血塞通軟膠囊活血化瘀的藥效學(xué)研究

郭沛鑫張　超陳清華劉承明陳　普*.云南中醫(yī)學(xué)院，云南　昆明　650500; .昆明圣火藥業(yè)集團(tuán)有限公司，云南　昆明　6507

血塞通軟膠囊活血化瘀的藥效學(xué)研究

郭沛鑫1張超1陳清華1劉承明2陳普1*
1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500; 2.昆明圣火藥業(yè)集團(tuán)有限公司，云南昆明650217

【摘要】目的:對血塞通軟膠囊活血化瘀的作用進(jìn)行藥效學(xué)評價.方法:采用血塞通軟膠囊灌胃給藥7d，頸動脈采血觀察血塞通軟膠囊對正常大鼠血小板聚集及凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響;采用冰水浴聯(lián)合皮下注射鹽酸腎上腺素的方法制備血瘀大鼠模型，觀察血塞通軟膠囊對血瘀大鼠血小板聚集及凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響.結(jié)果:血塞通軟膠囊(56、28mg/kg)能顯著抑制正常大鼠及血瘀大鼠血小板聚集(P＜0. 05)，同時血塞通軟膠囊(56mg/kg)能明顯延長血瘀大鼠TT和APTT，減少FIB(P＜0. 05).但血塞通軟膠囊(56、28、14mg/kg)對正常大鼠凝血四項(xiàng)指標(biāo)均無明顯的影響(P＞0. 05).結(jié)論:血塞通軟膠囊具活血化瘀作用，其活血化瘀作用可能對視網(wǎng)膜中央靜脈栓塞有治療作用.

【關(guān)鍵詞】血塞通軟膠囊;血小板聚集;凝血四項(xiàng);視網(wǎng)膜中央靜脈栓塞

Experimental study of the Xuesaitong soft capsule on platelet aggregation and four blood coagulation parmeters in rats

GUO Pei－xin1，ZHANG Chao1，CHEN Qing－h(huán)ua1，LIU Cheng－ming2，CHEN Pu1*
1. Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500，China; 2. Kunming Shenghuo Pharmaceutical Holdings Inc，Kunming 650217，China

Abstract:Objective To observe the effect of Xuesaitong soft capsule(XST)on platelet aggregation and four blood coagulation parmeters in normal and blood stasis rats，and provide the experimental basis for the treatment of central retinal vein occlusion．Methods Xuesaitong soft capsule i．g．in rats for 7days．Carotid artery blood in normal rats was used to assay platelet aggregation and four blood coagulation parmeters．The blood stasis rat model were established by epinephrine hydrochloride subcu－taneous injection and ice water immertion．Platelet aggregation and four blood coagulation parmeters in blood stasis rats were observed．Results XST(56、28mg/kg)could obviously prevent platelet aggregation in normal and blood stasis rats(P＜0. 05)．XST(56mg/kg)could significantly increase the time of TT and APTT(P＜0. 05)，and reduce the content of FIB in blood stasis rats(P＜0. 05)．But XST(56、28、14mg/kg)had no effect on four blood coagulation parmeters in normal rats(P＞0. 05)．Conclusion XST can improve the platelet aggregation and four blood coagulation parmeters in the hypercoagulable state，and indicate that XST has the treatment effect of central retinal vein occlusion．

Key words:Xuesaitong soft capsule; platelet aggregation; four blood coagulation parmeters; central retinal vein occlusion

血塞通軟膠囊為臨床常用活血化瘀類中成藥，具有活血祛瘀、通脈活絡(luò)的功效.臨床用于瘀血閉脈絡(luò)證的中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)恢復(fù)期，癥見偏癱、半身不遂、口舌歪斜、舌強(qiáng)言蹇或不語.或用于心血淤阻型冠心病心絞痛，證見胸悶、胸痛、心慌、舌紫暗或有瘀斑.近年來，亦有文獻(xiàn)報(bào)道血塞通用于治療視網(wǎng)膜中央靜脈栓塞，取得良好治療效果[1]，但未見足夠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持.本課題組前期研究表明，血塞通軟膠囊對家兔眼球微循環(huán)障礙和血瘀大鼠血液流變學(xué)均有良好的改善作用.視網(wǎng)膜中央靜脈栓塞本質(zhì)上屬于血栓性疾病，與血小板聚集、凝血功能障礙等密切相關(guān).因此，本研究針對上述癥狀設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，對血塞通軟膠囊活血化瘀的功效進(jìn)行藥效學(xué)研究，有利于進(jìn)一步闡明血塞通軟膠囊治療視網(wǎng)膜中央靜脈栓塞的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，擴(kuò)大血塞通軟膠囊的適應(yīng)癥，以期更好的指導(dǎo)臨床用藥.

1　材料與方法

1. 1試驗(yàn)藥物血塞通軟膠囊(批號: 20100915，昆明圣火藥業(yè)(集團(tuán))有限公司提供)，臨用時以0. 5%的吐溫溶液配制;復(fù)方血栓通膠囊(批號: 100716，廣東眾生藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn));阿司匹林腸溶片(批號: 20100681，昆明云健制藥有限公司生產(chǎn)).

1. 2動物健康SD大鼠，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號: SCXK(滇)2005－0008;健康昆明種小鼠，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號: SCXK(滇)2005－0008.

1. 3試劑烏來糖(烏拉坦)(批號: T20080917，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);鹽酸腎上腺素注射液(批號: 1002071，天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司);Ⅰ型膠原蛋白(Sigma公司產(chǎn));肝素鈉注射液(批號: 1004107，江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司);伊文思藍(lán)(東京化成工業(yè)株式會社);其余試劑均為分析純.

1. 4儀器C2000－4四通道磁珠法血凝儀(北京普利生儀器有限公司); LBY－NJ4血小板聚集儀(四通道)(北京普利生儀器有限公司); L500型離心機(jī)(湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司).

1. 5方法

1. 5. 1血塞通軟膠囊對正常大鼠血小板聚集及凝血四項(xiàng)指

標(biāo)的影響[2－3]取健康SD大鼠70只，雌雄各半，體重180 ～220g，按體重隨機(jī)分為7組，每組10只，即空白對照組、吐溫溶劑組、阿司匹林組(11. 67mg/kg)、復(fù)方血栓通膠囊組(525mg/kg)、血塞通軟膠囊高劑量組(56mg/kg)、中劑量組(28mg/kg)、低劑量組(14mg/kg).各組動物按上述劑量灌胃給藥，空白對照組灌胃相同體積純水，吐溫溶劑組灌相同體積的吐溫溶劑，每日1次，連續(xù)7d，末次給藥后1h，各組動物以烏拉坦按1g/kg的劑量腹腔注射進(jìn)行麻醉，固定于解剖板上，行頸總動脈插管采血.將采得血液分為二份，一份以3. 8%枸櫞酸鈉按9∶1(全血∶3. 8%枸櫞酸鈉)的比例抗凝，800r/min，離心10min，分離富血小板血漿(PRP)，余下抗凝血再以3000r/min，離心10min，分離貧血小板血漿(PPP).以I型膠原為血小板聚集誘導(dǎo)劑，按血小板聚集儀操作說明測定各組動物的血小板聚集率;另一份以3. 8%枸櫞酸鈉抗凝(全血∶3. 8%枸櫞酸鈉=9∶1)，充分混合，3000r/min，離心10min，分離血漿，以血凝儀測定凝血四項(xiàng)指標(biāo)PT、TT、APTT、FIB，以此評價藥物的抗凝血作用.

1. 5. 2血塞通軟膠囊對血瘀大鼠血小板聚集及凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響取健康SD大鼠80只，雌雄各半，體重180～220g，按體重分層隨機(jī)分為8組，即空白對照組、模型對照組、吐溫溶劑組、阿司匹林組(11. 67mg/kg)、復(fù)方血栓通膠囊組(525mg/kg)、血塞通軟膠囊高劑量組(56mg/kg)、中劑量組(28mg/kg)、低劑量組(14mg/kg).各組動物按上述劑量灌胃給藥，空白對照組、模型對照組灌胃相同體積純水，吐溫溶劑組灌相同體積0. 5%的吐溫溶劑，1次/d，連續(xù)7d.除空白對照組以外的各組動物于第6天灌胃給藥1h后皮下注射腎上腺素0. 8mg/kg，注射腎上腺素2h后，將動物放入冰水中浸泡5min(冰水溫度控制在4℃±1℃)，2h后再次皮下注射腎上腺素0. 8mg/kg，造成血瘀證模型[4].第7天末次給藥后1h，各組動物以烏拉坦按1g/kg的劑量腹腔注射進(jìn)行麻醉，固定于解剖板上，行頸總動脈插管采血.同法測定血小板聚集及凝血四項(xiàng)指標(biāo).

1. 5. 3統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(x±s)表示，采用SPSS13. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布時進(jìn)行單因素方差分析，不呈正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗(yàn).

2　結(jié)果

2. 1血塞通軟膠囊對正常大鼠血小板聚集及凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在對正常大鼠血小板聚集的影響實(shí)驗(yàn)中(表1)，與空白對照組比較，陽性藥阿司匹林組和復(fù)方血栓通膠囊組能明顯抑制大鼠血小板聚集(P＜0. 01)，同時，血塞通軟膠囊高、中劑量組(56、28mg/kg)均對大鼠血小板聚集有顯著的抑制作用(P＜0. 05)，血塞通軟膠囊低劑量組(14mg/kg)雖然也有抑制血小板聚集的趨勢，但與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0. 05).在對正常大鼠凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響實(shí)驗(yàn)中(表2)，與空白對照組比較，阿司匹林能明顯延長大鼠的PT值(P ＜0. 01)，血塞通軟膠囊高、中、低劑量組(56、28、14mg/kg)對凝血四項(xiàng)指標(biāo)PT、TT、APTT、FIB無明顯影響(P＞0. 05).吐溫溶劑組對血小板聚集和凝血四項(xiàng)指標(biāo)均無明顯影響，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0. 05).結(jié)果見表1、表2.

表1　血塞通軟膠囊對正常大鼠血小板聚集的影響(x±s，n =10)

表2　血塞通軟膠囊對正常大鼠凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響(x±s，n =10)

2. 2血塞通軟膠囊對血瘀大鼠血小板聚集及凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對照組比較，模型對照組大鼠血小板聚集率明顯升高(P＜0. 05)，TT、APTT明顯縮短(P＜0. 05)，F(xiàn)IB明顯增加(P＜0. 05)，提示采用冰水浴聯(lián)合皮下注射鹽酸腎上腺素的方法制備血瘀大鼠模型成功.在對血瘀證大鼠血小板聚集的影響實(shí)驗(yàn)中(表3)，與模型對照組比較，復(fù)方血栓通膠囊組對血瘀大鼠血小板聚集具有明顯抑制作用(P＜0. 05)，同時，血塞通軟膠囊高、中劑量組(56、28mg/kg)均能顯著抑制血瘀證大鼠血小板聚集(P＜0. 05)，血塞通軟膠囊低劑量組(14mg/kg)對血小板聚集無明顯影響(P＞0. 05);在對血瘀證大鼠凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響實(shí)驗(yàn)中(表4)，與模型對照組比較，阿司匹林能明顯延長APTT(P＜0. 05)，減少FIB(P＜0. 05)，復(fù)方血栓通膠囊能明顯延長TT(P＜0. 05)，減少FIB(P＜0. 05)，同時，血塞通軟膠囊高劑量(56mg/kg)能明顯延長TT和APTT，減少FIB(P＜0. 05)，血塞通軟膠囊中、低劑量組(28、14mg/kg)對凝血四項(xiàng)指標(biāo)無明顯影響(P＞0. 05).吐溫溶劑組對血瘀證大鼠血小板聚集和

凝血四項(xiàng)指標(biāo)均無明顯影響，與模型對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0. 05).結(jié)果見表3、表4.

表3　血塞通軟膠囊對血瘀證大鼠血小板聚集的影響(x±s，n =10)

注:與模型對照組比較，*P＜0. 05.

3　討論

視網(wǎng)膜中央靜脈栓塞是臨床上常見的視網(wǎng)膜血管疾病，患病人群約為0. 7%～1. 6%[5].栓塞多發(fā)生在篩板或緊鄰其后的視網(wǎng)膜中央靜脈內(nèi)，大多為血栓形成[6].而血小板的活化、聚集在血栓形成和發(fā)展過程過起著重要作用，在臨床上，許多血栓性疾病如心腦血管疾病等的血小板聚集率增高早已被人們所認(rèn)識，因此，進(jìn)行血小板功能的測定是相當(dāng)必要的，其血小板聚集功能亢進(jìn)提示其可能與血栓性疾病有關(guān).同時，血液高凝狀態(tài)、凝血、止血，是臨床最常遇到的情況.血栓前狀態(tài)和血栓疾病的檢查都離不開對凝血狀態(tài)的了解.

表4　血塞通軟膠囊對血瘀證大鼠凝血四項(xiàng)指標(biāo)的影響(x±s，n =10)

研究結(jié)果表明，血塞通軟膠囊高劑量組和中劑量組(56、28mg/kg)能顯著抑制正常大鼠和血瘀證大鼠的血小板聚集(P＜0. 05)，其高劑量組(56mg/kg)能明顯延長血瘀證大鼠凝血四項(xiàng)中的TT和APTT，減少FIB(P＜0. 05)，但血塞通軟膠囊(56、28、14mg/kg)對正常大鼠凝血四項(xiàng)指標(biāo)無明顯改變(P＞0. 05).結(jié)果提示血塞通軟膠囊抗血小板聚集和改善凝血四項(xiàng)指標(biāo)的作用可能是其治療視網(wǎng)膜中央靜脈栓塞的機(jī)制之一.其改善凝血四項(xiàng)指標(biāo)僅在血液高凝狀態(tài)下起作用，對正常血液狀態(tài)卻無影響，這在臨床治療上有一定意義.

參考文獻(xiàn)

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收稿日期:( 2014. 11. 25)

通信作者:陳普(1978－)，男，漢族，云南宣威人，高級實(shí)驗(yàn)師.主要從事民族醫(yī)藥研究及實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作.E－mail: chenynkm@126. com

基金項(xiàng)目:云南省重點(diǎn)學(xué)科“民族醫(yī)學(xué)”學(xué)科資助(100513).

【文章編號】1007－8517(2015)02－0017－03

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類號】R285. 5