HPLC法測(cè)定烏蘭溫都蘇－10膠囊中丹酚酸B的含量

李洪澤王玉華韓風(fēng)雨孔新穎劉福青劉　霞.內(nèi)蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司，內(nèi)蒙古　0000; ．內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，內(nèi)蒙古　0000;.內(nèi)蒙古天奇藥業(yè)投資(集團(tuán))有限公司，內(nèi)蒙古　0000; .內(nèi)蒙古赤峰陸爾草中蒙藥科技有限公司，內(nèi)蒙古　0000;.內(nèi)蒙古蒙吉藥業(yè)科技有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古　0000; ．內(nèi)蒙古博泰現(xiàn)代蒙藥制劑研究開發(fā)有限公司，內(nèi)蒙古　0000

HPLC法測(cè)定烏蘭溫都蘇－10膠囊中丹酚酸B的含量

李洪澤1王玉華2韓風(fēng)雨3孔新穎4劉福青5劉霞6
1.內(nèi)蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司，內(nèi)蒙古024000; 2．內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，內(nèi)蒙古024000;
3.內(nèi)蒙古天奇藥業(yè)投資(集團(tuán))有限公司，內(nèi)蒙古024000; 4.內(nèi)蒙古赤峰陸爾草中蒙藥科技有限公司，內(nèi)蒙古024000;
5.內(nèi)蒙古蒙吉藥業(yè)科技有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古024000; 6．內(nèi)蒙古博泰現(xiàn)代蒙藥制劑研究開發(fā)有限公司，內(nèi)蒙古024000

【摘要】目的:建立高效液相色譜法測(cè)定烏蘭溫都蘇－10膠囊中丹酚酸B含量的方法.方法:采用HPLC法，色譜柱為迪馬C18柱(5μm，4. 6mm×250mm).以含0. 017%甲酸溶液為流動(dòng)相A，以甲醇－乙腈(30∶10)為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫，流速為1. 0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm.結(jié)果:丹酚酸B在117. 02～1170. 2ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r =1. 0000，平均回收率為101. 0%，RSD為1. 88%.結(jié)論:該測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于烏蘭溫都蘇－10膠囊的質(zhì)量控制.

【關(guān)鍵詞】烏蘭溫都蘇－10膠囊;丹酚酸B; HPLC

烏蘭溫都蘇－10膠囊是由十味中蒙藥材組成，功效主治:調(diào)心“赫依”、血相搏、活血、安心、化脂.用于心煩、心區(qū)刺痛，心供血不足等.丹參為處方中的君藥.本實(shí)驗(yàn)以丹酚酸B為檢測(cè)指標(biāo)，用HPLC法進(jìn)行測(cè)定.在經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定了提取條件和色譜條件的前提下，進(jìn)行了方法學(xué)考察.

1　儀器與試劑

1. 1儀器日本－2000高效液相色譜儀，檢測(cè)器: DAD檢測(cè)器，工作站: EZChrom Elite for Hitachi Version.

1. 2試劑與試藥烏蘭溫都蘇－10膠囊(批號(hào): 20100804，內(nèi)蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司);丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào): 111562－200807，中國(guó)藥品生物制品檢定所);甲醇、乙腈為色譜純;水為超純水;其它試劑均為分析純.

2　方法與結(jié)果

2. 1色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以含0. 017%甲酸溶液為流動(dòng)相A，以甲醇－乙腈(30∶10)為流動(dòng)相B，按下表中規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速: 1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng): 286nm;柱溫: 30℃.理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于4000.

時(shí)間(min)　　流動(dòng)相A　　流動(dòng)相B 0～23　60　40 23～28　0　100 28～45　0　100 45～47　60　40 47～60　60　40

2. 2溶液的制備

2. 2. 1對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加75%甲醇制成每1ml含丹酚酸B 60μg的溶液，即得.

2. 2. 2供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，混勻，取約0. 25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加75%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率220w，頻率40KHz)30min，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得.

2. 2. 3陰性樣品溶液的制備取缺丹參的其他藥材，按本品制備工藝，制備陰性樣品.精密稱取陰性樣品適量，按“供試品溶液的制備方法”制成陰性溶液.

2. 3方法學(xué)考察

2. 3. 1專屬性試驗(yàn)分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液照溶液各10μl，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定.結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間處有相應(yīng)的色譜峰，而陰性對(duì)照溶液中相應(yīng)保留時(shí)間處沒(méi)有色譜峰.方法的專屬性好.色譜圖見圖1.

圖1　專屬性試驗(yàn)色譜圖

2.3.2線性范圍考察精密稱取丹酚酸B對(duì)照品3.01mg(含量為97.2%)，置5ml量瓶中，加75%甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取1ml濃溶液到10ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度.精密吸取2、5、10、15、20μl，分別注入液相色譜儀中，按“色譜條件”條件測(cè)定，記錄丹酚酸B峰面積積分值(Y).以進(jìn)樣量(X:μg)對(duì)峰面積積分值(Y)進(jìn)行回歸分析.回歸方程為: Y =4193.9X +5200.6，R =1.0000，丹酚酸B在117.02 ～1170.2ng范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系.

2. 3. 3精密度試驗(yàn)

2. 3. 3. 1對(duì)照品精密度試驗(yàn)丹酚酸B對(duì)照品溶液(濃度為58. 51μg/ml)，進(jìn)樣10μl，按“2. 1色譜條件”項(xiàng)下方法測(cè)定.結(jié)果見表1.

表1　對(duì)照品精密度試驗(yàn)結(jié)果

表1的結(jié)果表明，RSD為1. 35%，說(shuō)明丹酚酸B對(duì)照品溶液精密度好.2. 3. 3. 2供試品精密度試驗(yàn)取本品(批號(hào): 20100804)約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，超聲提取30min，過(guò)濾，取續(xù)濾液2ml定容到5ml的量瓶中，以75%甲醇稀釋至刻度，按以上色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得丹酚酸B峰面積積分值.結(jié)果見表2.

表2　供試品精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2的結(jié)果表明，RSD為1. 75%，說(shuō)明供試品溶液測(cè)定的精密度好.

2. 3. 4穩(wěn)定性試驗(yàn)取本品約0. 25g，精密稱定，按“2. 2. 2供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法制備溶液，分別于0、2、4、8、12、24、48h進(jìn)樣，記錄峰面積積分值.結(jié)果見表3.

表3　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表3的結(jié)果表明，供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定.

2. 3. 5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次供試品粉末(批號(hào): 20100806)6份，每份取樣量約0. 25g，精密稱定，按“2. 2. 2供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法制備溶液，進(jìn)樣10μl，按“2. 1色譜條件”條件測(cè)定，計(jì)算含量.結(jié)果見表4.

2. 3. 6加樣回收試驗(yàn)精密稱取供試品(批號(hào): 20100806;含量為10. 57mg/g)約0. 1250g，共9份，精密稱定，分成3組，每組3份.分別精密加入丹酚酸B對(duì)照品1. 069、1. 069、1. 069、1. 306、1. 306、1. 306、1. 603、1. 603、1. 544mg.按“2. 2. 2供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法制備溶液，進(jìn)樣10μl，按“2. 1色譜條件”條件測(cè)定，計(jì)算加樣回收率.結(jié)果見表5.

表4　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表4的數(shù)據(jù)表明，供試品測(cè)定的重復(fù)性好.

表5　加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表5的結(jié)果顯示，RSD為1. 88%，平均回收率101. 0%，表明方法的準(zhǔn)確度好.

2. 4供試品的測(cè)定取三批上市包裝條件的中試樣品(批號(hào): 20100805、20100806、20100807)，按“2. 2. 2供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法制備溶液，進(jìn)樣10μl，按“2. 1色譜條件”條件測(cè)定，計(jì)算含量.結(jié)果見表6

表6　三批供試品含量測(cè)定結(jié)果

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三批樣品的含量沒(méi)有明顯差異.

2. 5含量限度制定經(jīng)測(cè)定丹參藥材中丹酚酸B(C36H30O16)含量為68. 8mg/g，三批供試品的均含量平均為10. 97mg/g，按丹參藥材含量68. 8mg/g計(jì)算轉(zhuǎn)移率為59. 63%.《中國(guó)藥典》2010年版一部“丹參”[1]藥材含量測(cè)定項(xiàng)下規(guī)定含丹酚酸B不得少于3. 0%，考慮到藥材的來(lái)源、貯藏以及在生產(chǎn)中損耗等因素，暫定為本品每粒含丹參以丹酚酸B(C36H30O16)計(jì)，不得少于1. 7mg.

3　討論

3. 1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇藥典及有關(guān)文獻(xiàn)采用HPLC法測(cè)定單藥材及成方制劑中丹酚酸B的含量，檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm.本實(shí)驗(yàn)在200～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)丹酚酸B對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜掃描，光譜圖中287nm處有最大吸收.

3. 2提取方法的選擇[1－5]比較了超聲提取、加熱回流提取、索氏提取、冷浸提取四種方法，及75%甲醇、75%乙醇為提取溶液，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，超聲提取效率高，且方法簡(jiǎn)便，故選擇用超聲提取方法.通過(guò)考察超聲時(shí)間，超聲30min即可提取完全.

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典(一部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

[2]黃湘，劉丹，文萍．測(cè)定丹七片中丹酚酸B的含量[J]．現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2007，21(6): 43－45．

[3]李寧，徐文進(jìn)，高崇凱．HPLC法測(cè)定丹參酚酸滲透泵片中丹酚酸B的含量[J]．廣東藥學(xué)院藥學(xué)報(bào)，2008，24(5): 469－471．

[4]黃旭慧．HPLC法測(cè)定丹黃顆粒中丹酚酸B的含量[J]．海峽藥學(xué)，2008，20(12): 41－42．

[5]房海燕，林桂濤，李濤．HPLC法測(cè)定冠心丹參片中丹酚酸B的含量[J]．山東輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，20(2): 70－71．

收稿日期:( 2014. 10. 13)

【文章編號(hào)】1007－8517(2015)02－0012－03

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類號(hào)】R284. 1