飼料中添加白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟生化指標的影響

崔培，范澤，李建，金詩語，季延濱，尤宏爭，韓雨哲

(1.天津農(nóng)學院 天津市水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖重點實驗室，天津 300384；2.天津市觀賞魚技術工程中心，天津 300042；3.天津市水產(chǎn)研究所,天津 300042；4.大連海洋大學 農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室, 遼寧 大連 116023)

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飼料中添加白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟生化指標的影響

崔培1、2，范澤1，李建1，金詩語1，季延濱1，尤宏爭3，韓雨哲4

(1.天津農(nóng)學院 天津市水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖重點實驗室，天津 300384；2.天津市觀賞魚技術工程中心，天津 300042；3.天津市水產(chǎn)研究所,天津 300042；4.大連海洋大學 農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室, 遼寧 大連 116023)

摘要:為研究白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟生化指標的影響，用添加不同水平白藜蘆醇的飼料(0、40、80、120、160、200 mg/kg)飼喂體質(zhì)量為(11.60±0.80)g的血鸚鵡14 d。試驗設6組，每組設3個平行，每個平行放25尾魚，分別于第7天和第14 天取樣測定。結果表明：飼喂7 d時，120 mg/kg組試驗魚超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)活力顯著升高(P<0.05)，丙二醛(MDA)含量顯著降低(P<0.05)，而谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活力均無顯著變化(P>0.05)；飼喂14 d時，40、80 mg/kg組試驗魚CAT活力顯著升高(P<0.05)，MDA含量顯著降低(P<0.05)，而LZM、ALT、AST活力均無顯著變化(P>0.05)。研究表明，飼料中添加適量的白藜蘆醇可提高血鸚鵡肝臟抗氧化能力，減輕肝損傷，提高溶菌酶活力，建議添加量為120 mg/kg，連續(xù)喂食7 d。

關鍵詞:血鸚鵡；白藜蘆醇；生化指標

血鸚鵡又名紅財神、財神魚和發(fā)財魚，屬于淡水熱帶觀賞魚類，是由紅魔鬼Amphilophuslabiatus雄魚和紫紅火口CichlasomasynspilumHubbs雌魚雜交所得的新品種。因其體態(tài)飽滿、體色艷麗，且食性雜，易于飼養(yǎng)，在觀賞魚市場上極受歡迎。

白藜蘆醇(Resveratrol)是一種非黃酮類多酚化合物，化學名為3,4’,5-三羥基-反式-二苯乙烯(3,4’,5-trihydroxy-trans-stilbene)，最早在毛葉藜醇的根部發(fā)現(xiàn)并提取出來[1]，隨后相繼在中國傳統(tǒng)藥用植物虎杖的根部以及花生、決明、桑葚和葡萄的果皮等 70 多種植物中都發(fā)現(xiàn)了白藜蘆醇[2-3]。白藜蘆醇具有多種生物活性，如抗氧化、抗衰老[4]、抗炎癥[5-6]、抗腫瘤[7]、抗菌[8]、保護肝臟[9]、保護心血管系統(tǒng)[10]等。已有許多研究證實，在線蟲、酵母等無脊椎動物和假鰓鳉、鼠類等脊椎動物中，白藜蘆醇都能夠發(fā)揮其生物活性作用。朱立賢等[11]對高血脂癥大鼠的研究發(fā)現(xiàn)，高劑量白藜蘆醇可以顯著降低其肝臟脂質(zhì)水平，提高肝臟蛋白脂酶及肝脂酶活性；Liu等[12]對小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)白藜蘆醇處理后小鼠大腦中的 超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性顯著升高，脂質(zhì)過氧化水平顯著降低；Yu等[13]在對貢氏假鰓鳉的研究中也發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可以有效降低其肝臟中脂褐素的積累量。目前，有關白藜蘆醇作為飼料添加劑對血鸚鵡肝臟生理生化指標的影響的研究尚未見報道。本試驗中，通過對血鸚鵡投喂5種添加不同白藜蘆醇水平的飼料，對血鸚鵡進行2周的飼養(yǎng)試驗，測定其肝臟生理生化指標等的變化，以期為白藜蘆醇作為飼料添加劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的合理使用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

試驗用500尾血鸚鵡幼魚取自天津市凱瑞淡水養(yǎng)殖有限公司。白藜蘆醇購自西安草翠芯生物科技有限公司，純度為98%。

1.2方法

1.2.1試驗飼料的制備以天祥飼料添加劑有限公司的血鸚鵡飼料為底料，配制6種不同白藜蘆醇含量的飼料。飼料底料經(jīng)粉碎后，分別添加0、40、80、120、160、200 mg/kg白藜蘆醇，用制粒機擠壓成直徑為1.5 mm的顆粒料，自然風干后裝入自封袋中，置于冰箱(-20 ℃)中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2試驗設計先將血鸚鵡幼魚在天津農(nóng)學院天津市水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖重點實驗室暫養(yǎng)2周。暫養(yǎng)期間，投喂基礎飼料(不添加白藜蘆醇)，待適應實驗室條件后，選取體格健壯、規(guī)格基本一致的個體，放置在18個藍色塑料水箱(70 cm×50 cm×45 cm)中，試驗設6組，每組設3個平行，每箱放25尾魚(初始體質(zhì)量為11.60 g±0.80 g)。每天10:00和17:00定時投喂，投喂量為魚體質(zhì)量的3%，每天換水一次，換水量為1/3，投喂1 h后清除箱體內(nèi)的殘餌和糞便。試驗用水為經(jīng)24 h曝氣的自來水，水溫為(27±1)℃，24 h不間斷充氣，試驗周期為14 d。

1.2.3樣品的采集于試驗開始后第7天和第14天時從各箱隨機取10尾試驗魚，用MS-222麻醉后于冰盤解剖取其肝臟，用4 ℃預冷的去離子水沖洗干凈，按質(zhì)量(g)與體積(L)為1∶9的比例加入預冷純水，在玻璃勻漿器中勻漿，制成體積分數(shù)為10%的勻漿，4 ℃下以3500 r/min離心10 min，取上清液于超低溫冰箱(-80 ℃)中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4試驗指標的測定采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、溶菌酶(LZM)活力和丙二醛(MDA)含量。

1.3數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用Excel軟件計算平均值和標準差，并以平均值±標準誤表示。用SPSS 17.0 軟件進行單因素方差分析(ANOVA)，采用Duncan法進行多重比較，顯著性水平設為0.05。

2結果與分析

2.1各組血鸚鵡生化指標的變化

從表1可見：飼料中不同水平的白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟SOD活力、CAT活力和MDA含量均有一定影響。白藜蘆醇添加水平為40 mg/kg時，飼喂7 d和14 d時，血鸚鵡肝臟SOD活力均無顯著變化(P>0.05)，而飼喂14 d時CAT活力顯著升高(P<0.05)，MDA含量顯著降低(P<0.05)；白藜蘆醇添加水平為80 mg/kg時，飼喂7 d和14 d時，肝臟CAT活力顯著升高，MDA含量顯著降低(P<0.05)；白藜蘆醇添加水平為120 mg/kg時，飼喂7 d時，肝臟SOD 活力顯著升高，MDA含量顯著降低(P<0.05)，飼喂14 d時，CAT活力顯著升高，MDA含量顯著降低(P<0.05)；白藜蘆醇添加水平為160 mg/kg時，僅在飼喂14 d時肝臟MDA含量顯著低于對照組(P<0.05)；白藜蘆醇添加水平為200 mg/kg時，僅在飼喂14 d時SOD活力顯著低于對照組(P<0.05)，而MDA含量顯著高于對照組(P<0.05)。

表1　飼料中不同水平的白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟抗氧化指標的影響

注：同列中標有不同小寫字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05)，標有相同小寫字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05)，下同

Note:The means with different letters within the same column are significant differences at the 0.05 probability level, and the means with the same letters within the same column are not significant differences, et sequentia從表2可見：飼料中不同水平的白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟LZM有顯著影響，白藜蘆醇添加水平為80、120、200 mg/kg時，飼喂7 d時，LZM活力顯著高于對照組(P<0.05)，其他各組與對照組無顯著性差異(P>0.05)，而飼喂14 d時，白藜蘆醇各添加組LZM活力均顯著高于對照組(P<0.05)。

2.2各組血鸚鵡肝臟轉(zhuǎn)氨酶的變化

從表2可見：飼喂7 d時，各試驗組血鸚鵡肝臟ALT活力與對照組均無顯著性差異(P>0.05)，飼喂14 d時，僅添加水平為120 mg/kg組血鸚鵡肝臟ALT活力顯著降低(P<0.05)；白藜蘆醇添加水平為40~120 mg/kg時，對肝臟AST活力無顯著影響(P>0.05)，白藜蘆醇添加水平為160、200 mg/kg時，AST活力均顯著升高(P<0.05)。

表2　飼料中不同水平的白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟轉(zhuǎn)氨酶和溶菌酶活力的影響

3討論

3.1白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟生化指標的影響

SOD、CAT是生物體抗氧化酶系的重要組成酶類，對生物體內(nèi)活性氧自由基的清除起著關鍵的作用；MDA則是過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物，可導致機體細胞損傷，其含量?？煞从硻C體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，是肝臟損傷的反應指標。檢測這些指標可以綜合地判定生物機體的抗氧化與免疫情況[14]。

白藜蘆醇是廣泛存在于蓼科、豆科、百合科等植物中的一種多酚類化合物，以中藥虎杖中含量最高。研究發(fā)現(xiàn)，用富含白藜蘆醇的中藥如虎杖、首烏可治療和預防高血脂癥、動脈硬化，長期飲用含白藜蘆醇的紅葡萄酒可降低人血清脂質(zhì)水平，降低患心血管疾病的幾率[15]。呂秀萍[16]研究發(fā)現(xiàn)，用白藜蘆醇處理后大鼠SOD活性顯著增加，MDA含量明顯減少，具有明顯改善機體氧化應激水平、控制糖尿病并發(fā)癥發(fā)生的作用。原江水[17]對老齡Wistar大鼠的研究發(fā)現(xiàn)，口服適量的白藜蘆醇可在不影響其體質(zhì)量和血液相關指標的情況下，增強其體液免疫應答和細胞免疫應答，從而起到免疫調(diào)節(jié)和保護作用。在水產(chǎn)動物方面，王慶奎等[18]用富含白藜蘆醇的虎杖飼料飼喂斑點叉尾鮰，結果發(fā)現(xiàn)，富含白藜蘆醇的飼料可以有效提高斑點叉尾鮰肝臟SOD、CAT活力。劉亭亭[19]在對貢氏假鰓鳉的研究中發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇同樣可以減緩由于年齡誘導的抗氧化酶活性降低的趨勢，經(jīng)白藜蘆醇處理后，貢氏假鰓鳉抗氧化酶活性均升高，抗氧化防御系統(tǒng)清除自由基的能力變強。本試驗結果與上述研究結果相類似，白藜蘆醇添加水平為120 mg/kg時，投喂7 d時即可顯著提高SOD活力，降低MDA含量，提高其抗氧化能力。

LZM是廣泛存在于魚類各種體液、血清和巨噬細胞中的一種水解酶，是生物機體內(nèi)重要的非特異性免疫因子，有抗感染、增強抗生素效力、抗腫瘤和抗病毒等作用[20-21]，是魚生理防御水平的一個重要標志，也可以體現(xiàn)病原菌及其他環(huán)境因素對魚體健康的影響。血清及免疫器官組織的溶菌酶活性提高，其免疫能力也相應提高。在水產(chǎn)養(yǎng)殖領域中，LZM常被用來廣泛評價免疫促進劑的作用效果[22]。本研究中，在飼料中添加白藜蘆醇可以有效提高血鸚鵡肝臟LZM活性，投喂添加白藜蘆醇的飼料7 d時，除80、200 mg/kg兩組外，LZM活力均顯著高于對照組，投喂14 d時各組LZM活力均顯著高于對照組，說明一定量的白藜蘆醇可以有效提高血鸚鵡的免疫能力。

3.2白藜蘆醇對血鸚鵡肝臟轉(zhuǎn)氨酶的影響

機體內(nèi)許多臟器和組織(心臟、骨骼肌和肝臟等)中都含有ALT和AST。ALT主要存在于肝細胞胞漿中，而AST主要分布于肝細胞漿和肝細胞線粒體中[23]，肝臟中AST和ALT酶活力的增減可以反映肝臟中毒或病理的變化。朱立賢等[11]研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇劑量為70 mg/kg時，可明顯降低高脂血癥大鼠血清中AST、ALT活力。本研究中，投喂白藜蘆醇飼料7 d時，40～120 mg/kg組血鸚鵡肝臟ALT、AST活力與對照組無顯著性差異，說明在飼料中適量添加白藜蘆醇未對血鸚鵡肝臟造成不良影響。

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Effects of dietary resveratrol levels on biochemical parameters in liver

of blood parrotAmphilophuslabiatus♂×Cichlasomasynspilum♀

CUI Pei1,2, FAN Ze1, LI Jian1, JIN Shi-yu1, JI Yan-bin1, YOU Hong-zheng3, HAN Yu-zhe4

(1.Tianjin Key Laboratory of Aqua-ecology and Aquaculture, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China; 2.Tianjin Ornamental Fish Technology Engineering Centre, Tianjin 300042, China; 3.Tianjin Fisheries Research Institute, Tianjin 300042, China; 4.Key Laboratory of Mariculture & Stock Enhancement in North China’s Sea, Ministry of Agriculture, Dalian Ocean University, Dalian116023, China)

Abstract:A feeding trial was conducted to investigate the effects of dietary resveratrol levels on biochemical parameters in liver of blood parrot Amphilophus labiatus♂× Cichlasoma synspilum♀ with initial body weight of (11.60±0.80) g at water temperature of (24±1)℃. Fish were reared in 18 blue plastic tanks of each 70 cm × 50 cm × 45 cm and fed diets containing resveratrol at a rate of 0，40，80，120，160，and 200 mg/kg to apparent satiation for 14 days. The results showed that the activities of superoxide dismutase (SOD) and lysozyme (LZM) were found to be significantly increased and malonaldehyde (MDA) content decreased significantly in the fish fed the diet containing resveratrol at 120 mg/kg for 7 d(P<0.05). There were no significant differences in activities of glutamate-pyruvate transaminase (ALT) and glutamate-oxaloacetate transaminase (AST) in the fish fed the diet containing resveratrol at 120 mg/kg for 7 days and 14 days(P>0.05). The significant increase in CAT activity and decrease in MDA level were observed in the fish fed the diets containing resveratrol at 40 and 80 mg/kg for 14 d(P<0.05), without significant increase in activities of ALT，AST and LZM(P>0.05). The findings indicated that resveratrol led to improvement of antioxidant capacity, and reduction in liver injury at the recommended dietary dose of 120 mg/kg for 7 d.

Key words：blood parrot; resveratrol; biochemical parameter

通信作者：韓雨哲(1984—)， 男， 講師， 博士。E-mail:hanyuzhe1234@hotmail.com

作者簡介：崔培(1985—)， 女， 實驗師。E-mail:icp7410@hotmail.com

基金項目：科技部星火項目(2011GA610005)；天津市科技支撐項目(14ZCZDNC00010)；天津市大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201410061121)

收稿日期：2014-06-01

中圖分類號：S963.7

文獻標志碼：A

文章編號：2095-1388(2015)02-0203-04

DOI：10.3969/J.ISSN.2095-1388.2015.02.017