱：SNA-320D型，日本。酶標(biāo)儀：Bio-rad。

1.1.3細(xì)胞株及培養(yǎng)HepG-2、L02為貼壁細(xì)胞，為本實(shí)驗(yàn)室留種(購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù))，用貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)方法。培養(yǎng)液為含10%胎牛血清的DMEM，常規(guī)培養(yǎng)、消化、傳代。實(shí)驗(yàn)均用對(duì)數(shù)期細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞為H9人干細(xì)胞系，購(gòu)于北京賽貝生物公司，H9是James Thomson實(shí)驗(yàn)室在1998年建立的第一批人ESC[13]，廣泛用于全球?qū)嶒?yàn)室各類干細(xì)胞研究，是被國(guó)際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系，H9來自雌性胚胎，為貼壁細(xì)胞培養(yǎng)方式，培養(yǎng)基為無血清的E8培養(yǎng)基，用六孔板培養(yǎng)，Matril基質(zhì)膠鋪板，每天換液一次，待細(xì)胞邊界融合80%左右開始傳代，消化液用EDTA消化，輕輕吹打，凍存用90%E8培養(yǎng)基10%DMSO凍存液。

1.2方法

1.2.1共培養(yǎng)上清的提取[14，15]將培養(yǎng)好的HepG-2按2×104/孔提前種于24孔板內(nèi)，于37℃、5%CO2飽和濕度的環(huán)境中貼壁生長(zhǎng)12 h，待貼壁后吸掉培養(yǎng)基，將hEGCs用EDTA在37℃消化5 min，機(jī)械分割hEGCs克隆為大小相似的小細(xì)胞團(tuán)，把HepG-2細(xì)胞接種到已鋪有hEGCs細(xì)胞的培養(yǎng)孔中(10個(gè)細(xì)胞團(tuán)/孔)做為實(shí)驗(yàn)組，用僅HepG-2和hESC的孔作為空白對(duì)照組，L02與胚胎干細(xì)胞組作為條件對(duì)照組，于12、24、36、48 h后收集上清液。

1.2.2上清對(duì)HepG-2形態(tài)的影響將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG-2細(xì)胞按5×104ml-1細(xì)胞濃度，取100 μl種于96孔板中，24 h待細(xì)胞貼壁后，加入不同時(shí)間、終濃度為20%、40%、60%、80%的上清液共同培養(yǎng)，以不加藥物的孔為對(duì)照組，48 h、60 h觀察細(xì)胞的形態(tài)變化。

1.2.3MTS法研究上清對(duì)HepG-2細(xì)胞增殖的影響將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG-2細(xì)胞按5×104ml-1細(xì)胞濃度，取100 μl種于96孔板中，24 h待細(xì)胞貼壁后，加入不同時(shí)間、終濃度為20%、40%、60%、80%的上清液共同培養(yǎng)，以不加藥物的孔為對(duì)照組，每個(gè)藥物濃度及對(duì)照組都設(shè)三個(gè)復(fù)孔。 培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24、48 h后，每孔分別加入20 μl的MTS染色液，于37℃孵箱中孵育4 h，用酶標(biāo)儀于490 nm下測(cè)定各孔吸光度，求平均值計(jì)算Inhibitory。用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)作曲線估計(jì)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果取平均值，以相對(duì)應(yīng)的OD值表示細(xì)胞增殖能力的大小，繪制生長(zhǎng)曲線。抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光度/不加上清的陰性對(duì)照組的吸光度)×100%。

1.2.4Transwell侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)按1∶5比例將Matrigel膠與無血清培養(yǎng)基配成基質(zhì)膠，混勻后按50 μl/室加入Transwell小室中，37℃培養(yǎng)箱中孵育2~3 h使其固態(tài)化。消化HepG-2細(xì)胞，用無血清培養(yǎng)基清洗后重懸細(xì)胞，在上室中加入200 μl含1×105個(gè)細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸液，下室中加入600 μl含10%血清的培養(yǎng)基，37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后1%甲醛固定，0.1%結(jié)晶紫染色后擦去小室上表面的基質(zhì)膠及細(xì)胞，在顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，觀察拍照并計(jì)數(shù)。Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)不在小室中加基質(zhì)膠，上室中加入200 μl 含3×104個(gè)細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸液，其余操作步驟同侵襲實(shí)驗(yàn)。

1.2.5檢測(cè)細(xì)胞凋亡的改變將HepG-2細(xì)胞接種于6孔板，每孔接種細(xì)胞3×104個(gè)。37℃、5%的CO2培養(yǎng)，24 h加入不同濃度的上清(分組：實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的上清，對(duì)照組不加藥)。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，胰酶消化收集細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌1次，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡。

2結(jié)果

2.1上清對(duì)HepG-2細(xì)胞增殖的影響(表1、圖1)為觀察上清對(duì)肝癌細(xì)胞HepG-2的增殖抑制作用，實(shí)驗(yàn)使用不同濃度、不同時(shí)間段的上清處理HepG-2，MTS結(jié)果顯示：20%濃度的48 h上清作用于肝癌HepG-2細(xì)胞的24、48 h的抑制率分別為22.09%、28.37%；40%濃度的上清作用于肝癌HepG-2細(xì)胞的24、48 h的抑制率分別為38.64%、40.83%。60%濃度的上清作用于肝癌HepG-2細(xì)胞的24、48 h的抑制率分別為46.60%、55.88%；80%濃度的上清作用于肝癌HepG-2細(xì)胞的24、48 h的抑制率分別為57.91%、62.85%。結(jié)果表明：各濃度組的共培養(yǎng)上清對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG-2細(xì)胞的抑制作用，強(qiáng)于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理，除共培養(yǎng)12 h和20%的濃度對(duì)其影響差異不顯著外(P>0.01)，其他組差異均有顯著性(P<0.05)，綜上可知，這種抑制作用與藥物濃度及作用時(shí)間呈正相關(guān)，劑量越大、藥物作用時(shí)間越長(zhǎng)，抑制率越高(P<0.01或P<0.05)。而對(duì)L02細(xì)胞的抑制作用隨著劑量增大、藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制率亦有增加的趨勢(shì)，但差異無顯著性(P>0.05)。

Note：Difference between concentration，1)P<0.05；2)P<0.01.Difference between time，3)P<0.05，4)P<0.01.

2.2上清對(duì)HepG-2形態(tài)的影響(圖2)HepG-2肝癌細(xì)胞與胚胎干細(xì)胞接觸式共培養(yǎng)上清作用于HepG-2肝癌細(xì)胞后，在倒置熒光顯微鏡下觀察到肝癌細(xì)胞HepG-2形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯的變化，與空白對(duì)照組正常培養(yǎng)狀態(tài)下(不加上清)的HepG-2肝癌細(xì)胞相比，實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞數(shù)量增加緩慢，細(xì)胞形態(tài)皺縮變形，細(xì)胞核周圍多出現(xiàn)空泡，處于分裂相細(xì)胞明顯減少，部分細(xì)胞出現(xiàn)老化或者死亡跡象，并且隨著藥物濃度的增加，現(xiàn)象越明顯，細(xì)胞數(shù)量越少，并且細(xì)胞間連接少，細(xì)胞壁貼壁不牢靠，而未用上清的對(duì)照組細(xì)胞呈上皮型貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞輪廓清楚,細(xì)胞間接觸緊密,胞質(zhì)中無異常顆粒出現(xiàn),增殖旺盛具體見圖2，綜上可以發(fā)現(xiàn)，共培養(yǎng)上清能對(duì)肝癌細(xì)胞的形態(tài)產(chǎn)生很大的影響，并且具有濃度依賴性，濃度越高，抑制效果越好。

2.3Hoechst33258熒光染色凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化經(jīng)Hoechst33342 染色后，熒光顯微鏡下觀察:對(duì)照組細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核飽滿，呈均勻藍(lán)色;上清組部分細(xì)胞細(xì)胞核致密濃染，固縮，細(xì)胞邊緣處伴有凋亡小體產(chǎn)生等細(xì)胞凋亡特征，可知干細(xì)胞上清和共培養(yǎng)上清都能促進(jìn)細(xì)胞的凋亡，但是共培養(yǎng)細(xì)胞組的凋亡率明顯高于非共培養(yǎng)組，見圖3。

2.4上清對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響上清可抑制 HepG-2 細(xì)胞的遷移、侵襲，其中平均穿膜細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01 );加上清組遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.01)。見圖4、5。

2.5流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)對(duì)照組與加入20%、40%、60%、80%濃度上清對(duì)人肝癌細(xì)胞株作用48 h后細(xì)胞的凋亡情況，對(duì)照組凋亡率為0.44%，四個(gè)用藥組凋亡率分別為5.85%、11.08%、18.27%和20.9%，與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，細(xì)胞早期凋亡率明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，而上清對(duì)L02細(xì)胞無明顯的抑制作用，見圖6。

3討論

肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC) 是世界五大惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康。目前，癌癥的治療方法主要有以下幾種：手術(shù)切除、放療、化療、中醫(yī)中藥治療?？傮w而言這些方法的效果不太令人滿意 。腫瘤的發(fā)生，一是由基因決定，二是取決于機(jī)體的免疫功能，免疫力下降或者免疫功能失調(diào)可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，所以通過提高機(jī)體免疫功能來發(fā)揮抗癌作用成為新的抗癌藥物的研究方向，同時(shí)，正常成人免疫功能早已定型，刺激正常人提高其免疫力是很困難的，故尋求有生命活力的干細(xì)胞及其受腫瘤細(xì)胞刺激產(chǎn)生的有效抗癌因子和免疫因子是很有意義的。近年來，作為惡性腫瘤第四種治療模式的生物治療研究得到蓬勃發(fā)展，取得了一系列可喜的成果，該領(lǐng)域的飛速發(fā)展為腫瘤治療提供了新希望。它的優(yōu)勢(shì)在于靶向性強(qiáng)，特異性高，效果確切，毒副作用小，遠(yuǎn)期抗癌效果好。胚胎干細(xì)胞是目前所知最全能的細(xì)胞，具有自我更新和多向分化的潛能，各種細(xì)胞自我調(diào)節(jié)方式及信號(hào)通路表達(dá)都是正常的。它與腫瘤細(xì)胞在某些調(diào)節(jié)信號(hào)上是相交叉的，鑒于此，我們猜想這種正常生長(zhǎng)發(fā)育的胚胎干細(xì)胞在與腫瘤細(xì)胞作用過程中可以控制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，逆轉(zhuǎn)其惡性的生物學(xué)活性。細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而爭(zhēng)取的一種死亡過程，具有重要的生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機(jī)制[16，17]。

本實(shí)驗(yàn)通過在體外共培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞和肝癌細(xì)胞，給胚胎干細(xì)胞體外直接接觸，刺激干細(xì)胞，再用這種體外作用過后的上清作用于肝癌細(xì)胞，研究對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、侵襲遷移和凋亡的影響。從結(jié)果可以看出，不同濃度的共培養(yǎng)上清液均對(duì)HepG-2細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用，并且40%濃度及以上的濃度能明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡，主要是早期和晚期凋亡，小室法也看出，上清對(duì)肝癌細(xì)胞的侵襲和遷移也具有明顯的抑制作用，同時(shí)，上清對(duì)正常的肝細(xì)胞L02無明顯的作用。胚胎干細(xì)胞與肝癌細(xì)胞HepG-2共培養(yǎng)上清能夠在體外明顯抑制肝癌細(xì)胞HepG-2的增殖、遷移和侵襲，并且促進(jìn)其凋亡，并且具有濃度依賴性，共培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，抑制效果越好。

說明此上清具有一定的抗腫瘤效應(yīng)。我們猜測(cè)，由于胚胎干細(xì)胞有全能分化的特點(diǎn)，肝癌細(xì)胞在體外可能刺激干細(xì)胞分泌一些免疫因子，能夠抑制肝癌細(xì)胞HepG-2的增殖、遷移和侵襲，并且促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡。上清中的這些細(xì)胞因子抑制HepG-2細(xì)胞增殖、遷移和侵襲行為，進(jìn)而限制腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。由于抗腫瘤作用機(jī)制一般具有多途徑、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，故其具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。同時(shí)，上清中具體有哪些免疫成分，都有待下一步研究。這種生物治療和從免疫的角度來治療腫瘤，具有很大的研究意義，可能為腫瘤的治療帶來新的希望。

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[收稿2015-08-05修回2015-08-14]

(編輯倪鵬)

Research H9 and HepG-2 in vitro co-culture supernatants affect HepG-2 proliferation,migration and apoptosis

HEXue-Mei,ZHENGLiang-Dong,ZHANGTing,LIUMeng-Nan,FENGTao.ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400000,China

[Abstract]Objective:To explore the influence of co-culture supernatant from embryonic stem cell H9 and hepatoma cell line HepG-2 on the proliferation,migration and apoptosis of hepatoma cell HepG-2.Methods: We conducted in virto co-culture of H9 and HepG-2,then obtained supernatants in 12 h,24 h,36 h and 48 h and let supernatants of different concentration,namely 20%,40%,60% and 80% to act on HepG-2 cells.We observed growth condition and morphological changes of the cells under an inverted fluorescence microscope.MTS method was employed to evaluate proliferation conditon of HepG-2 cells in 24 h and 48 h since supernatants of varied concentrations had been added.We applied flow cytometry to show the apoptosis of cells.We also detected apoptosis of cells using Hochest33258 chromosome.We probed influence of supernatants on migration of cells.Results: Co-culture supernatants of varied concentration all had inhibitive effect on proliferation of HepG-2 cells.Supernatants of concentrations higher than 40% promoted apoptosis, particularly early and late apoptosis of HepG-2 cells rather notably.Chamber method also revealed the supernatant′s inhibition to invasion and migration of HepG-2 cells,and it had no conspicuous effects on normal hepatocyte L02.Conclusion: Co-culture supernatant of embryonic stem cells and hepatoma cell HepG-2 significantly inhibits the proliferation,migration and invasion of hepatoma cell HepG-2 in virto while promoting its apoptosis.Its effectiveness is concentration-dependent and increases over time.These results prove the anti-tumor effectiveness of this supernatant.

[Key words]Co-culture supernatants;Hepatoma cell HepG-2;Embryonic stem cell H9;Cell proliferation;Apoptosis

通訊作者及指導(dǎo)教師：馮濤(1963年-)，男，碩士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事基因工程、腫瘤發(fā)病機(jī)理及基因治療方面研究。

作者簡(jiǎn)介：何雪梅(1989年-)，女，碩士，主要從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)方面研究，E-mail:609875364@qq.com。

中圖分類號(hào)R3
①本文為國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.81071770，81201679)。

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1000-484X(2016)02-0154-06

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.02.002 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.02.003