ELISA檢測梅毒抗體導(dǎo)致老年人產(chǎn)生假陽性的分析

朱艷萍 李彥民

（赤峰寶山中醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古 赤峰 024070）

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ELISA檢測梅毒抗體導(dǎo)致老年人產(chǎn)生假陽性的分析

朱艷萍 李彥民

（赤峰寶山中醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古 赤峰 024070）

【摘要】目的 討論使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）檢測梅毒抗體致老年人產(chǎn)生假陽性結(jié)果的原因。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分別檢測450例老年人及1912例中青年患者血清中的梅毒特異性抗體，陽性者再使用已被CDC定為確診方法的梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）診斷試劑進(jìn)行復(fù)檢確診。結(jié)果 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）法檢測出的老年組的假陽性率明顯高于中青年組，兩組間具有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論 年齡與疾病因素是造成TP-ELISA法檢測老年人梅毒特異性抗體導(dǎo)致假陽性的重要因素。

【關(guān)鍵詞】TP-ELISA；老年人；梅毒；假陽性

梅毒是一種以母嬰垂直傳播以及性傳播為主的一種傳染性疾病，主要由蒼白密螺旋體感染引起。在全球范圍內(nèi)廣泛分布，近年來全國發(fā)病率不斷上升，發(fā)病人數(shù)高居全球第五位。梅毒的診斷主要依賴病史，臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室篩查。而實(shí)驗(yàn)室檢查的項(xiàng)目包括直接查梅毒螺旋體抗體（暗視野顯微鏡.直接熒光抗體），血清學(xué)檢查（查抗體）以及梅毒螺旋體核酸測定。其中血清學(xué)檢查，特別是TP-ELISA檢測因其對IgG以及IgM的檢測能力強(qiáng)，靈敏度高，操作方法簡便而被二級醫(yī)院廣泛采用。但是，由于梅毒抗體主要是蒼白密螺旋體，故此對試劑的純度要求較高恰恰由于這個因素，導(dǎo)致試劑檢測的特異度只能達(dá)到99%左右，這就導(dǎo)致了實(shí)驗(yàn)室檢測陽性而患者并沒有臨床癥狀的情況。由于梅毒屬于性病范疇，是十分敏感的醫(yī)學(xué)問題和社會問題，錯誤的報(bào)告容易引起家庭糾紛甚至醫(yī)療糾紛，為此，筆者從2011年1月至2014年12月對此做了深入調(diào)查，結(jié)果如下。

1 對象與方法

1.1對象：在本院就診的所有門診及住院體檢病例，共2362例。其中年齡≥65歲的老年人共450例，對照組即年齡在18～60歲的病例共1912例。

1.2方法及試劑：初檢采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）。試劑盒由北京萬泰生物科技有限公司生產(chǎn)。確診試驗(yàn)采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TP-PA）方法，試劑盒為珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)。

1.3真陽性的判斷：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）和梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TP-PA）同時呈陽性反應(yīng)即為真陽性。

1.4假陽性的判斷：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）陽性而梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TP-PA）陰性，并且2周以后復(fù)查結(jié)果沒有改變的即為假陽性。

1.5儀器的選擇：酶標(biāo)儀選用深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司生產(chǎn)的RT-6000，洗板機(jī)為深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司生產(chǎn)的RT-3000。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

受檢的450例老年組患者中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）陽性者11例，其中假陽性者為9例，假陽性率為81.8%（9/11），平均S/C.O （S代表樣品孔的OD值，C.O代表臨界值，如樣品的S/C.O的計(jì)算值≥1則判定為陽性。反之，如果S/C.O的計(jì)算值＜1則判定為陰性）值為3084。真陽性兩例（均為男性），平均S/C.O值為1080，老年組中假陽性者均無臨床癥狀，也無接觸史，只有真陽性的2例患者承認(rèn)年輕時有過不潔接觸史。而中青年組的1912例患者中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）陽性的是78例，假陽性者為8例，假陽性率是10.3% （8/78），平均S/C.O值為3043，真陽性者均符合梅毒診斷行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS 273—2007）。這兩個參檢組的酶聯(lián)免疫法假陽性率差異非常大，P＜0.01，兩個參檢組間酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）檢測假陽性率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

梅毒的確診臨床表現(xiàn)是一方面，更多的也要依賴實(shí)驗(yàn)室的報(bào)告結(jié)果。梅毒螺旋體暗視野檢查是最直接的診斷方法，可是這種方法的檢出率太低所以臨床一般不常用。一般情況下，人體感染梅毒螺旋體后約14 d就能檢測出特異性抗體。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的靈敏度高于梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TP-PA），所以采用2周后復(fù)檢的方法即可避免早期感染患者因?yàn)榭贵w濃度低而被凝集法TP-PA漏檢的情況，并且本次試驗(yàn)假陽性的S/C.O值均較高基本可以排除靈敏度差異而引起的誤差［1-2］。然而我們在工作中發(fā)現(xiàn)，由于TP-ELISA實(shí)驗(yàn)影響因素較多，所以本法存在一定的假陽性，很多老年人TP-ELISA陽性，但臨床無癥狀，主訴無發(fā)病史及接觸史，且65歲以上的老年人因接觸而患病的概率非常小。筆者發(fā)現(xiàn)這2例真陽性老年患者的平均S/C.O值為1080，說明老年人可能存在梅毒螺旋體抗體。但是9例假陽性患者中，TP-PA未能檢測出梅毒螺旋體抗體，我們認(rèn)為不能單純地用TP-PA假陽性來解釋，也可能查到的本來就不是梅毒特異性抗體。由于他們沒有不潔性生活史、性病史、流產(chǎn)史、抗梅治療史，而這種差異的出現(xiàn)筆者認(rèn)為有兩種可能：一是有別的物質(zhì)干擾了ELISA的檢測，另一種因素是兩種方法的抗原有所不同。而目前的ELISA試劑盒主要是采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，在微孔條上預(yù)包被梅毒螺旋體抗體的基因重組抗原，配以酶標(biāo)記抗原及TMB顯色劑等其他試劑，檢測人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。而TP-PA試劑是由梅毒螺旋體（Nichols株）的精制菌體成分制成，它與血清中的梅毒螺旋體抗體發(fā)生凝集反應(yīng)。實(shí)際上老年人易使TP-ELISA檢測產(chǎn)生較高的假陽性，是因?yàn)殡S著年齡的增大使其生理功能慢慢退化，從而導(dǎo)致免疫功能異常或患有一系列疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、丙型肝炎、冠心病等，疾病的因素使機(jī)體誘導(dǎo)產(chǎn)生并釋放某些交叉抗原，從而干擾了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。老年人也是惡性腫瘤，糖尿病，肝硬化，風(fēng)濕性疾病等自身免疫疾病的高發(fā)人群，這些疾病也能讓老年人體內(nèi)產(chǎn)生一些治療性抗體及免疫性蛋白等，這些特殊成分在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測反應(yīng)中具有一定的吸附作用，使試驗(yàn)發(fā)生顯色反應(yīng)，從而產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

中圖分類號：R759.1；R446

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）04-0090-02