兔巴氏桿菌病的診斷與藥敏試驗

鄭吾興（山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局山東濱州256500）

兔巴氏桿菌病的診斷與藥敏試驗

鄭吾興
（山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局山東濱州256500）

2015年11月，山東省博興某兔場發(fā)生了一起以兔體溫升高、精神沉郁、呼吸急促、流黏液性鼻液為主要特征的疫病。為對疫病進行確診，并為疫病的防治提供參考依據(jù)，本研究經(jīng)發(fā)病情況、臨床特征、病理變化等臨床診斷以及涂片鏡檢、細菌分離培養(yǎng)、生化試驗、致病性試驗、PCR檢測等實驗室診斷確診為兔巴氏桿菌病，藥敏試驗顯示病原菌對氟苯尼考等15種藥物高度或中度敏感，為發(fā)病兔場確定了致病原因并提供了治療性藥物。

兔巴氏桿菌；診斷；藥敏試驗

兔巴氏桿菌病（Rabbit pasteurellosis）是由兔多殺性巴氏桿菌（Pasteurelamultocida）引起兔的一種急性、烈性、高度接觸性傳染?。?］，該病發(fā)病率高，傳播途徑多，傳播速度快，發(fā)病后若治療措施不及時可引起兔大批死亡，若治療措施及時可明顯降低死亡率，但也會引起兔生長遲緩及治療費用增加等［2］，使該病成為困擾我國養(yǎng)兔業(yè)健康發(fā)展的主要疾病之一。

2015年11月，山東省博興某兔場發(fā)生了一起以兔體溫升高、精神沉郁、呼吸急促、流黏液性鼻液為主要特征的疫病，根據(jù)發(fā)病情況、臨床特征、病理變化等初步診斷為疑似兔巴氏桿菌感染，為進一步確診，本研究進行了涉及涂片鏡檢、細菌分離培養(yǎng)、生化試驗、致病性試驗、PCR檢測等實驗室診斷，并通過藥敏試驗掌握了針對該致病菌的敏感性藥物，為兔場及時制定防控措施提供了參考。

1　發(fā)病情況

該兔場存欄兔1 000余只，發(fā)病兔221只，發(fā)病率達20%。兔發(fā)病后一般1～3 d死亡，死亡兔132只。該兔場曾進行過兔瘟疫苗的免疫，但未進行兔巴氏桿菌病疫苗的免疫。

2　臨床癥狀

病兔表現(xiàn)為精神沉郁、食欲減退、體溫升高、被毛凌亂、打噴嚏、呼吸急促、眼結(jié)膜和鼻腔黏膜出血、流黏液性鼻液。

3　病理變化

剖檢病死兔可見鼻腔內(nèi)積聚大量膿性黏液，鼻竇和副鼻竇黏膜紅腫，鼻腔黏膜部分區(qū)域糜爛，喉氣管有點狀出血，肺氣腫、出血，脾臟腫大，小腸、腸系膜出血。

4　涂片鏡檢

無菌采取病死兔的肺、肝臟等組織涂片、革蘭氏染色、鏡檢，可見革蘭氏陰性、短桿菌，單個或多個散在排列。

5　細菌分離培養(yǎng)

將無菌采取的肺、肝臟等組織接種于血清瓊脂平板，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，可見邊緣整齊、光滑濕潤、半透明、灰白色菌落。取典型菌落經(jīng)涂片、革蘭氏染色、鏡檢，可見革蘭氏陰性短桿菌。

6　生化試驗

將分離菌株培養(yǎng)液接種各種生化反應(yīng)管，結(jié)果顯示，分離菌株能發(fā)酵果糖、葡萄糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇，不能發(fā)酵乳糖、麥芽糖、肌醇，吲哚、觸酶、氧化酶試驗為陽性，尿素、VP試驗為陰性，符合巴氏桿菌的生化特性。

7　致病性試驗

將10只健康家兔隨機分為2組（試驗組和對照組），試驗組兔每只頸部皮下注射分離菌株培養(yǎng)物1.0m L（1.0×1010CFU/m L），對照組兔每只頸部皮下注射滅菌培養(yǎng)基1.0mL。12 h后，試驗組兔開始出現(xiàn)精神沉郁、體溫升高、咳嗽等癥狀，24～48 h內(nèi)死亡4只，1只兔在48 h后癥狀開始減輕，逐步恢復(fù)健康，但極度消瘦，10 d后剖殺。死亡兔的病理變化主要表現(xiàn)在肺出血、壞死，心外膜、呼吸道黏膜、淋巴結(jié)有出血點。未死亡兔出現(xiàn)肺出血，膿腫嚴(yán)重。死亡兔和未死亡兔的肺、肝等組織經(jīng)涂片、革蘭氏染色、鏡檢，均可見為革蘭氏陰性短桿菌。對照組的5只兔全部健活，無任何臨床癥狀。

8　PCR檢測

參照秦翠麗等［3］的方法設(shè)計合成1對兔巴氏桿菌檢測引物，并參照秦翠麗等［3］的PCR擴增方法進行分離菌株的PCR檢測，結(jié)果顯示分離菌株的PCR擴增產(chǎn)物在526 bp處有一條特異性條帶，與秦翠麗等［3］報道的大小完全一致，說明分離菌株為兔多殺性巴氏桿菌。

9　藥敏試驗

按常規(guī)方法測定分離菌株對常見藥物的敏感性，結(jié)果顯示分離菌株對氟苯尼考、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢噻呋、磺胺六甲氧嘧啶、四環(huán)素、阿莫西林等7種藥物高度敏感，對諾氟沙星、氯霉素、頭孢曲松鈉、阿米卡星、氨芐西林、慶大霉素、紅霉素、頭孢曲松鈉等8種藥物中度敏感，對新霉素、磷霉素2種藥物耐藥。

10　討論

由于本研究中的病例需要提供針對致病菌的治療性藥物，因此通過病原菌的分離鑒定與PCR檢測相結(jié)合的方法進行了病例的確診，使確診結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。從本研究中的藥敏試驗結(jié)果來看，此兔場用藥比較合理，17種常見藥物中僅有2種藥物耐藥，耐藥性并不是十分嚴(yán)重，但17種之中也有8種藥物的敏感性降低，應(yīng)引起重視。（編輯:趙曉松）

［1］石剛，張耀鵬，尹生輝.兔巴氏桿菌病的診斷要點及綜合防控措施［J］.畜牧與飼料科學(xué)，2015，35（8）:125-126.

［2］祖立闖，李嬌，王金良，等.兔巴氏桿菌病的診斷與綜合防治［J］.中國養(yǎng)兔，2015（，5）:32-35.

［3］秦翠麗，牛明福，李松彪，等.兔多殺性巴氏桿菌PCR檢測方法建立及優(yōu)化［J］.中國公共衛(wèi)生，2011，27（4）:527-528.

The Diagnosis of Rabbit Pasteurellosis and Drug Sensitive Test

Zheng Wuxing
（AnimalHusbandry and Veterinary Bureau，BinZhou ShanDong，256500）

In November 2015， Shandong Province Boxing a rabbit farm there was a rabbit fever， depression，shortness of breath， nasal mucus flow as the main feature of the disease. For the disease were diagnosed， and provide reference for the prevention and treatment of disease， the clinical diagnosis of the present study was approved by the incidence， clinical features， pathological changes and smear microscopy， bacterial isolation and culture， biochemical tests， pathogenicity test， PCR testing laboratory diagnosis diagnosed with pasteurellosis rabbit， susceptibility test showed the pathogen to florfenicol and other 15 kinds of drugs highly or moderately sensitive to determine the causes for the onset of rabbit farm and provides a therapeutic drug.

Rabbit pasteurellosis； Diagnostic； sensitivity test

10.3969/j.issn.1008-4754.2016.8.041

鄭吾興（1968-），男，漢族，本科，助理獸醫(yī)師，研究方向：臨床獸醫(yī)。